电针心经对急性心肌缺血大鼠血浆CGRP和EF-1含量的影响.doc

电针心经对急性心肌缺血大鼠血浆CGRP和EF-1含量的影响基金项目：安徽省自然科学基金项目（010431003）； 国家科学技术部重大基础前期研究专项（2002CCD02500） 作者简介：汪克明（1950-），男，副研究员。汪克明 周逸平 王月兰 陈业农（安徽中医学院经脉脏腑相关研究中心 安徽 合肥 230038）摘要 目的：探讨CGRP和EF-1在电针抗心肌缺血中的保护作用。方法：选用异丙肾上腺素盐酸盐复制大鼠急性心肌缺血模型，检测电针心经“神门”-“通里”段经脉主干前后血浆CGRP和EF-1含量的变化。结果：电针后，血浆CGRP含量上升（P0.01）,EF-1含量下降（P0.05），HRV的TV值减小，LF/HF比值下降速率减慢。结论：交感神经系统参与电针对心肌缺血性损伤的保护作用，CGRP是抗心肌缺血的主要介导物质之一。关键词：电针 心肌缺血 CGRP EF-1中图分类号：R245、3 文献标识码；A 文章编号：急性心肌缺血（acute myocardial ischemia）临床常称为冠状动脉粥样硬化症，简称冠心病（coronary heart disease，CHD），是临床常见病和多发病，是当今医学研究热点之一。近年来，国内外临床和实验研究均表明：电针心经对急性心肌缺血具有良好的保护作用1-3，其机制可与增强冠状动脉灌流量、提高心肌耐缺氧能力和抗氧化损伤等因素相关。降钙素基因相关肽（calcition gene-related peptide，CGRP）是最强大的舒血管肽之一，主要作用是增加血管灌流量，它与内皮素（endothelin，ET）是心血管系统中一对拮抗因子，与CGRP作用相反。本实验通过观察电针急性心肌缺血大鼠心经“神门”-“通里”段前后血浆CGRP和ET-1含量的变化，记录自主神经系统兴奋性指标心率变异性（HRV），探讨电针心经抗心肌缺血机理，为临床应用和经脉脏腑相关研究提供实验依据。1.材料与方法1.1动物与分组 健康wistar大鼠36只(由安徽医科大学实验动物研究中心提供)，雌雄各半，体质量为20020g，随机分为正常组、模型组和电针心经组，每组12只。1.2实验方法与模型复制 各组动物实验前均禁食过夜12小时以上,每次实验各组选一只同性别、体重差小于10%的动物同步进行。按70ml/L的水合氯醛5ml/kg体质量腹腔注射麻。仰卧位固定，标心电图监护。模型复制参考文献4-6略作改进，将异丙肾上腺素盐酸盐（isoproterenol hydrochleride，ISO，美国SIGMA公司产），用0.1NaHSO3配成2%溶液,按100mg/kg体重(5ml/kg体重)静脉注射。1.3 穴位与电针 依据大鼠的常用针灸穴位和体表骨性标志，电排针刺激左上肢心经主干“神门”-“通里”段，刺入的3根银针电极，间距23mm，并联至刺激器，刺激参数：2Hz疏波，电流强度1.4mA(峰-峰值),参考电极右踝上内侧部。1.4检测指标 用RM-86多导生理记录仪（日本产）的SMUP软件分析系统（上海产），同步记录三组动物心率变异性（heart rhythm variability，HRV）。血浆CGRP和ET-1的测定用放射免疫法，抽取静脉血3ml放入含抑肽酶60l的试管内，同时加入10%的依地酸二钠（EDTA-Na2）50l，4离心5分钟（4000r/min），取血浆或上清液，-20保存待测，转流中所测样本均经Hct值校正样本稀释的影响，试剂盒由北京东亚免疫技术研究所提供，具体操作按说明书进行。1.5统计学处理 采用SPSS10.0软件统计。数据用XS表示，配对t检验。2.结果2.1电针心经对大鼠HRV的影响 模型复制后，急性心肌缺血模型大鼠HRV的总心率变异性（total heart rhythm variability，TV）值高于正常组（P0.01），其LF/HF比值显著低于正常组（P0.01）。电针30min后，电针心经组TV值显著低于非电针模型组（P0.01），LF/HF比值则高于模型组（P0.05），见表1。表1 电针心经对大鼠HRV的影响（XS）组别例数参数电针前停针后即刻停针后10分正常组12TVLF/HF0.890.180.880.180.870.170.880.170.910.190.890.18模型组12TVLF/HF24.195.740.450.1465.7516.38*0.270.11*110.3522.310.220.07电针组12TVLF/HF24.175.160.440.158.452.12*0.400.13*4.331.03*0.450.14*与正常组比较：P0.05，P0.01；与模型组比较：* P0.05，*P0.012.2电针心经对大鼠血浆CGRP和ET-1含量的影响 复制模型后，血浆CGRP和ET-1均高于正常对照组（P0.01或0.05），电针心经“神门”-“通里”每30min后，电针组CGRP显著升高（P0.01）而ET-1则明显下降（P0.05），见表2。