考评理论复习题 - 中国兽医网.doc

基层实验室考核评估理论测试复习题根据甘肃省动物疫病预防控制中心甘疫控200824号文精神及甘肃省市级兽医实验室考核评估方案要求，今年我省将对14个市州级实验室进行考核评估。为了配合这次考核评估，帮助大家做好考核中的理论测试准备，现准备了部分理论测试复习题供大家参考。一、仪器设备与检验程序部分1、病理学实验室应配备的主要仪器有哪些？病理学实验室应配备的主要仪器有：石蜡切片机、冷冻切片机、磨刃机、显微镜（带荧光功能）。有条件者可配组织脱水机和包埋机等。2、血清学实验室应配备的主要仪器有哪些？血清学实验室应配备的主要仪器有：酶标仪、洗板机、酸度计、台式高速冷冻离心机、培养箱（生化型）、微量振荡器、单/多道加样器、旋涡混合器等。3、病原学实验室应配备的主要仪器有哪些？病原学实验室应配备的主要仪器有：恒温培养箱（生化型）、CO2培养箱、普通生物显微镜、倒置显微镜、生物安全柜、酸度计、离心机、旋涡混合器、超声波裂解仪等。4、分子生物学实验室应配备的主要仪器有哪些？分子生物学实验室应配备的主要仪器有：PCR仪、电泳仪、生物安全柜、高速冷冻离心机、紫外透射仪。有条件还可配置凝胶成像分析系统等。5、共用仪器室应配备的主要仪器有哪些？共用仪器室应配备的主要仪器有：纯水机、电子天平、制冰机、超高速离心机、分光光度计等。6、洗涤消毒室应配备的主要仪器有哪些？洗涤消毒室应配备的主要仪器有：高压灭菌器、电热鼓风干燥箱、超声波清洗机、洗衣机等。7、贵重仪器和一般仪器在实验室中的放置有什么要求？贵重仪器应放置在洁净、防尘、防潮的环境中使用；一般仪器可放置在要求不太严格的环境中。8、冰箱、高压消毒器和蒸馏水器的摆放有什么要求？冰箱不能摆放在受阳光直射的地方，其周边应留有供空气充分流动的空间，以利于散热；高压消毒器、蒸馏水器应与其它仪器分开放置和使用，以免在使用时排出的水气损害这些仪器的元件。9、一个有效、严格的实验仪器管理制度，应包括哪几个方面：、贵重仪器管理责任到人，建立岗位责任制和挂牌上岗制度；、重要仪器应悬挂使用操作规程并附有简单故障排除办法；、事故报告制度和损坏报修制度；、重要仪器使用原始记录；、各种仪器的定期维护制度、标明上次检修时间和检修期限；（6）、仪器的调试核准制度；、重要仪器建立档案管理；、仪器报废确认制度。10、光学显微镜主要分哪几类（要求说出4种以上）？光学显微镜可分为普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜、倒置显微镜、体视显微镜、偏光显微镜、万能研究型显微镜等10多种，其用途各有侧重。11、各类光学显微镜主要有哪些用途？普通光学显微镜主要供常规检验、教学，用于观察切片、涂片等。暗视野显微镜用于观察细微物体的存在、运动、外形轮廓。荧光显微镜用于荧光染色观察。倒置显微镜用于从透明的容器底部向上观察，如培养细胞的观察。体视显微镜用于生物体立体结构的观察。相差显微镜用于观察透明结构。偏光显微镜用于区分双折射物质的细微结构。万能研究型显微镜结构复杂，集以上多种功能于一体。12、显微镜的光学部件包括哪几个部分？显微镜的光学部件包括物镜、目镜、聚光镜及照明装置几个部分。13、高倍镜的使用步骤有哪些？ 先用低倍镜找到清晰物像，并将需放大的物象移到视野中央。 眼睛从侧面注视物镜，用手移动物镜转换器，换高倍镜。 眼睛向目镜内观察，同时微调细调焦钮，直至视野内看到清晰的物像为止。14、油镜的使用步骤有哪些？ 先从低倍镜到高倍镜的操作步骤，找到清晰的物像，把要放大观察的部分移到视野中央。 将高倍镜移开，在标本片的中央滴1滴香柏油，眼睛从侧面注视镜头，轻轻转换油镜，使油镜头浸在油滴中。一般情况下，转到油镜即可看到物像，如不清楚，可来回调动细调焦钮，即可看清物像。如仍看不清，应按上述步骤重新操作。 找到物像后，再调节聚光器和光圈，选择最适光线（聚光器应上升到最高处，光圈适当调大）。 油镜使用完毕后，下降载物台（或上升物镜）约10mm，把物镜转到一边，用擦镜纸把镜头擦净。油镜的正确擦拭是：先用干净擦镜纸（通常用双层）擦去镜头上的香柏油，再用蘸少许二甲苯(或乙醚7:乙醇3混合液)的擦镜纸轻擦，再用干净的擦镜纸擦拭1-2次。15、汞灯在使用中应注意哪些事项？（1）汞灯接通电源后需要10-15分钟预热时间，汞才能充分汽化并形成汞弧，产生高亮度而稳定的激发光。因此，观察前要提早通电。（2）汞灯在使用过程中，不要随意开关汞灯的电源。（3）关闭汞灯电源后，必须等待15-20分钟，待汞灯自然冷却后才可再次接通电源。16、电子天平的使用和维护应注意哪些事项？、经常使用天平时，应使天平连续通电以减少预热时间，使天平处于相对稳定状态。如果天平长期不用，应关闭电源。、称量时应从侧门取放物质，读数前应关闭箱门以免空气流动引起天平摆动。前门仅在检修或清除残留物质时使用。称量结束应及时除去称量瓶（纸），作好清洁工作，然后关上侧门，切断电源，并做好使用情况登记。、天平应保持清洁，谨防灰尘等物钻入，每次称量完毕，应及时清洁。天平不应该放在有腐蚀性气体和空气流动大的环境中。、根据天平的使用程度，应作周期性的检查校准。