化妆品中金黄色葡萄球菌检测ppt课件.ppt

金黄色葡萄球菌检测 第六组 化妆品中金黄色葡萄球菌检测 组别 第六组成员 钱龙朱凯许祥博林志豪 简介 金黄色葡萄球菌 Staphyloccocusaureus 是人类的一种重要病原菌 隶属于葡萄球菌属 Staphylococcus 有 嗜肉菌 的别称 是革兰氏阳性菌的代表 可引起许多严重感染 而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量 卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准 速冻面米制品 允许金葡菌限量存在 流行病学 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在 空气 水 灰尘及人和动物的排泄物中都可找到 因而 食品受其污染的机会很多 美国疾病控制中心报告 由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位 仅次于大肠杆菌 金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题 在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒 占整个细菌性食物中毒的33 加拿大则更多 占到45 我国每年发生的此类中毒事件也非常多 引发病症 金黄色葡萄球菌肠炎是金黄色葡萄球菌引起的 多因原发疾病长期用抗生素引起肠道菌群失调所致 抗生素敏感菌株受到抑制 耐药的金黄色葡萄球菌株趁机繁殖 金黄色葡萄球菌为侵袭性细菌 能产生毒素 对肠道破坏性大 所以金黄色葡萄球菌肠炎起病急 中毒症状严重 主要表现为呕吐 发热 腹泻 呕吐常在发热前出现 发热很高 轻症大便次数稍多 为黄绿色糊状便 重症大便次数频数 每日可达数十次 大便呈暗绿色水样便 外观像海水 所以叫海水样便 粘液多 有腥臭味 有时可排出片状伪膜 将伪膜放入生理水 脱落的肠粘膜即漂在水面上 对诊断帮助很大 体液损失多 患儿脱水 电解质紊乱和酸中毒严重 可发生休克 挑选大便粘液部分涂片 在显微镜下检查可见大量脓细胞 如经革兰氏染色 显微镜检查可见成堆的大量革兰氏阳性球菌 大便培养金黄色葡萄球菌生长 即可明确诊断 1 方法提要 根据本菌特有的形态及培养物质性 应用BairdParker平板进行分离 该平板中的氯化锂可抑制革兰氏阴性细菌生长 丙酮酸钠可刺激金黄色葡萄球菌生长 以提高检出率 并利用分解甘露醇和血浆凝固酶等特征 以兹鉴别 2 7 5 的氯化钠肉汤 成分 蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠75g蒸馏水1000ml制法 将上述成分加热溶解 调pH为7 4 分装 121 151b 15min高压灭菌 3 血琼脂培养基 成分 营养琼脂100ml脱纤维羊血 或兔血 10ml制法 将营养琼脂加热溶化 待冷至50 左右以无菌手续加入脱纤维羊血 摇匀 制成平板 置冰箱内备用 4 甘露醇发酵培养基 成分 蛋白胨10g氯化钠5g甘露醇10g牛肉膏5g0 2 溴麝香草酚蓝溶液12ml蒸馏水1000ml制法 将蛋白胨 氯化钠 牛肉膏加到蒸馏水中 加热溶解 调pH7 4 加入甘露醇和指示剂 混匀后分装试管中 115 101b 20min灭菌备用 5 兔血浆制备 取3 8 柠檬酸钠溶液 121 151b 30min灭菌 1份加兔全血4份 混匀静置 2000 3000r min离心3 5min 血球下沉 取上面血浆 6 设备和材料 6 1显微镜 6 2培养箱 6 3离心要 6 4灭菌吸管 1ml 5ml 10ml 6 5灭菌试管 6 6载玻片 6 7酒精灯 7 操作步骤 7 1增菌 取1 10稀释的样品10ml接种到90mlSCDLP液体培养基中 如无此培养基也可用7 5 氯化钠肉汤 置37 培养箱 培养24h 注 如无此培养基也可用7 5 氯化钠肉汤 检验含防腐剂的化妆品时 可在1000ml此培养基中加1g卵磷脂 7g吐温80 7 2分离 自上述增菌培养液中 取1 2接种环 划线接种到血琼脂平板 置37 培养24 48 在血琼脂平板上菌落呈金黄色 大而突起 圆形 不透明 表面光滑 周围有溶血圈 挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上 置37 培养24H 7 3染色镜检 挑取分纯菌落 涂片 进行革兰氏染色 镜检 金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌 排列成葡萄状 无芽胞 无夹膜 致病性葡萄球菌 菌体较小 直径约为0 5 1 m 7 4甘露醇发酵试验 取述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中 置37 培养24h 金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸 7 5血浆凝固酶试验 7 5 1玻片法取清洁干燥载玻片 一端滴加一滴灭菌生理盐水 另一端滴加一滴血浆 用接种环挑取待检菌落 分别在生理盐水及血浆中充分研磨混合 血浆与菌苔混悬液在5min内出现团块或颗粒状凝块时 而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固现象者为阳性 如两者均无凝固现象则为阴性 凡玻片试验呈阴性反应或盐水滴与血浆滴均有凝固现象 再进行试管凝固酶试验 7 5 2试管法吸取1 4新鲜血浆0 5ml 放入灭菌小试管中 再加入待检菌24h肉汤培养物0 5ml 混匀 放37 温箱或水浴中 每半小时观察一次 24h之内如呈现凝块即为阳性 同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0 5ml1 4血浆混匀 做为对照 8 检验结果报告 凡在上述选择平板上有可疑菌落生长 经染色镜检 证明为革兰氏阳性葡萄球菌 并能发酵甘露醇产酸 血浆凝固酶试验阳性者 可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌 检验报告 1 按常规程序检验 凡分离出革兰氏阳性葡萄球菌的疑似菌落 经证实可发酵甘露醇 血浆凝固酶阳性的菌株 可报告检出金黄色葡萄球菌 2 如果分离的疑似菌落不发酵甘露醇 但血浆凝固酶阳性也可断定为检出金黄色萄葡球菌 3 分离出的葡萄球菌疑似菌落 不发酵甘露醇 血浆凝固醇阴性 判断未检出金黄色葡萄球菌 在此添加段落内容 Content 2 1 Thankyou 后面内容直接删除就行资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用 主要经营 网络软件设计 图文设计制作 发布广告等公司秉着以优质的服务对待每一位客户 做到让客户满意 致力于数据挖掘 合同简历 论文写作 PPT设计 计划书 策划案 学习课件 各类模板等方方面