结核感染T细胞检测呼吸科

结核感染T细胞检测临床应用 1 结核病的诊断现状 2 TB IGRA产品介绍 3 TB IGRA的临床应用 4 TB IGRA检测方法及结果解释 3 结核病现状 结核病 tuberculosis 是由结核分枝杆菌 tuberclebacillus 引起的一种慢性肉芽肿性炎 以肺结核最常见 死亡人数仅次于艾滋病 也可见于全身各器官 肺外结核占整个发病率的10 20 死亡率占结核病全部死亡率的14 1 17 6 全世界约三分之一的人群感染 2014年全球结核病报告 显示 2013年有900万新发病例 150万人死亡 中国是结核病高发区 发病数居全球第二 现有600万活动性肺结核 且患者人数逐年增加 始终位居全国甲乙类传染病的前列 电镜下的结核杆菌 结核发病机理 结核分枝杆菌 MTB 暴露 感染 9 复燃 注 感染后发病与否和机体易感性有关 5 10 HIV 10 治愈 活动性结核 发病状态潜伏性结核感染 LTBI 是宿主感染结核杆菌后尚未发病的一种特殊状态 未根治 COPD合并肺结核的特点结核症状不典型老年男性为多 男性为女性7倍之多痰结核菌检查涂片或培养阳性率70 PPD呈呈阴性或弱阳 结核抗体亦呈阴性或阳性X线胸片不典型 类似于一般炎症而常被误诊 对COPD合并肺结核诊断的延误 导致治疗不及时 易造成 肺部病灶痰菌量增加 传染性扩大病人体质进一步消耗 抗结核药物耐受能力差 不良反应加大免疫力进一步下降 痰菌阴转率降低 耐药菌增加病情迅速恶化 甚至危及生命 死亡率增加 矽肺患者易发生并发症 并发症会促使矽肺病情的进展 恶化 影响预后 也是造成矽肺患者死亡的重要原因 1990年至2010年共收治矽肺450例 发生并发症310例 已死亡140例 全部死于并发症 大量流行病学资料发现 矽肺患者合并结核发生率为10 30 矽肺患者的肺结核患病率为全国平均肺结核患病率的3 16 28倍 潜伏性结核感染的诊断皮肤结核菌素试验 TST 10mm 干扰素释放试验 IGRAs 潜伏性结核感染免疫学检测阳性 显示结核感染体内有活的结核分枝杆菌 但非活动型无疾病和症状不传播给他人给予药物 防止发展为活动性结核 结核诊断方法 活动性结核 结核诊断影像学方法细菌学方法病理学方法免疫学方法 有临床症状或影像学改变具传染性主要的传播源需及时治疗 TB IGRA方法介绍 ELISA ELISPOT 流式细胞术 IGRAsIFN greleaseassay 体外刺激 RD1抗原 原理 机体内被结核菌抗原致敏的效应T细胞 在体外受到相同抗原的刺激 在APC辅助下 后 会分泌大量IFN 细胞因子 通过IFN 的检测 判断结核感染情况 TB IGRA产品特性 高灵敏度 检出率90 以上高特异性RD1区编码的ESAT 6和CFP 10两个特异性抗原全血样本 体外检测采用外周血样本 取样方便 可检测所有结核感染 体外抗原刺激保证安全性定量考察ELISA检测平台定量考察效应T细胞受刺激后 干扰素释放总量 国内外相关研究 TB IGRA快速简便 是一种值得推广的检测方法 国内外相关研究 廖明等对比了血IGRA TST 抗酸杆菌 结核抗体在SCTB中的检测性能 敏感度分别为94 4 52 8 38 9 41 7 阴性预测值分别为91 7 52 8 48 8 55 3 IGRA在矽肺合并结核病中的应用 临床应用案例 肺结核辅助诊断 某院呼吸科病人 男临床症状 发热1周 咳嗽检测结果 TB IgG TB IGRA T N的值是21 5pg ml结果分析 TB IgG灵敏度低 易漏检 临床诊断 肺结核备注 2011年 WHO建议不再使用结核抗体检测结核感染 肺外结核辅助诊断 某院感染科 女 