、在搬动天平、安装和擦卸外围设备前，一定要关掉显示开关，拨掉电源插头，以免损坏天平。（6）、天平具有自动故障检测功能，故障是以代码形式显示（CH1，8），一旦出现故障代码表示天平已不能正常工作，应通知有关部门进行维修。17、离心机的工作原理是什么？离心就是利用离心机转头高速旋转产生的强大离心力，加快液体中颗粒的沉降速度，把样品中不同沉降系数和浮力密度的物质分离开。离心力（F）的大小取决于离心转头的角速度（，r/min）和转头的半径（r，cm）。它们的关系是：F=3r。18、离心管的平衡与装载有什么要求？离心管至少要二二平衡，放在转头的对称位置，装管数是6、12、18的转头可3个一批平衡。最好是所有的离心管一样重。水平转头不允许有空档（即不挂吊篮的现象），否则会损坏转头。19、酶标仪的用途是什么？酶标仪主要用于酶联免疫吸附试验中的比色测定、数据计算及结果输出。20、酶标仪的原理是什么？酶标仪主要是用于测定酶联免疫吸附试验（ELISA）的微量反应板上各孔的光吸收值（OD值）。通过测量各孔的光吸收值，测定出各孔中溶液的浓度，以说明试验反应中抗原抗体的结合反应情况21、酶标仪在使用中对电源有什么要求？一定要使用符合仪器需要的电压，电压不稳定的则要使用稳压器，使输入酶标仪的电压保持稳定。使用读板之前，仪器有15min的温热过程，以使仪器工作稳定。22、所有仪器在使用后应做好哪些工作？仪器在使用后应做好仪器的清理和恢复工作，关闭电源，做好使用记录。23、洗板机在使用后应做好哪些工作？洗板机在使用后应用去离子水或纯净水清洗管路，防止阻塞和腐蚀。24、培养箱的用途是什么？培养箱是培养微生物的主要设备，可用于细菌、细胞和病毒的培养繁殖。25、高压灭菌器的安全阀和放汽阀各有什么用途？灭菌器安全阀在压力超过一定压力后能自动起跳，释放过高的压力。放汽阀可在灭菌前排放冷空气及在灭菌终了时进行排汽。26、高压灭菌器内堆放灭菌物品时应注意什么？将包扎好的灭菌物品依次堆放在灭菌筐内，各包之间应留有一定的间隙，有利于蒸汽的穿透，提高灭菌效果。堆放灭菌包时应注意安全阀与放汽阀的出气孔位置，不许任何物品堵塞放汽孔，必须保障其畅通放汽，否则因安全阀汽孔堵塞未能泄压，易造成锅体爆裂事故。27、灭菌液体时应注意哪些事项？灭菌液体时，应将液体灌装在硬质的耐热玻璃瓶中，建议盛液量不超过容器容积的3/4，瓶口应选用棉花纱塞，切勿使用未打孔的橡胶塞或软木塞。在灭菌结束时，不准立即释放蒸汽，必须待压力表指针回归零位方可排放余汽，否则会导致液体沸腾使玻璃容器爆裂的事故，造成不必要损失。28、移液器在设定移液量是应注意什么？移液器设定的移液量不能超出该移液器标定的移液范围，过度用力试图把按钮转至额定范围之外的行为，将会造成移液器损坏。29、兽医实验室的工作原则是什么？兽医实验室应按照“科学、公正、高效、服务”的原则开展工作。30、根据兽医诊断检测实验室的工作程序，诊断室应承担哪些工作？诊断检测实验室的工作应包括检测样品，填写原始数据、填写诊断检测结果登记表和诊断室主任审核原始记录及诊断检测结果登记表。31、在文件控制程序中资料室主任的职责是什么？资料室主任负责质量体系文件的登记、标识、发放、回收及销毁等管理工作。32、检测室工作人员工作时应遵守哪些纪律？ 检测室工作人员工作时，必须着工作服。 检测室内不准会客，不准吸烟，不得在实验场所喝水和用餐。 工作时间检测室内不准高声喧哗，不准进行与检测/校准无关的活动。 检测室仪器、设备、工具、器皿及检测用品等应存放整齐。 样品应有固定位置存放，实行标识管理，不得混放。33、动物疫病诊断中一般有哪几种手段？动物疫病诊断的过程一般分为临床诊断、流行病学诊断、病理学诊断、微生物学诊断、寄生虫学诊断和毒物学诊断等几种手段。34、临床诊断的概念是什么？临床诊断是利用人的感官或借助一些最简单的器械如体温计、听诊器等直接对患病畜禽进行的检查，有时也包括血、粪尿的常规检验，一般来说是最简便易行的方法。35、流行病学诊断的概念是什么？包括哪些内容？流行病学诊断是在流行病学即疫情调查的基础上进行的疾病诊断；通过各地疫情报告和现场调查获取疫情资料，通过分析、处理，进行的疫病诊断。内容包括：n1）本次流行情况的调查；n2）疫病史调查；n3）传播方式和传播途径的调查；n4）该地区的经济、管理的基本情况，疫病控制机构的基本情况等。36、病理解剖学检查的内容有哪些？病理解剖学检查的内容有：1）头、颈、体表皮肤、天然孔等。2）腹腔脏器（肝、胆、脾、肾、胃、肠、膀胱、胰脏、淋巴结等）有无出血、充血、淤血、坏死、肿胀、色变等。3）胸腔脏器（心、肺、胸膜、心包膜、气管、喉头等有无出血、充血、淤血、坏死、肿胀、色变等。4）其他：颅腔、皮下、淋巴结、蹄等。怀疑为炭疽时不得进行解剖。要通过耳尖抹片染色或炭疽沉淀试验进行排除以后方可进行解剖。37、什么是微生物学诊断？它分为哪几类？微生物学诊断就是运用兽医微生物学的方法进行疾病诊断，可分为病原学诊断、血清学检测和分子生物学技术等几类。38、什么是免疫学技术，它分为哪几类？免疫学技术就是应用抗原抗体特异性免疫学反应的特性，进行抗原或抗体检测的技术。