串联质谱技术在临床检验中的应用ppt课件.pptx

ABSCIEX串联质谱技术在临床检验中的应用 1 主要内容 LC MS MS简介部分基础临床研究项目新生儿先天性代谢异常筛查维生素D测定45种氨基酸准确定量部分高级临床研究项目免疫抑制剂监测痕量睾丸酮测定痕量雌激素测定甲状腺素测定肾上腺素测定 2 质谱能做什么目标化合物的定性 定量 样品处理 测试分析 结果报告 3 ABSCIEX三重四级杆质谱定量分析的黄金标准 4 LC MS MS 串联质谱技术已经证明了它可以承担起检测新生儿遗传疾病的重任 少许新生儿的血样就可满足直接分析 减少假阳性的结果串联质谱测试法主要是通过从新生儿体内提取血液 通过特定仪器对血液分子进行分析 从而检测新生儿是否患病 5 一些成熟的临床研究项目 6 新生儿先天性代谢异常IEM InbornErrorsofMetabolism 新生儿疾病筛查 NeonatalScreening 是指医疗保健机构在新生儿群体中 用快速 简便 敏感的检验方法 对一些危及儿童生命 危害儿童生长发育 导致儿童智能障碍的一些先天性疾病 遗传性疾病进行群体筛查 从而使患儿在临床上未出现疾病表现 而其体内生化 激素水平已有明显变化时就做出早期诊断 结合有效治疗 避免患儿重要脏器出现不可逆的损害 保障儿童正常的体格发育和智能发育的系统服务 尤其对一些目前还无法在产前做出诊断的先天性疾病进行普查 根据40年来各国经验 只要能够建立一个完整有效的筛查系统 对个人 家庭和社会都可收到极好的效果 有显著的经济和社会效益 以苯丙酮尿症 PKU 为例 在国际上 日本人的PKU发病率最低 为1 80500 其成本效益比达1 2 5 根据计算 即使发病率为1 140000 其成本效益比仍达到1 1 7 中国的PKU发病率约为1 11000 经济效益应该更为可观1994年日本总结了开展筛查17年的费用 发现若不进行筛查 治疗和护理患儿的费用将是用于全民筛查费用的4 2倍 7 典型的IEM症氨基酸 酰基肉碱和部分脂肪酸代谢异常 苯丙酮尿症酪氨酸代谢紊乱高胱氨酸尿瓜氨酸血症超苯丙氨酸血症精氨酸酶缺乏症精氨琥铂酸尿症超甲硫氨酸血症 中链槭糖尿症 MCAD 短链槭糖尿症 SCAD 长链槭糖尿症 LCAD 超长链槭糖尿症 VLCAD 戊二酸血症GlutaricAcidemia3 Hydroxy 3 methylglutaryl CoA lyaseDeficiency KetothiolaseDeficiency异戊酸血症甲基丙二酸血症丙酸血症MultipleCarboxylaseDeficiency 8 新生儿筛查的工作流程 9 新生儿疾病筛查测定常见氨基酸和乙酰肉碱 10 新生儿疾病筛查数据采集 处理的自动化流程 数据 检测报告 11 国内新筛的主要用户 12 新筛采血注意事项 采血时间最好在婴儿出生72小时并吃饱6次以上奶后进行因为未吃或未摄入足够的乳汁 婴儿血液中的苯丙氨酸 PA 浓度偏低 检测时易导致假阴性 同时出生72小时后采血可避开生理性促甲状腺素 TSH 上升时机 减少甲状腺功能低下症 CH 筛查的假阳性 并可防止TSH上升延迟患儿的假阴性 13 器材 小于2 4mm的消过毒的带柄小刀消毒用酒精消毒后的纱布 软布血液收集滤纸Schleicher Schuell新华滤纸手套 新筛采血注意事项 14 2CompleteALLinformation Donotcontaminatefilterpapercirclesbyallowingthecirclestocomeincontactwithspillageorbytouchingbeforeorafterbloodcollection Keep SUBMITTERCOPY ifapplicable 新筛采血注意事项 15 阴影线面积处是采血安全区 足跟内 外侧缘处 