乙肝病毒DNA的实验室检测

LOREMIPSUMDOLOR 乙肝病毒DNA的实验室检测袁立云 1 荧光定量PCR技术2 乙肝病毒的感染3 HBV DNA与临床 荧光定量PCR技术 荧光定量PCR技术 Polymerasechainreaction PCR 聚合酶链式反应 是一种DNA的快速扩增技术 PCR技术通过两个短的称为引物的DNA小片段和一种耐热酶 TaqDNA聚合酶 的作用 经过高温变性 低温退火 适温延伸三个步骤在3个小时内反复循环25 30次 把特定的DNA片段扩增1000万倍 每个PCR体系含4种主要成分 含有待扩增序列的DNA模板 引物 TaqDNA聚合酶 脱氧核糖核酸三磷酸 dNTP 实时荧光定量PCR技术 是指在反应体系中加入荧光标记 利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程 通过标准曲线对PCR终产物的分析 最终实现对未知的起始模版进行定量分析的一种技术 是迄今对已知基因序列的核酸测定中最灵敏的方法 荧光定量PCR技术 PCR反应过程 d NTPs Taq酶 Primers 反应组分 变性 延伸 重复 退火 循环24个拷贝 循环38个拷贝 荧光定量PCR原理 插入染料法SYBRGreenI杂交探针法 最常用 TaqMan TaqMan探针 d NTPs Taq酶 Primers 反应体系 变性 l 退火 1 链取代 2 水解 3 聚合 4 检测荧光 l 乙肝病毒的感染 乙肝病毒的感染 一 乙型肝炎病毒结构及特点 HBsAg 是HBV感染的主要标志HBsAb 保护性抗体HBcAg 仅存于感染的肝细胞核内 一般不存在于血循环中HBcAb 非保护性抗体 HBcAb IgM提示HBV处于复制状态HBeAg HBV复制及强感染性的指标HBeAb 有一定的保护作用 预后良好 乙肝病毒的感染 二 HBV DNA与 两对半 1 两对半 机体的免疫反应状态 2 携带者 大三阳 小三阳 等免疫学指标不能反应体内病毒复制水平与感染程度 FQ PCR 检测的是HBV本身的遗传物质 DNA 是病毒存在和复制的最可靠 最直接的指标 3 血清学指标 不能排除HBV感染 乙肝病毒的感染 5 HBeAg阳性标本HBVDNA检出率90 左右HBeAg与HBVDNA有着良好的相关性 4 也可能出现HBsAg HBV DNA 乙肝病毒的感染 乙肝病毒的感染 慢性HBV感染分期及相关实验室检测指标 鲁凤民 庄辉 乙型肝炎实验室诊断研究进展2009 HBV DNA与临床 HBVDNA检测的临床意义 HBVDNA是HBV存在最直接的依据HBVDNA是HBV复制的标志HBVDNA是患者具有传染性的标志HBVDNA对乙肝两对半起补充作用HBVDNA是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标HBVDNA可检测出隐匿性慢性乙型肝炎 有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断 提供直接证据缩短 窗口期 HBVDNA检测的临床意义 调查表明并不是所有 大三阳 的病人都处于HBV复制期 具有传染性 也不是所有 小三阳 的病人HBV都无复制 因此 要准确知道HBV是否处于复制状态 最准确的方法还是通过检测HBVDNA来决定 HBVDNA检测的临床意义 HBVDNA检测的临床意义 HBsAg和HBeAg均阳性而HBVDNA阴性 干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制 PCR所用引物相应的DNA序列发生突变 此引物与突变DNA不能配对结合 病毒DNA整合于宿主肝细胞染色体而血中游离HBVDNA很少或缺乏 目前尚无一种能迅速 直接杀死清除乙肝病毒的药物 最好的抗病毒药物疗效也仅能达到50 左右 目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗病毒药物主要有两大类 干扰素 重组人 1b干扰素 2a 2b干