它分为中和试验（毒素抗毒素中和反应、病毒中和试验）；免疫荧光技术；凝集试验（凝集试验、血细胞凝集和血细胞凝集抑制试验）；酶标记技术（酶染色技术、ELISA）沉淀试验（环状反应、AGID）、溶血反应（溶菌反应、溶血反应）、补体结合反应等；39、根据检验方法控制程序的要求，检验工作中选择检验方法顺序是什么？检验工作涉及并选择的检验方法顺序如下:(1) 国际和国家标准方法；(2) 行业标准方法；(3) 地区标准方法；(4) 权威和知名技术组织公布的非标准方法；(5) 有关期刊和科学书籍公布的非标准方法；(6) 专用设备制造商推荐的非标准方法；(7) 自己开发的非标准方法。40、根据实验室内务管理程序，对实验室清洁卫生有什么要求？ 每日工作前应打扫检测实验室、办公室及其环境的卫生，并注意保持。 工作人员必须在满足实验相关规定的环境条件下，才能进行实验工作。 每次检测结束后，检验人员应整理试验器材并将其放回原处。二、血清、病毒学检测技术部分1、血清学检测技术的原理血清学诊断检测是畜禽传染病实验室诊断的一种重要检查方法。由于病原微生物（包括细菌和病毒及其它微生物）的作用，可以剌激肌体产生相应的抗体，这种抗体与其相应的抗原可发生特异性反应，所以在临床上根据这一原理，可利用已知抗原来鉴定病畜禽血液中相应的抗体，或用特异性诊断血清(已知抗体)来鉴定其相应的病原体（抗原）。因此常应用血清学方法来协助对细菌性传染病、病毒性传染病和某些寄生虫病的诊断。2、血清学技术的类型免疫血清学技术按抗原抗体反应性质不同可分为：凝聚性反应（包括凝集试验和沉淀试验）、标记抗体技术（包括荧光抗体、酶标抗体、放射性标记抗体、发光标记抗体技术等）、补体参与的反应（补体结合试验、免疫粘附血凝试验等）、中和反应（病毒中和试验和毒素中和试验）以及免疫复合物散射反应（激光散射免疫技术）、电免疫反应（免疫传感器技术）和免疫转印技术等新技术。3、凝聚性试验凝聚性试验根据参与反应的抗原性质不同，分为由颗粒性抗原参与的凝集试验和由可溶性抗原参与的沉淀试验二大类。它们又根据反应条件分为若干类型：利用微载体进行的血清学反应称为间接凝集反应，也称微载体技术。将抗原病毒、毒素等致敏载体，可测定被检抗体，称为正向间接凝集反应。以提纯的抗体致敏载体，可检测抗原称为反向间接凝集反应。4、抗血清或抗原制剂的效价（滴度）凝集反应用于测定血清中抗体含量时，将血清连续稀释（一般用倍比稀释）后，加定量的抗原；测抗原含量时，将抗原连续稀释后加定量抗体。抗原抗体反应时，出现明显反应终点的抗血清或抗原制剂的最高稀释度称为效价或滴度（titer）。5、凝集试验的类型凝集试验的操作方法有平板凝集反应、乳胶凝集反应、试管凝集反应、微量凝集反应、间接血凝试验、反向间接血凝试验等。6、常见血清学试验的敏感性（从高到低）酶标记抗体测定、间接血凝试验、病毒中和试验、平板凝集反应、试管凝集反应和试验琼脂扩散试验7、平板凝集试验方法及用途平板凝集反应手续简便，结果迅速，适用于现地操作。试验在玻板或载玻片上进行。取适当稀释的抗血清（或被检血清）与抗原悬液各1滴在玻板上混合，轻轻摇动玻板，阳性者数分钟后出现团块状或絮片状凝集。此法通常用于未知菌的鉴定，如沙门氏杆菌、痢疾杆菌等的鉴定；亦可用于某些传染病的诊断，如布氏杆菌病、鸡白痢等病的诊断。在试验的同时，需作抗原对照、阴、阳性血清对照。实验结果在3分钟之内判定。8、进行试管凝集反应需要做哪些对照试验？试管凝集反应较平板凝集反应手续复杂，为保证试验结果准确。需要做以下对照试验：标准阳性血清对照、标准阴性血清对照、抗原对照及生理盐水对照4个对照试验。9、在间接凝集试验中，可用来制作诊断抗原的抗原有哪些？抗原多为可溶性蛋白质，如细菌、立克次氏体及病毒的可溶性抗体；原虫、吸虫、丝虫的浸出液；动物的可溶性物质；激素及各种组织器官浸出液；植物性蛋白质，雪花粉浸出液等；另某些细菌的可溶性多糖也可吸附于载体上制成诊断抗原。10、正向间接凝集反应（又称正向被动间接凝集反应）与反向间接凝集反应（又称反向被动间接凝集反应）的概念正向间接凝集反应指抗原先吸附在载体（主要是红细胞和聚苯乙烯乳胶颗粒），然后与相应抗体结合产生凝集现象。如以红细胞（聚苯乙烯颗粒）作为载体，则称为正向红细胞（乳胶）凝集反应。反向间接凝集反应是将特异性抗体吸附在载体表面，再与相应抗原结合，在适当电解质存在下，产生肉眼可见的凝块。因此它与正向凝集反应以抗原来鉴定抗体正好相反，它是以抗体来鉴定抗原。11、分析正向间接凝集试验中被检血清稀释过程对试验结果可能产生的影响，并提出纠正办法。被检标本稀释时，每排吹吸次数不一致，不小心移液排枪触及V型板孔的边缘。纠正办法：保证各排、各板吹吸次数一致，用移液枪稀释时，吹吸次数不少于10次（建议15次左右），同时使用同一型号的吸头。吹打稀释时，注意V型板与移液枪之间的角度，避免V型板孔内和吸头内产生气泡，造成稀释不充分。同时小心，防止孔内的液体溅出。吸头用毕，用自来水冲洗干净后，置水中煮沸消毒（吸头2min内、稀释棒15min），然后用蒸馏水冲洗后，吸头置干洁纱布凉干，稀释棒用干洁纱布将水吸干，置37温箱烘干备用。