（药剂学专业论文）小儿金宁口服液的药学研究.pdf

原创性l 声明 本人郑重声明 所呈交的学位论文 是本人在导师的指导下 独立进行研究工 作所取得的成果 除文中已经注明引用的内容外 本论文不包含任何其他个人或集体 己经发表或撰写过的作品成果 对本文的研究做出重要贡献的个人和集体 均已在文 中以明确方式标明 本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担 学位论文作者 需亲笔 虢 觞节易肌日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留 使用学位论文的规定 同意学校保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版 允许论文被查阅和借阅 本人授 权南京中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索 可 以采用影印 缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文 保密口 在2 年解密后适用本授权书 本学位论文属于不保密口 请在以上方框内打 学位论文作者 需亲笔 签名 半荔雾 沙7 年占月f 日 导师 需亲笔 签名 桫 砷年占月 7 日 目录 中文摘要 i a b s t r a c t 一 一 一 一一一 一 i 正文 第一章文献综述 1 第二章d j l 金宁口服液的拆方研究 1 4 一 药材的来源及品质评价 1 4 二 拆方样品的制备及质量评价 2 3 三 拆方样品的药效学研究 2 9 第三章 j l 金宁口服液的工艺研究 3 7 第一节提取工艺研究 3 7 一 挥发油提取工艺研究 3 7 二 提取溶剂的选择 3 9 三 正交试验法优选水提工艺 4 3 第二节精制工艺研究 4 8 一 醇沉工艺选择 4 8 二 精制工艺选择 5 0 第三节成型工艺研究 5 7 一 口服液矫味研究 5 7 二 中试工艺研究 5 9 第四章质量标准研究 6 1 第五章初步稳定性研究 7 5 第六章 j j l 用药剂型综述 8 2 结语 9 3 致谢附录 9 4 和各 器官的功能尚未成熟 特别是婴幼儿 肝 肾功能 中枢神经系统和内分泌系统的发 育尚不健全 对许多药物的代谢 排泄和耐受性差 用药必须谨慎 有统计表明 国 内市场9 0 0 的药物都没有儿童剂型 儿童发病率高于成人 我国患病儿童占总患病 人口的2 0 0 以上 但用于儿童常见疾病的专用药物却很少 不能满足儿童保健事业 的需要 小儿金宁口服液是专门针对儿科常见病感冒中最多见证型风热感冒的中药制剂 综合考虑了小儿的生理 病理特点 研制的治疗小儿风热感冒的良药 由金银花 连 翘 荆芥 薄荷等中药组成 方中金银花为君药 金银花味甘 性寒 归肺 心 胃 经 功能清热解毒 疏风解表 消痈散肿 凉血止痢 连翘为方中臣药 连翘味苦 性微寒 归肺 心 胆经 功能清宣肺热 清心安神 解毒消肿 薄荷 荆芥 贯众 蚤休 桔梗 野菊花等为佐使药 共具疏风解表 清热解毒之功 经临床验证 疗效 显著 无毒副作用 痊愈显效率在9 0 0 以上 实验研究表明 本制剂具有抗流感病 毒 解热 止痛 抗炎等综合治疗效应 体现了中医药辨证治疗小儿感冒的特色 本试验研究课题包括拆方研究 制剂工艺学研究 质量标准研究 初步稳定性试 验 1 拆方研究 根据临床用药经验方 我们结合制剂学指标和药效学指标进行筛选 最后确定上 述8 味药的组方为最优精简方 2 制剂工艺学研究 在制剂学研究中 我们注重在保证原方疗效的基础上 选择合适的剂型 并根据 方中药材有效成分的理化性质 选择合理的制备工艺 2 1 挥发油提取工艺 由于方中多味药材含有挥发油 并且根据文献其都有明显的药理活性 所以我们 对挥发油的提取进行了正交试验 以期将挥发油尽数提取出来 确定工艺为药材加1 0 倍量水浸泡3 小时 水蒸气蒸馏8 小时 2 2 水提醇沉工艺 采用正交试验法进行优选 以绿原酸 总黄酮含量为评价指标 确定提取工艺条 件为 方中八味中药加1 2 倍量水提取2 次 每次1 5 小时 合并水煎液 浓缩至相对 密度为1 1 0 放冷后调至含醇量6 0 静置沉淀除杂质 摘要 2 3 精制工艺 比较二次醇沉法 超滤法 活性炭吸附法对药液的进一步精制作用 选择能最大 保留有效成分 去除杂质 增加口服液澄明度和稳定性的精制方法 确定精制工艺为 超滤 2 4 口服液的矫味 采用单因素试验考察单糖浆加入量和水果香精加入种类 确定单糖浆加入量为3 0 香精种类为哈密瓜口味 3 质量标准研究 3 1 鉴别 用薄层层析法对制剂中金银花 连翘 荆芥 薄荷 绵马贯众 桔梗六味中药进 行了药材对比定性鉴别 结果表明该法专属性强 3 2 指标性成分的含量测定 本制剂主药为金银花 选择绿原酸为质量控制指标 高效液相色谱条件简单 易 于分离 阴性制剂无影响 经过中试样品的含量测定 初步确定本品中绿原酸含量每 支 1 0 m 1 不得少于1 5 m g 并对其进行了方法学考察 平均回收率为1 0 3 6 5 r s d 为2 9 证明本研究中所用方法准确 可靠 可用于该产品的含量测定 4 初步稳定性研究 按 新药审批办法 的有关规定 对本品在室温下进行了3 个月的连续考察 结 果稳定性良好 用加速试验法将药品在温度3 7 4 0 和相对湿度7 5 5 的条件下 保存 每月考核一次 连续3 个月 结果稳定性好 按照室温2 5 有效期 t 的 考核标准 该药品的有效期暂定为两年 本文参照 药品注册管理办法 试行 附件一 