容易取得末梢血样 新筛采血注意事项 16 用41度的湿软布热敷3 5分钟 使局部充血 新筛采血注意事项 17 用75 酒精棉签消毒采血部分 待酒精自然挥干或用消毒干棉球拭去留在足跟上的酒精 新筛采血注意事项 18 将取血部位皮肤绷紧 用一次性采血针刺入皮肤内3mm 使血液自行流出 用消毒干棉球拭去第一滴血 此后流出的一大滴血珠 新筛采血注意事项 19 大滴血轻轻地接触滤纸 让血液在滤纸片圆圈内自然吸入 渗透到背面 不要多滴血在同一圆圈内 血斑大小直径为10mm 每个血斑的血量约为40 50微升 针刺后挤血 应在距离穿刺点较大范围内稍加挤压 使血液流出 新筛采血注意事项 20 新筛采血注意事项 用连续的血滴填充剩余的滤纸环 如果血流减少 重复 注意取血处与程序一致 21 取血完毕 血片应在室温中水平放置清洁干燥处自然晾干最少4小时 新筛采血注意事项 22 收集后24小时邮寄4度可长时间保存 新筛采血注意事项 23 新生儿筛查所需的设备 试剂 24 新筛用的同位素内标记物 一般使用剑桥同位素的衍生化同位素内标 成本合大约15 30元 r人份 这个属于自配试剂 没有医疗器械许可证 如果使用拥有医疗器械许可证的试剂 那么有两种选择 PE市场价约100元 人份 国产山东英盛市场价约80 人份 25 ESI MS MS花费 26 维生素D测定 维生素D是骨骼健康的重要指标最近的研究表明维生素D缺乏可能和其他一些身体状况相关 骨质疏松几种类型的癌症自身免疫性疾病心脏病糖尿病andmore 由于公众增加关注维生素D缺乏对于身体健康的影响 在过去的1 2年内 样品数量检测大大增加 目标分析物通常是25 OH VitD2and25 OH VitD3 27 维生素D测定维生素D的A D M E及其与钙 磷平衡的关系 MichaelF Holick ResurrectionofvitaminDdeficiencyandrickets TheJournalofClinicalInvestigationVolume116 Number8 August2006 28 维生素D测定 29 维生素D测定使用脱水离子作为母离子 ControlLevelI数据 ABSCIEXAPI3200 30 维生素D测定使用脱水离子作为母离子 重现性表现 ABSCIEXAPI3200 VitD3重现性与准确度 31 45种氨基酸的测定氨基酸的临床意义 肾病患者体液氨基酸的特点血液游离氨基酸增加 慢性肾炎和尿毒症患者Val Gay Try Phe比例降低慢性肾炎患者尿液中游离氨基酸升高神经系统相关氨基酸 脑氨基酸兴奋性氨基酸谷氨酸 谷氨酰胺 Glu Gln 天冬氨酸 Asp 抑制性氨基酸 甘氨酸 Gly 7 氨基丁酸 GABA 牛磺酸 Tau 其他牛磺酸与心脏病的关系 32 45种氨基酸的测定aTRAQ 方法学原理 33 45种氨基酸的测定aTRAQ 示例数据 满足定量的严苛要求 线性范围1 1000 M6次进样重现性0 8 4 9 平均值2 2 准确度95 4 102 7 平均值100 1 34 45种氨基酸的测定亮氨酸 正亮氨酸 异亮氨酸 别异亮氨酸 35 免疫抑制剂测定 免疫抑制药物主要用于器官移植病人手术后的排异反应的抑制 主要特点用药窗口窄 低 无效 高 有毒 长期监测 36 免疫抑制剂测定示例数据 部分免疫抑制药物 37 免疫抑制剂器官移植患者临床用药窗口对重现性的要求 优异的重现性 是用药安全性的保证 限量值 38 免疫抑制剂器官移植患者临床用药窗口对重现性的要求 优异的重现性 是用药安全性的保证 39 痕量睾酮的意义不同人群参考值 TIETZTextbookofClinicalChemistryandMolecularDiagnostics 4thEdition 40 痕量睾酮测定数据来源 美国CDC睾酮测试标准化项目 