12、血凝抑制试验（HI）的用途在血凝抑制实验(HI)中，由于血凝反应可被特异性抗体所抑制，抗体与病毒结合后，血凝素不能吸附于红细胞表面的受体上，因此血凝抑制试验可以用于：（1）检测血清中的抗体水平；（2）鉴定病毒；（3）辅助诊断病毒性疾病；（4）作为适时免疫的辅助手段，能避免免疫失败、免疫空挡及重复免疫造成的损失。13、简述1.0%RBC制备过程（以配制10mL为例）用吸有抗凝剂（0.1mL/mL血）的针管采集3只鸡静脉血各2mL混合；加PBS液，置离心机以1000r/min离心10min，弃上清液，加PBS液，用大拇指垫纸缓慢颠倒34次，以混匀沉淀的RBC，以同样的方法离心洗涤3次弃上清液，留沉淀的RBC泥备用；用微量移液器（或微量吸管）吸取100L RBC泥，加入到 9.9mL 本试验要求的PBS液，制成1%的RBC液；15、简述血凝抑制(HI)试验用抗原的配制过程以血凝(HA)试验测得凝集价1512，检测37份血清为例说明。（1）计算4HAU抗原：按抗原HA价1512，计算得4HAU抗原滴度为1128；（2）计算检测38份血清用工作抗原的量，按：每板测8份血清，每孔加25L，每板100孔计，5板25L100孔=12500L。则需用4HAU抗原（浓缩抗原）12500L12897L，为便于计算取整数100L，按1128比例，则配制工作抗原的量为12800L；（3）需PBS的量为：12800L-100L=12700L；（4）用移液器量取100L，加入到12700LPBS中混匀即可。16、间接血凝试验（IHA）和血凝抑制(试验(HI)中（HA）结果判定标准的区别。间接血凝试验（IHA）为红细胞50%凝集，血凝抑制试验(HI)中（HA）为红细胞100%凝集。17、试述血凝抑制(试验(HI)中抗原抗体作用时间和温度对试验结果的影响（1）抗原与抗体作用时间对试验结果的影响抗原与抗体作用时间过长或过短均对结果影响较大。过短出现凝集不完全；过长出现洗脱现象。结果均造成HI价下降。（2）温度对实验结果也有影响，一般要求在室温25-37进行实验，当实验温度低于4时红细胞有时会发生自凝现象。18、琼脂扩散试验原理其原理为琼脂或琼脂糖在凝胶状态下，内部形成一种多孔的网状结构，该结构孔径大，可允许分子量在20万以下的抗原和抗体等大分子量的物质通过，当抗原和相应抗体在该凝胶中经自由扩散相遇后形成抗原抗体复合物，当抗原抗体在相遇处比例相当时，形成复合物的分子量和颗粒不断增大，结果扩散停止而形成沉淀出现线状或条状特异性屏障（抗原抗体复合物）。19、在判定鸡马立克氏病琼脂扩散试验结果（对照成立）时，标准阳性血清孔和抗原孔产生的沉淀线末端弯向被检样品内侧或外侧时如何判定？标准阳性血清孔和抗原孔产生的沉淀线末端弯向被检样品孔内侧时，被检样品判为弱阳性。末端弯向外侧弯曲，被检样品判为阴性。20、酶联免疫吸附试验(ELISA)方法的建立时间。EIA技术诞生于20世纪70年代初。21、酶联免疫吸附试验的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。22、酶联免疫吸附试验的三个关键试剂ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个关键的试剂：a固相的抗原或抗体，即“免疫吸附剂”(immunosorbent)；b酶标记的抗原或抗体，称为“结合物”(conjugate)；c酶反应的底物。23、酶联免疫吸附试验的类型根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具休条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于动物疫病检测的ELISA主要有以下几种类型：（1）双抗体夹心法测抗原 （2）双抗原夹心法测抗体 （3）间接法测抗体 （4）竞争法测抗体 （5）竞争法测抗原 （6）阻断ELISA （7）捕获包被法测IgM抗体 24、酶联免疫吸附试验的优缺点及试剂组成（1）酶联免疫吸附试验的优缺点与普通的免疫沉淀、凝集试验和金颗粒、乳胶颗粒、同位素标记的检测技术相比，酶联免疫吸附试验有以下优点：A、灵敏度高由于该试验采用酶促反应，一分子的酶，可以催化多次反应，因此可以放大检测信号，提高检测的灵敏度。ELISA的反应模式基本上都是抗原/抗体/抗抗体-酶的方式进行的联级放大，大幅度提高了反应信号的强度。B、特异性强每一步反应都是抗原抗体的特异性识别过程，每一步都进行一次“纠偏”：通过控制酶联免疫吸附试验的溶液环境，可以去除非特异凝集、沉淀、非特异吸附作用的影响，增强反应体系的特异性。C、方法快速、简便ELISA的整个反应过程，一般不超过3小时。所用的试剂可以完全商品化，不需额外配制，操作简单，容易掌握。D、重复性好所用材料试剂系批量生产或制备，具有良好的均一性，无生物学实验中经常出现的个体差异现象。E、自动化程度高，适合大批量标准化检测ELISA检测过程，除了加入待测样品需要手工操作外，其它步骤均可用自动仪器来完成。