75岁临床症状 发热数日 胸痛 干咳检测结果 X射线胸腔积液影像 积液涂片 积液培养 TB IGRAT N350pg ml 积液单核细胞增多 血沉快结果分析 对于肺外结核的诊断 涂片与培养的阳性率极低 TB IGRA 结合其他非特异辅助指标可明确诊断肺外结核 临床诊断 结核性胸膜炎 临床应用案例 IGRA方法辅助诊断结核性胸膜炎 天津市海河医院 124例受试者 包括健康对照者30名 初诊结核性胸膜炎患者37例 恶性胸腔积液患者32例 非结核性胸膜炎患者25例 结论 用IGRA方法对结核性胸膜炎诊断的敏感性 特异性和诊断准确率分别为91 9 90 6 91 3 优于ADA和TB Ab 临床应用案例 肺炎与肺结核的鉴别诊断 某医院呼吸内科 男 59岁临床症状 肺部有积水 高烧发热 初步认定肺炎 抗生素治疗1周不见效果 高度怀疑结核 检测结果 痰涂片 结核抗体 TB IGRA 结果分析 传统结核检测检出率在20 40 灵敏度低 IGRA检出率在90 以上 阴性排除意义高于涂片和抗体 患者继续用药3周 病情好转 临床诊断 肺炎 17 MTB与其他杆菌感染的鉴别诊断 某院呼吸内科病人 男临床症状 发热 咳嗽 咳痰 呼吸困难 乏力 多汗 关节疼痛检测结果 痰涂片 菌培 肺部X射线可见肺结节 胸腔积液诊断过程 该院诊断为结核但治疗无好转 患者转院检测IGRAs 试管凝集实验 布病抗体 确诊布氏杆菌感染 与该院打官司胜诉 结果分析 由于痰涂片和菌培检出率低 阴性也未能引起重视 只凭X片和症状诊断为结核并治疗 治疗无效后 病人转院 检测IGRAs阴性 考虑排除结核 且病人为牧民 确诊布氏杆菌病 官司败诉后 该院才开始重视IGRAs检测 最终确诊 布氏杆菌病 临床应用案例 MTB与NTM的鉴别诊断 某院感染科病人 男临床症状 发热1周 咳嗽 少量痰检测结果 两次痰涂片 两次TB IGRA 肺部X射线无异常 后经菌培鉴定为菌培 结果分析 痰涂片不能区分非结核分枝杆菌 造成假阳性 而TB IGRA与菌培结果相符 对结核分枝杆菌有很好的特异性 临床诊断 鸟型分枝杆菌感染 临床应用案例 19 NTM 非结核分枝杆菌 比例增高 2000年全国流调分离的抗酸杆菌菌株中 NTM菌株占11 1 其中90 为非结核分枝杆菌肺病 NTM肺病的临床表现与结核病相似 既可有全身中毒症状 亦有局部损害表现 但症状和体征缺乏特异性 20 50 的病人无明显症状 除非做菌型鉴定 凭临床表现难与肺结核病相鉴别 PPD试验 弱阳性多见 但不能鉴别MTB和NTM感染 细菌学检查 常规痰涂片无法鉴别MTB和NTM 培养特性 固体培养基上 NTM菌落常光滑 部分菌落有色素产生 生长迅速 且在含PNB 对硝基苯甲酸 和含TCH 噻吩二羧酸肼 选择性培养基上均可生长 而结核分枝杆菌只在TCH选择性培养基上生长 使用抗TNF药物前排查结核的意义 06 16 2011 20 发病率 100 000患者 年 DixonWGetal AnnRheumDis2010 69 522 528 Tubachetal Arthritis60 1884 1894 发病率 100 000患者 年 潜伏性感染监控 某中学高三年级小规模结核爆发 初始病例 1例 7班 6月初 第一批疫情 5例 7班 8 9月 第二批疫情 10例 8例7班 9月 对师生采血进行IGRA检测 IGRA阳性者进行预防性服药 疫情控制 自行住院 全年级师生胸透 胸透阴影预防性服药 全年级师生PPD试验 疫情发展阶段 结核病例及分布 疫情时间 疫情初处理 一起小规模结核暴发流行的调查与控制 潜伏性感染流调结果 2010年流调发现的1301例结核感染者中 有症状者740例 56 9 