家兔玻璃体液微量取样与一次取样的比较

家兔玻璃体液微量取样与一次取样的比较 家兔玻璃体液微量取样与一次取样的比较 【摘要 1目的 比较微量取样与一次取样的优劣。方法 36只家兔分为4 组 (每组 9只 )，于死后 12 h 取样： i组于一次取出所有 vh； ii组微量取样 50 l，连续取 15 次； iii 组左眼一次取样。右眼微量重复取样。 iv组双眼第 1 次微量取样剩余一次取出。检测 ca2+cl 、 l(+、na 和 p 等含量，数据统计分析。结果 iii 组左右眼、 (iv)组先后两次取样配对 t 检验无差异 (p>；0 05)，各组微量取样样本的变异系数、双眼差较小。结论 微量 取样的操作影响较小、稳定性和重复性好 更适合法医学研究和应用。【关键词】尸体化学；玻璃体液：取样方法：比较【中图分类号】 d919 1【文献标识码】 a【文章编号】1007 9297(2006)03 0208 03a comparison study of vitreous humor micro-sam pling and wholly sam pling on rabbits zha ng yu zhuj， w a ng lan2 3 liu l ， (department offorensic me dicine， ton#ji medical college ofhuazhong university ofscience arm techno ， w han430030,chian)abstractobjective to make a comparative study of wholly sampling and micro-sampling of vitreous humor(vh) methods【作者简介】战玉祝 (1968一 )，男，汉族，山东莒南县人，医学学士，副主任法医师， 研究方向：临床法医 学中的视觉、听觉的电生理研究以及法医病理的死亡时间研究；tel+86 531 86323203； e-mail： james680321cn com【通信作者 1 刘良 (1960一 )，男，汉族，山东沂水人，教授，博士生导师，主要从事法医病理学教学、研究及检案。法律与医学杂志 2006 年第13卷 (第 3期 )thirty six rabbits were divided into four groups，each of which contains nine all were sampled at 12h postmortem group 1 werewholly extracted group i1 were subjected to multiple sampling of group iii， all left eyes were wholly sampled and all right eyeswere micro-sampled all eyes of group iv were micro sampled at first and all the left were wholy sampled concentrations of calcium， chloride，potassium， sodium and phosphorus were detected and statistically analyzed results th ere are no significan t differencebetween wholly sampling and micro-sampling of the pair-matched t test of between-eyes in group iii and the twice sanipiingin group iv of micro sam pling， the variations of the both-eyes and coeficient of variation were smaller than those of whonysam pling conclusion th e multi-micro-sam pling operation makes much less distort on vh， and is more stab le and repeatable， which is promising for forensic vh study an d examination【 key words l postmortem chemistry； vitreous humog sampling methodology； comparison study取样方法对玻璃体液 (vitreous humor， vh)研究有重要意义， 11 传统采用一次取样 vh，近年有研究使用了微量取样。迄今未见两取样方法比较研究，本实验通过一次取样与微量取样的比较 旨在为 vh 研究选择取样方法。材料与方法一、实验动物及分组取材健康家兔 36只，雌雄混用，体重 1 9 2 5 ，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。耳缘静脉空气栓塞处死，置于 4 7 恒温箱，随机分为 4 组 (每组 9 只 )，于死后 12h取样： i 组根据 coe推荐的方法，用 20g 针头 5 iill 注射器自外眦、角膜缘外约 2 mm 处缓慢进针，瞳孔观察针头位于中央时缓慢抽出所有 vh，摇匀后移液 50 l 与去离子水 1： 4 稀释，编号入 ep 管、 -25 冻存。 ii组微量重复取样：用 20 g留置针，入针后固定针头，用 1 ml注射器缓慢抽吸、移 液 50 l，重复取样 15次，其余处置同 i组。 iii 组左眼一次取样，同 i组，右眼微量重复取样同 ii 组。 iv组双眼微量取样 1 次，操作同 ii组；换 5 iid 注射器一次取出剩余所有 vh，同 i组。二、检测同日检测 i 组、 iv 组 1、 2 次取样和 iii 组左眼样本，ii组和 iii组右眼第 1⋯；5 8 15次取样样本： 37 ci=水浴解冻，美国 abboty aeroset 2000 全自动生化分析仪检测 ca2+、 cl 一、i<；+、 na+和 p 浓度。检测 3 次，取平均值。三、统计分析检测数据根据参考文献 31，采用 excel 和 spss 12 0 分析软件进行统计分析：计算各组变异系数， ii 组进行方差分析， iii 组左右眼配对 t检验， iv 组 1， 2 次取样配对 t 检验，分别计算 iv组 1， 2 次取样双眼浓度差与双眼均值的比。