F、 安全试验不需动用活毒，无散毒的危险。目前，国际粮农组织(FAO)和原子能机构(IAEA)己在世界各国推行和推荐该方法，以部分替代补体结合试验和血清中和试验。（2）酶联免疫吸附试验的缺点该方法的缺点在于，与免疫酶组织化学染色法相比，不能直观反映抗原抗体复合物在组织细胞中的定位。25、酶联免疫吸附试验的试剂组成 完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：（1）酶标反应板（免疫吸附剂）（2）酶标记的抗原或抗体(结合物)（3）酶的底物（4）阳性对照品和阴性对照品（5）结合物及标本的稀释液（6）洗涤液（7）酶反应终止液（8）参考标准品（大部分试剂盒无此成分）26、ELISA中标本（血清为例）采集和保存的注意事项（1）血清标本应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，溶血标本可能会增加非特异性显色。（2）血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的蛋白可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4，超过一周测定的需低温冰存。（3）冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。反复冻融会使抗体效价下降。27、ELISA试验中，加血清样不准确表现在哪些方面？解决办法有哪些？加样不准确表现主要在三个方面（1）血清或血浆标本分离不好即进行加样；（2）手工操作中，加样板过多造成加样后放入温箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)；（3）加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。解决办法标本为血清时最好将血液先自然存放1-2h后，再用3000r/min离心15min；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合510次，放置一段时间后，3000r/min离心15min；若在几天内检测，可放在28冰箱中，若要贮存，则置于-20的低温冰箱内。（2）加样后及时放入温箱。（3）加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。（4）如果采用AT或其他全自动加样，最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。（5）标本较多时，请分批操作。28、ELISA技术在动物疫病检测中的应用目前ELISA实验技术已经广泛用于动物疫病的检测。根据各种疫病的不同检验需要，已经研究成功的ELISA检测方法及其特点如下。（1）ELISA检测病原微生物抗体；（2）ELISA检测病原微生物抗原和药物残留 29、利用ELISA技术检测动物病原微生物抗体的意义有哪些？对于未接种疫苗的群体，抗体检测可以判断是否感染过该疫病。对于己经接种过疫苗的群体，可以评估群体的免疫抗体水平，判断疫苗接种后的效果和群体的免疫状态。比如鸡新城疫、猪瘟等病的抗体检测。对于接种过灭活疫苗的群体，采用某些检测病毒非结构蛋白抗体、基因缺失和标记疫苗的靶抗原、细菌毒素抗体的间接ELISA试剂盒，可以排除疫苗抗体的干扰，能判断动物是否感染过该病。例如口蹄疫病毒非结构蛋白ELISA抗体检测，可以区分口蹄疫灭活疫苗接种的动物和病毒感染动物。对于接种活疫苗的群体，如果接种的是基因缺失或标记疫苗，可以用相应的检测试剂作鉴别检测，比如伪狂犬的gpI抗体检测：也可以寻找活疫苗与野毒株的抗原差异，研究相应的鉴别检测方法，如猪瘟强弱毒抗体的鉴别检测，就是依靠特异性单克隆抗体介导的。30、ELISA技术的应用前景由于ELISA试验是将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。通过近年在生物学和医学科学的许多领域的广泛运用。该项技术十分成熟，它将是今后一段时期动物疫病诊断中除PCR技术以外运用最为广泛、结果更为准确、速度快捷的实验室诊断方法。31、免疫荧光技术是在那三项技术的基础上建立起来的？免疫荧光技术(Immuno fluorescence technique又称荧光抗体技术。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术发展的基础上建立起来的一项技术，把免疫学的特异性、敏感性和显微镜技术的精确性有机地结合起来，使之成为现代生物学、医学和兽医学广泛应用的免疫学技术之一。免疫荧光技术包括荧光抗体技术和荧光抗原技术，实际工作中常用荧光抗体技术，所以通称荧光抗体技术。32、免疫荧光抗体技术的特点是什么？（1）高度特异性； （2）高度敏感性； （3）较好的快速性。 33、免疫荧光技术直接染色法的优点和缺点（1）直直接染色法的优点：特异性高、操作简便、比较快速；（2）直接染色法的缺点：一种标记抗体只能检查一种抗原。