无症状者561例 43 1 有症状结核病患者中 60岁及以上年龄组比例高 为60 2 有症状就诊的346例肺结核患者 只有124例患者 35 8 被诊断为肺结核 其次为气管炎 18 8 和感冒 16 5 等 潜伏性感染 抗结核治疗监控 定量检测 干扰素释放强度 可用于持续监控 Kobashi等利用IGRA对50例结核患者的治疗进行追踪检测 治疗开始后 结核患者中IGRA的敏感性和反应强度均有明显的下降趋势 抗结核治疗效果辅助评估 综上 TB IGRA 高特异性 高灵敏性 体外 全血 定量检测应用方向 肺结核辅助诊断肺外结核辅助诊断结核感染排查潜伏性感染监控 抗结核治疗追踪 TB IGRA的临床应用 TB IGRA在呼吸科应用汇总 肺结核的辅助诊断 尤其是细菌学检测阴性的肺结核的辅助诊断 TB IGRA从细胞水平上检测结核感染 检出率高 早期感染即可检出 实现早诊断早治疗 肺外结核的辅助诊断 TB IGRA取静脉血进行检测 克服肺外结核患者痰样找不到结核菌 病灶部位取样难的问题 呼吸系统疾病与结核的鉴别诊断 发热 咳嗽 咳痰 2周 咯血 胸痛等症状疑似结核 胸片 CT不能明确诊断者 抗炎治疗治疗效果不佳患者的结核排查 阴性结果在很大程度上可以排除结核 2周以上不明原因发热病人的结核感染排查 有研究发现其中20 是结核引起的 大部分是肺外结核 高危人群的结核感染筛查 如使用生物制剂 免疫抑制剂 大剂量激素患者 HIV患者 糖尿病患者 血液病和癌症放化疗之前患者进行结核筛查 以防陈旧性结核 潜伏性结核爆发以及近期结核感染 抗结核治疗效果跟踪以及潜伏性结核定期监控 TB IGRA结果是一个定量值 活动性结核患者随治疗进行阳性强度降低甚至转阴 潜伏感染患者若发生阳性强度明显升高 有发展成活动性结核风险 流调显示有85 90 新诊断的活动性肺结核由潜伏性结核演变而来 已有25个国家发布了IGRAs应用指南 美国 加拿大 英国 巴西 法国 西班牙 意大利 德国 澳大利亚 葡萄牙 爱尔兰 瑞士 丹麦 挪威 芬兰 捷克 斯洛伐克 波兰 保加利亚 克罗地亚 沙特 奥地利 南韩 日本 中国 潜伏性感染和活动性结核的辅助诊断 美国CDC 英国NICE 中国 疑似结核的辅助诊断 阴性结果排除感染 中国 在所有人群中可以完全代替PPD试验 美国CDC 日本厚生省 接受抗TNF a治疗前必须用IGRA进行结核杆菌感染的筛查 PPD筛查不再使用 瑞士卫生署和肺科协会 两个国际组织WHO ECDC也发布了应用指南 万泰TB IGRA试剂是 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 结核分枝杆菌 干扰素体外检测方法 中唯一提到的结核检测试剂 2013年6月 万泰TB IGRA 国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心 TB IGRA检测方法 阴性对照管N 阳性对照管P 检测管T 培养液无刺激原 培养液刺激抗原 培养液PHA TB特异性刺激抗原 RD1区 ESAT 6 CFP 10 无刺激效应 非特异性刺激抗原 PHA 评估 IFN升高水平 评估 IFN本底水平 评估T淋巴细胞活性 ELISA定量分析 TB IGRA结果判定 T 测试培养管 T 含量值N 本底对照培养管 N 含量值P 阳性对照培养管 P 含量值 TB IGRA结果判定 TB IGRA检验报告单 TB IGRA注意事项 采血管推荐使用BD或GreinerBio One肝素锂采血管 内毒素最少 对结果影响最小采血到分装不超过4小时 避免混血激烈 溶血等病人情况免疫系统异常患者检出效果受限不能严格区分活动或潜伏无