中药 天然药物分类及申报资 料要求中对第6 类新药研制的要求 进行了以下工作 文献资料的收集与整理 片剂 工艺 质量标准及初步稳性等研究 并进行研究资料的总结 关键词 小儿金宁口服液 拆方 工艺 质量标准 稳定性研究 小儿金宁口服液的药学研究 p h a r m a c e t i cs t u d i e so nj i n n i n go r a l l i q u i df o r c h i l d r e n a b s t r a c t j i n n i n go r a ll i q u i df o rc h i l d r e n w h i c hi sm a d af r o mf l o sl o n i c e r a e f r u c t u sr u c t u s f o r s y t h i a e h e r b as c h i z o n e p e t a e h e r b am e n t h a ea n do t h e rf o u rk i n d so fh e r b s i sa c o m p o u n dp r e p a r a t i o nf o rt r e a t i n gc h l i d r e n sc a t c h i n gc o l db yf e v e r t h em a i nr e s e a r c h c o n t e n t so nj i n n i n go r a ll i q u i df o rc h i l d r e ni n c l u d et e c h n o l o g yo ft h ep r e p a r a t i o n q u a l i t y s t a n d a r d s t h es t a b i l i t yo ft h ep h a r m a c e u t i c a l sa n dt h ee f f e c to fm e d i c i n e 1 f o r m u l ac o m p o n e n t s a n a l y s i s w ep a yap o i n tt od e c r e a s et h ec o m p o n e n t so ft h eo r i g i n a l p r e s c r i p t i o na n de n h a n c e c o m p l i a n c eo nt h ef o u n d a t i o no fg u a r a n t e e i n gt h eo r i g i n a lv a l i d s b yc o m p r e h e n s i v e c o n s i d e r a t i o no ft h ep r e p a r a t i o n a li n d i c a t o r sa n dp h a r m a c o d y n a m i c s w ed e t e r m i n e dt h e b e s tp r e s c r i p t i o ni sc o n c l u d e db yt h ee i g h tk i n d so fc h i n e s eh e r b sa b o v e 2 t e c h n o l o g yo fp r e p a r a t i o n d u r i n gt h er e s e a r c ho ft h et e c h n o l o g yo fp r e p a r a t i o n w ep a yap o i n tt oc h o o s i n ga s u i t a b l ed a s a g eo nt h ef o u n d a t i o no fg u a r a n t e e i n gt h eo r i g i n a lv a l i d sa n dc h o o s i n ga r e a s o n a b l et e c h n o l o g ya c c o r d i n gt oi t sp h y s i c sa n dc h e m i s t r yc h a r a c t e r f i r s t b e c a u s eo fi ti m p l i e st h ev o l a t i l eo i l w eh a v ear e s e a r c ho nt h ev o l a t i l eo i l e n v e l o p i n gp r o c e s s w et a k eu s eo ft h eo r t h o g o n a le x p e r i m e n t a ld e s i g nt oo b t a i nt h eb e s t p r o c e s s i n gt og e tt h eo i li s a d d i n gw a t e ri nt e nt i m e s e x t r a c t i n ge i g h th o u r s s e c o n d a c c o r d i n gt ot h ec o n t e n to fc h l o r o g e n i ca c i da n dt o t a lf l a v o n e w ut a k eu s eo ft h e o