表2 电针心经对大鼠血浆CGRP和ET-1含量的影响组别例数电针前（mg/L）电针后（mg/L） CGRP ET-1CGRPET-1正常组12110.4832.2785.3623.16110.532.1985.7333.21模型组12242.18119.55121.2531.47273.43122.54134.9634.68电针组12243.69118.74121.3631.53384.19184.45*98.1926.45*与正常组比较：P0.05，P0.01；与模型组比较：* P0.05，*P0.013.讨论 原穴是脏腑原气经过和留止的部位，“神门”属心经原穴。“神门”-“通里”段位于心经原穴区域。针刺该区域后，可见急性心肌缺血大鼠HRV的总心率变异性（TV）值显著减小，表明电针可提高心脏功能。HRV的LF/HF比值是反映自主神经系统平衡的动态变化指标。其比值上升，以交感神经系统兴奋占优势，反之副交感神经系统兴奋占优势。电针心经后，可见急性心肌缺血大鼠LF/HF比值显著高于模型组，表明，电针心经可使交感神经系统兴奋性增高。CGRP是一种强大的舒血管活性肽，结构与肾上腺髓质素（adrenomedllin，AM）相似，功能亦相似，广泛分布于血管内、心室、室间隔、窦房结、房室结、乳头肌和冠脉动脉壁的C类神经纤维中，心脏本身含有丰富的CGRP受体，其主要作用是促进血管舒张。电针心经后，可见血浆中CGRP含量增加，而CGRP的拮抗因子缩血管物质ET-1含量下降，表明电针心经后，CGRP是改善心肌缺血功能的介导物质之一，而ET-1含量的下降起协同CGRP的作用。综上所述，本实验结果表明，交感神经系统是电针心经的中枢调控的传出途径，CGRP是改善心肌缺血的重要介导物质之一。Effect of Electroacupuncture(EA) the Heart Meridian on Contents of CGRP and ET-1 in Plasma in Acute Myocardial Ischemia Rats WANG Ke-ming, ZHOU Yi-ping, WANG yue-lan, CHEN ye-nong(Research centre on the correlation between Channels and Viscera, Anhui College of Traditional Chinese Medicine, Anhui Hefei 230038,China)Abstract: Objective: To explore the protective role of CGRP and ET-1 on EA the heart meridian resisting the acute myocardial ischemia in rats. Method: Acute myocardial ischemia was modeled by high-dose isoproterenol hydrochleride(ISO)100mg/kg weight following ip. administration in rats. The content changes of CGRP and ET-1 in plasma were observed before and after EA the “Shen-men”-“Tong-li” section of heart meridian. Result: After EA, the content of CGRP was increased(P0.01), and ET-1 was decreased(P0.05), in plasma, The TV ratio of HRV was cut clown and decreasing speed of its LF/HF ratio was slow down. Conclusions: It is suggested that the sympathetic nerve system p