另外，该法的敏感性也较差。34、免疫荧光技术标本固定原则（1）不能损伤细胞内的抗原；（2）不能凝固蛋白质；（3）不能损伤细胞形态；（4）固定后应保持细胞膜的通透性(允许抗体通过，以便抗体和抗原结合。35、病毒标本的固定方法固定组织培养物、涂片标本或冰冻切片内的病毒，普遍用丙酮，也可用四氯化碳、无水乙醇、100%甲醇或100%乙醚等进行固定。涂片干燥后，在37-50温度范围内浸于丙酮中，经10min到几天，再行染色。一般在室温中于丙酮内固定10-15min即可。但必须注意，经上述固定处理后，病毒的传染力并未完全破坏。干燥、未固定的涂片虽然亦可进行染色，但有引起实验室感染的危险。36、使用荧光显微镜的注意事项（1）每次检查时间以1h为宜，超过1.5h，高压汞灯的亮度逐渐下降，荧光减弱，并且会影响求灯的寿命。标本在高压柔灯下受紫外线照射15min后，由于光化学作用，使荧光色素与抗体发生暂时的解离，荧光亮度也会减弱。所以，最多不得超2-3h。（2）荧光显微镜的光源寿命有限，标本应集中检查，节省时间，保护光源。天热时还需用电扇散热降温。新换灯泡应从开始就记录使用时间。频繁的开和关会缩短灯泡使用寿命。有的光源灯熄灭后，确实需要再用时，须待灯泡充分冷却后才能再开。（3）标本染色后应立即观察，放置时间过久荧光会逐渐减弱，若将标本放在聚乙烯塑料袋中，于4保存，可延长荧光保持时间。37、病毒分离与鉴定的目的是什么？病毒的分离与鉴定是病毒性疫病检测、诊断和流行病学调查的重要方法之一，其主要目的是:（1）对患病的个体或群体进行准确的诊断，以便及时采取正确的处理措施；（2）对动物进行检疫，以确定是否带有某种病毒病原；（3）对病毒引起的疫病进行流行病学调查、追踪调查或回顾性调查；（4）对未知新病毒进行分类鉴定等基础研究。38、采集与保存用于病毒分离鉴定的临床样品的原则有那些？其原则是尽可能采集新鲜样品。采集样品的选择一般是：呼吸道疫病采集咽喉分泌物；中枢神经系统疫病采集脑脊髓液；消化系统疫病采集粪便；发热性疫病和非水泡性疫病采集咽喉分泌物、粪便及全血；水泡性疫病采集水泡皮和水泡液。若是死尸剖检后采集样品，一般采集有病理变化的器官或组织。39、病毒分离前组织器官样品的实验室处理方法（1）无菌采取一小块样品，充分剪碎，置乳钵中加玻璃砂研磨或用组织捣碎机制成匀浆，随后加12mL Hank，s平衡盐溶液制成组织悬液，再加12 mL继续研磨，逐渐制成10%20%的悬液；（2）加入复合抗生素；（3）以8000g离心15分钟；（4）取上清液用于病毒分离。必要时可用有机溶剂去除杂蛋白和进行浓缩。40、实验动物在病毒学中的应用包括哪些方面？（1）分离病毒，通过实验动物来扩增样品中的病毒，使其能够用普通方法鉴定病毒；（2）借助感染范围鉴定病毒；（3）繁殖病毒制备诊断抗原或疫苗；（4）病毒的免疫学和血清学试验；（5）制备免疫血清；（6）病毒感染实验研究；41、常用的实验动物有拿几种？ 兽医学上常用于分离病毒的实验动物有家兔、小鼠、大鼠、豚鼠、鸡胚等，也常用自然易感动物如家畜、家禽等。42、选择用于病毒分离实验动物的原则是什么？选择用于分离病毒的实验动物的原则，是要确认选择的实验动物的种类、年龄、性别对拟检查的病毒有最高的敏感性。实验动物的级别选择可根据实验性质而定。43、常用的病毒鉴定技术包括哪几方面？病毒的鉴定包括理化特性鉴定、生物学特性鉴定、分子生物学鉴定以及血清学鉴定等。有关具体病毒鉴定的实验方法因病毒不同而异，下面介绍常用的病毒基本理化特性等一般病毒特征的鉴定方法。（1）氯仿敏感性试验（2）酸敏感性试验（3）热敏感性试验（4）阳离子稳定性试验（6）电子显微镜观察44、衣原体既含有DNA又含有RNA两种核酸。45、衣原体的接种培养方法（1）鸡胚卵黄囊接种（2）小鼠接种（3）细胞培养46、引起畜禽不同疾病的主要衣原体为哪一种？鹦鹉热衣原体。47、用于立克次氏体病诊断检测的血清学试验方法有哪些？ 用于立克次氏体病诊断检测的血清学试验方法有免疫荧光染色法、补体结合试验以及微量凝集试验等。48、常用的诊断检测新技术有哪几种？（1）化学发光免疫测定（2）SPA免疫检测技术（3）生物素-亲和素免疫检测技术（4）胶体金免疫检测技术（5）免疫电镜技术（6）免疫传感技术（7）免疫转印技术（8）核酸探针技术（9）聚合酶链反应（PCR）49、胶体金免疫检测技术(Colloidal gold imnunoassay，GIA)的原理胶体金免疫检测技术是20世纪80年代发展起来的一项新技术。它是利用胶体金颗粒标记抗原或抗体，进行抗体或抗原的检测或定位分析。胶体金颗粒是将氯金酸(HAuC14)用还原法(白磷、抗坏血酸、枸橼酸三钠等)制成的。它为带负电荷的疏水胶，其颗粒是单个散在的，根据需要可制成直径几纳米到几十纳米大小，呈桔红色。抗原或抗体蛋白质借助表面电荷，很容易包被到胶体金颗粒表面，形成标记颗粒，用于检测相应的抗体或抗原。50、目前省级实验室用于高致病性禽流感（HPAI）、口蹄疫（FMD）、高致病性猪蓝耳病（HPPRRS）等重大动物疫病诊断检测的快速检测方法是什么？