结果实验所得结果及统计处理情况见表 1、表 2、表 3。表 1 各组变异系数 (cv。 )table1 coeficient of variation in group i， ii， iii and iv (cv， )表 2 ii 组方差分析结果 值 )table2 variance analysis of group ii(p value)表 3 iv组双眼差 (绝对值 )与双眼均值 的平均比 ( )table 3 ratio of average vanations to means in betweeneyesof group iv( )讨论一、取样方法与变异程度重复微量取样方差分析提示总体 vh样本物质含量无显著差异 (表 2)， iii 组和 iv组一次取样与微量取样的 t检验无差异 (p>；0 05)，因此两取样方法获得的样本总体无差异。但是，一次取样的弥散程度大于微量取样 (表 1)，这印证了 coe关于 “ 取样方法不当可造成 vh 含量分散 ” 的观点。这也反应在双眼浓度差上微量取样的双眼差较小、一次 取样较大 (表 3)。结果与有关报道都相吻合：一次取样研究报道的 210 vh 浓度变异程度和双眼问差异较大， 而微量取样研究所报道的差异则往往较小。 7-91结合前期研究， 11分析认为取样方法是造成差异的原因。物质在 vh、血液和组织中含量不同， 取样操作不当引起组织挫碎或污染改变了 vh样本含量。 coe 方法的缺点之一是 “ 尽量取出所有 vh” 不好控制实际操作时容易抽出邻近组织 (如视网膜 )，造成组分 (如 vh钾 )含量的人为改变。 tagliaro91也认为微量取样对眼球内壁组织的作用较小操作引起的损伤和组分改变 也较小，取得的样本更好。二、微量取样的法医学意义微量取样操作方法的文献少见，设计微量取样操作时参考了 coe 方法的基本步骤。为方便多次取材、减少进针次数、保持针头位置和尽量减少污染等，采用了留置针固定后定量 (微量 )移液的取材方法。 tagliaro 等 91 4次取样 50 lvh 获得了较好的死亡时间推断精度， rognum 等 111、 poulsen等 121 和 bocaz beneventi等【 8】也采用微量取样的方法，并称死亡时间 95预测区间更好。结合本实验结果。作者认为这与微量取样的变异较小有关。微量取样所体现 的较小的双眼差，也更符合实际。 111因此微量取样采集样本具有良好的代表性，稳定性和重复性更好，也容易控制操作，更适宜于 vh的法医学研究与应用综上所述，微量取样与一次取样总体无差别，但不同取样操作可以造成样本均数变异系数的不同比较而言，微量取样的弥散程度较小，变异程度和双眼差较小。微量取样操作对样本的影响较小，其稳定性和重复性较好，更适合法医学 vh研究应用参考文献 11汪岚，战玉祝，刘茜，等家免死后玻璃体液离子浓度的微量重复取样法律与医学杂志 2006 年第 13卷 (第 3期 )法j】中国法医学杂志， 2006， 21(3)5 72】 coe ji postmortem chemistry update emphasis on forensic applicationj1 am j forensic med pathol， 1993 14(2)： 91 1173】余松林医学统计学北京：人民卫生出版礼， 2003 4041， 44-56， l18-1294】madea b， henssge c， honig w， et a1 references for determining thetime of death by potassium in vitreous humorjll forensic sci int， l 989 40(3)： 23 1-2435】 pounder dj， carson do， johnston k， et a1 electrolyte concentrationdifferences between left and right vitreous humor samplesj j foren sic sci， 1998， 43(3)：604-6076】 gardiner ee， newberry rc， keng jy postmortem time and storagetemperature affect the concentrations of hypoxanthine， other purines， pyrimidines， and nucleosides in avian and porcine vitreous humorj pediatr res， 1989， 26(6)：639-6427】 gardiner ee， newberry rc， keng jy postmortem time and storagetemperature affect the concentrations of hypoxanthine， other purines， pyrimidines， and nucleosides in avian and porcine vitreous humorj pediatr res， 1989， 26(6)：639-6428bocaz beneventi g， tagliaro f， bortolotti f， et a1 capillary zone elec trophoresis and artificial neural networks for estimation of the post mortem interval using electrolytes measurements in human vitreous hu mourj int j legal med， 2002， 116(1)： 5-119】 tagliaro f， bortolotti f，manetto g， et a1 potassium concentration differencesin the vitreous humour from the two eyes revisited by micro analysis with capillary electmph0resisj1 j chromatogr a， 2001，924f1-2)： 493-4981o郑建中眼的生化概要 m北京：人民卫生出版礼， 1991 111-12811】 rognum to， hauge s， oyasaeter s，et a1 a new biochemi