标准结果 液质测定结果 41 痕量睾酮测定数据小结 对灵敏度的特别要求 42 雌激素类的意义 雌激素是一种女性激素相关的整类 Estrone雌酮 E1 Estradiol雌二醇 E2 Estriol雌三醇 E3 雌酮 E1 广泛存在整个身体 这是唯一在妇女绝经后依然能存在的雌激素 雌二醇 E2 是育龄妇女的主要的性激素 是维持女性特征和功能的雌激素 另外 雌二醇对于妇女的骨骼健康是非常重要的激素 雌二醇的失调会引起相关妇科疾病 甚至相关女性癌症 雌三醇 E3 的是由胎盘产生 只有在怀孕期间据有重要的意义 43 雌激素测定不同人群参考值 TIETZTextbookofClinicalChemistryandMolecularDiagnostics 4thEditionEstradiol LC MSMStest 300K 500KsamplesinUSforoneyearReference Steroids73 2008 1318 1321 Steroids73 2008 1333 1338 44 雌酮 E1 雌二醇 E2 测定定量下限 Estrone5pg mLLLOQ S N 22 Estradiol5pg mLLLOQ S N 19 青春期前女童体内E2含量超过20pg mL 是性早熟的危险信号 此时 灵敏度的要求至关重要 45 雌酮 E1 雌二醇 E2 测定新的方法 尿液样品衍生化法 5pg mL 0 2ng mL 5pg mL 46 雌酮 E1 雌二醇 E2 测定尿液样品衍生化法 47 甲状腺素测定要点 两种前处理方法 同一种液质方法 分别测定总T3 T4和游离T3 T4直接法测定游离T3 T4液 液萃取法提取总T3 T4 48 甲状腺素测定示例数据 血清中添加1pg mL游离T3 T4MRM色谱图 49 甲状腺素测定示例数据 总T3 T4和游离T3 T4重现性和灵敏度 Total Free 50 肾上腺素监测要点 既是疾病标志物 又是治疗药物同时测定尿样 血样50 L尿样或500 L血浆样品 SPE净化后进样测定范围血浆中10 4000pg mL尿样25 1000ng mL Metanephrine Normetanephrine Methoxymetanephrine 51 肾上腺素监测示例数据 血浆中肾上腺素MRM色谱图 Metanephrine Normetanephrine Methoxymetanephrine 52 肾上腺素监测示例数据 定量数据 Metanephrine10 4000pg mL r 0 9982 53 1 iMethodTM测试法分析类固醇类物质11种类固醇 硫酸脱氢表雄酮 DHEAS 脱氢表雄酮 DHEA 氢化可的松 皮质酮 11 脱氧皮质甾醇 雄烯二酮 睾酮 17 羟基孕酮 孕酮 雌二醇 25 二羟维生素D32 iMethodTM测试法分析尿液中止痛药含量3 iMethodTM测试法分析血清 血浆样品中25 羟基维生素D2 D34 iMethodTM测试法分析维生素D5 iMethodTM测试法分析人体血浆中25 单羟基维生素D2 D36 iMethodTM测试法直接进样LC MS MS分析4种免疫抑制剂药物4种免疫抑制剂药物 环孢霉素 Cyclo sporineA 他克莫司 Tacrolimus 西罗莫司 Sirolimus 依维莫司 Everolimus 7 iMethodTM测试法LC MS MS分析血浆中霉酚酸8 iMethodTM测试法分析4种免疫抑制剂药物9 iMethodTM测试法在线固相提取4种免疫抑制剂药物 iMethod目录 54 10 iMethodTM测试法分析人体血清中低浓度睾酮11 iMethodTM测试法分析睾酮12 iMethodTM测试法分析雌性激素13 iMethodTM测试法分析人体血清中抗逆转录病毒药物14