聚合酶链反应（Polymerase chain reaction ，PCR）51、聚合酶链反应（PCR）技术操作程序（1）RNA（DNA）提取；（2）RNA反转录成DNA；（3）基因扩增（DNA复制）（4）电泳成像。三、细菌检验部分1、动物疫病病料采集方面有什么规范？动物疫病实验室检验采样方法（NY/T541-2002），高致病性禽流感样品采集、保存及运输技术规范(NY/T765-2004)，病原微生物实验室生物安全管理条例，口蹄疫防治技术规范，高致病性猪蓝耳病防治技术规范，新城疫防治技术规范（GB16550-1996），猪瘟检疫技术规范等。2、采集疑似炭疽病畜病料时应注意什么？采集病料时，凡发现患畜(包括马、牛、羊及猪等)有急性死亡时，如怀疑是炭疽，则不可随意解剖，应采取患畜的血液，万不得已时局部解剖作脾脏触片的显微镜检查。只有在确定不是炭疽后，方可进行剖检。3、采集动物疫病样品需遵从什么原则？适时采样、合理采样、典型采样、无菌采样、适量采样、安全采样。4、送检病理样品应做哪些记录？送往实验室的样品应有一式三份的送检报告，一份随样品送实验室，一份随后寄去，一份备案。样品记录至少应包括以下内容：（1）畜主的姓名和畜禽场的地址；（2）畜(禽)场里饲养的动物品种及其数量；（3）被感染的动物种类；（4）首发病例和继发病例的日期及造成的损失；（5）感染动物在畜群中的分布情况；（6）死亡动物数、出现临床症状的动物数量及其年龄；（7）临床症状及其持续时间，包括口腔、眼睛和腿部的情况，产奶或产蛋的记录，死亡情况和时间，免疫和用药情况等；（8）饲养类型和标准，包括饲料种类；（9）送检样品清单和说明，包括病料的种类、保存方法等；（10）动物治疗史；（11）要求做何种试验；（12）送检者的姓名、地址、邮编和电话；（13）送检日期。5、怎样采集供细菌检验的血清样品和组织样品？细菌检验血清样品：应在动物发病初体温升高，未经治疗期间采集。血液应脱纤或加肝素抗凝剂，但不可加入抗菌素。密封后贴上标签，冷藏尽快送实验室，否则须置4冰箱内暂时保存，但时间不宜过久，以免溶血。细菌检验组织样品：供细菌检验的组织样品，应新鲜并以无菌技术采集，应采用未使用过治疗药物的病畜。如遇尸体已经腐败，某些疫病的致病菌仍可采集于长骨或肋骨，从骨髓中分离细菌。采集的所有组织应分别放入灭菌的容器内或灭菌的塑料袋内，贴上标签，立即冷藏送实验室。必要时，对计划分离产芽孢等抗逆性强的细菌的样品，也可以作暂时冻结送实验室，但冻结时间不宜过长。6、怎样处理细菌学检验样品？ 无菌采集的组织病料，接种前无需作特别处理；如果分离的病原菌在组织细胞内，则需在无菌状态下将组织剪碎、研磨，加入5-10倍的缓冲液制成悬液，或加入适量的酶、酸或碱，使组织消化，细菌释出，离心取沉淀接种。 有杂菌污染的样品，可选用接种选择性培养基的方法来抑制杂菌的生长。 用加热法杀死非芽胞杂菌以分离芽胞菌。 奶、尿等样品含菌量少，要用离心法或过滤法作集菌处理。7、怎样洗涤带菌玻璃器皿？凡实验室用过的菌种以及带有活菌的各种玻璃器皿，必须经过高温灭菌或消毒后才能进行刷洗。 带菌培养皿、试管、三角瓶等物品，做完实验后放入消毒桶内，用0.1MPa灭菌20-30min后再刷洗。含菌培养皿的灭菌，底、盖要分开放入不同的桶中，再进行高压灭菌。 带菌的吸管、滴管，使用后不得放在实验台上，应立即分别放入盛有3-5%来苏尔或5%石炭酸或0.25%新洁尔灭溶液的玻璃缸（筒）内消毒24h后，再经0.1MPa灭菌20min，取出冲洗。 带菌载玻片及盖玻片，使用后不得放在实验台上，应立即分别放入盛有3-5%来苏儿或5%石炭酸或0.25%新洁尔灭溶液的玻璃缸（筒）内消毒24h后，用夹子取出经清水冲干净。如用于细菌染色的载玻片，要放入50g/L肥皂水中煮沸10min，然后用肥皂水洗，再用清水洗干净。最后将载玻片浸入95%酒精中片刻，取出用软布擦干或晾干，保存备用。若用皂液不能洗净的器皿，可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。 含油脂带菌器材，应先单独高压灭菌，用0.1MPa灭菌20-30 min趁热倒去污物倒放在铺有吸水纸的篮子上用100烘烤0.5h用5%的碳酸氢钠水煮两次再用肥皂水刷洗干净。8、玻璃器材有哪两种灭菌法？有干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法（湿热灭菌法）。9、剖检时怎样判断败血症？在剖检中判定败血症的存在，主要依据以下几个方面：尸体腐败发生快、尸僵不全、血液呈黑紫色；广泛渗出性出血。在各实质脏器被膜、胸腹膜、肠系膜、胃肠黏膜下结蒂组织可见浆液出血性浸润；全身淋巴结肿大；脾脏急性肿大、表面呈青紫色，被膜紧张、切面隆突呈黑紫色；实质器官变性。心、肝、肾发生颗粒变性、脂肪变生甚至已坏死；此外，黄疸、肺脏的瘀血及水肿、脑膜的充血出血入败血症，涂有全身性病变以外，多数可以发现原发生病灶。10、简述制作培养基的原则？制作培养基应掌握的原则和要求 （1）培养基必须含有细菌生长所需要的营养物质；（2）必须彻底灭菌，不得含有任何活细菌；（3）培养基的材料和盛培养基的容器上，没有抑制细菌生长的物质；（4）所制备的培养基应该是透明的，以便观察细菌生长性状和其它代谢活动所产生的变化；（5）培养基的酸碱度应该符合细菌的生长要求，多数细菌生长适宜弱碱，pH范围是pH7.1-7.6。11、简述制作培养基的步骤？不同的培养基其制备方法不同，一般按如下步骤：（1）根据不同的菌类和用途，选择适宜的培养基；（2）精确称量各种成分；（3）将各种成分按规定加热溶解，调整pH值到适宜的范围内，再加热煮沸10-15min，加热过程中注意补加液体的损耗；（4）过滤(用滤袋或纱布夹棉花)、分装、灭菌，不同的培养基灭菌温度和时间不同，通常为718帕(15磅每平方英尺)压力下15-30min；（5）培养基中的某些成分，像血清、腹水、糖类、尿素、氨基酸、酶等，在高温下易分解、变性，故应用滤菌器过滤，再按规定的温度和量加入培养基中；（6）无菌检验，取做好的培养基数管，置37恒温箱内24小时，若无细菌和霉菌生长即可使用。12、简述营养琼脂培养基的成分和制作方法？成分 蛋白胨 10g牛肉膏 3g氯化钠 5g琼脂 15-20g蒸馏水 1000ml制法 将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2ml，校正pH为7.2-7.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121高压灭菌15min。此培养基可供一般细菌培养之用，高压后待温度降到56左右，倾注平板或制成斜面，作平板培养基时每个平皿中加入约20ml即可。如用于菌落计数，琼脂量为1.5%；如做成平板或斜面，琼脂量则应为2%。13、简述细菌分离鉴定的过程？病料染色镜检 接种、纯培养 动物试验 生化鉴定 血清定型及药敏试验。图1 细菌检验各环节的关系14、说明微生物经典分类鉴定方法的指标？经典分类法个体：细胞形态、大小、排列方式，染色反应，有无运动，各种特殊构造等 形态特征：菌落形态，在固体、半固体或液体培养基中的生长状态等营养要求：碳源、氮源、矿质元素、生长因子等生理生化特征：代谢产物种类、产量、显色反应等酶：产酶种类和反应特征等 生态学特性：生长温度，对氧的需要，酸碱度要求，宿主种类，生态分布等 血清学反应 其他15、简述显微镜油镜头的使用与保护方法？调试 打开电源，先采用低倍镜，使视野达到清晰光亮。加油 双手向上转动粗螺旋，使镜筒上升，将标本片固定于载物台上，使染色面对准集光器中央，加镜油于标本面，调换油镜头对准标本面。调焦点 用左手向下轻转粗螺旋，使镜筒下降，同时眼睛从右侧观察下降程度，待镜头入油后接触上玻片，用眼观目镜，反转粗螺旋，使镜筒慢慢上升，待看到模糊物象时，改用细螺旋上下调节，使物像达到完全清晰为宜（一般转动细调节前后半圈）。观察 观察时只使用细调。需改换视野时，一手操纵推进器，另一手转动细螺旋，做到配合自如。并养成左眼观察，右眼绘图的习惯。油镜头的保护 油镜头使用完结后，必须用擦镜纸滴加少量二甲苯将油擦洗干净（二甲苯用量宜少，以免镜片间粘胶溶解）。下降集光器，把接物镜转成“八”字，再下降镜筒，轻触镜台表面，避免直射日光，置于干燥处，以防受潮。16、简述细菌染色标本片的制备方法？由于细菌个体微小，基本上无色透明，故将其用适当染料染色观察，方能显示它的形态、大小、构造及染色特性等，在细菌和鉴别上有重要意义。制作方法如下。涂片 取清洁无油污载物玻片1张，接种环沾取生理盐水1-2环置于玻片中央，再将接种环火焰灭菌待冷后，沾取培养的菌落少许，混于生理盐水中，轻轻涂成均匀薄膜。干燥 室温自然干燥，也可将涂面向上，远离火焰上方微加温干燥（切勿加热过度，以防将标本烧枯）。固定 标本干燥后，通过酒精灯火焰三次（共约2-3秒钟），以杀死细菌并使之固定于玻片上。染色 可根据不同的染色要求，用相应染色液进行染色。17、说明荚膜染色的方法？荚膜对染料的亲和力较差，不易着色。用简单染色法可使菌体着色，荚膜呈浅色或无色，镜检时可见，但不易与背景区分。若经简单染色后（石碳酸复红染1min，水洗，风干），在载片的一侧加墨汁1滴，再用吸水纸条吸引，使墨汁经涂菌面引向另一侧，风干后镜检，菌体红色，背景黑色，菌体周围不着色的一圈即荚膜。荚膜染色用培养24-48小时的产荚膜菌株。因荚膜较薄且易变形或脱落，故制片时要轻轻涂抹，不加热，自然风干固定，以免荚膜变形。18、说明平板划线接种法（又称分离培养法）的程序？平板分离划线的方法较多，其中以分区划线法与曲线划线法较为常用。其目的是使细菌呈现单个菌落生长，便于同杂菌菌落鉴别。现只介绍分区划线法。所需材料是分离的细菌、普通琼脂平板等培养基和酒精灯、接种环等。 右手持接种环，经火焰灭菌，待凉后，挑取分离菌培养物少许。 左手持琼脂平板和皿盖，并使两者保持45度，呈打开状态。于火焰近处将材料涂于琼脂平板上端，来回划线，涂成薄膜（约占平板总表面积的1/10），划线时接种环与平板表面成30-40度角，轻轻接触，以腕力在平板表面行轻快地滑移动作，接种环不应划破培养基表面。 烧灼接种环，杀灭环上残留细菌，待冷（是否冷却，可先在培养基边缘处