r t h o g o n a le x p e r i m e n t a ld e s i g nt oo b t a i nt h eb e s tp r o c e s s i n gi st h a t a d d i n g12t i m e s a m o u n to fw a t e r e x t r a c t i n g2t i m e sa n de v e r yt i m e w i t h1 5h o u r s p u tt h es o l u t i o nt o g h t h e r c o n c e n t r a t ei tt or e l a t i v ed e n s i t yo f1 10 a c c o m m o d a t e i o nt h ec o n c e n t r a t i o no f e t h a n o lt o6 0 s t a n d i n gt i l ld e c o m p r e s s t h i r d w ec o m p a r e dt h ep u r i f i c a t i o n a le f f e c to fu l t r a f i l t r a t i o n t w i c e a l c o h o lp r e c i p i t a t i o n a n da c t i v a t e dc a r b o na b s o r p t i o na n dw ec h o o s et h em e t h o dw h i c hc a np u r i f i c a t i o na n dh o l d a sm u c ha sa c t i v ei n g r e d i e n t s t h er e s u l ti su l t r a f i l t r a t i o ni st h eb e s tw a y f o r t h b a s e do ns i n g l ef a c t o re x p e r i m e n t w ef i n dt h a tt h eb e s tc o n t e n to fs i m p l es y r u pi s 3 0 a n dt h ek i n do ft h ee s s e n c ei st a s t eo fh a m im e l o n 3 s t u d yo fq u a l i t ys t a n d a r d 摘 y d u r i n gt h eq u a l i t yr e s e a r c hp r e c e e d i n g s w ei d e n t i f i e df l o sl o n i c e r a e f r u c t u sr u c t u s f o r s y t h i a e h e r b as c h i z o n e p e t a e h e r b am e n t h a ea n do t h e rt w ok i n d so fh e r b sb yt l c m e t h o d w h i c hi ss p e c i a la n da c c u r a t e 1 1 1 ec o n t e n to fc h l o r o g e n i ca c i dw a sd e t e r m i n e db y h p l ca f t e rt h em e t h o d l o g yw a sc o m p l e t e d 1 1 1 eh p l cs h o w e dt h a tt h ea v e r a g er e c o v e r yi s u pt os t a n d a r da n di t sp r e c i s i o n s t a b i l i t ya n dr e a p p e a r a n c ew a sg o o d 1 1 l ee x p e r i m e n t s h o w e dt h a tt h ec o n t e n to fc h l o r o g e n i ca c i ds h o u l db em o r et h a n15 m gi ne a c hb o t t l e 1 0 m 1 4 s t u d yo fp r i m a r ys t a b i l i t y f o rt h es a k eo fi n s p e c t i n gp r i m a r ys t a b i l i t yo fj i n n i n go r a ll i q u i df o rc h i l d r e n t h e r o o m t e m p e r a t u r ea n da c c e l e r a t i n gt e s tw e r ec a r r i e di n t oe x e c u t i o n f r o mw h i c ht h er e s u l t s s h o w e de v e r yi n d e xm a r k e rw a sn o r m a l i ti n d i c a t e dt h eq u a l i t yo fj i n n i n go r a ll i q u i df o r c h i l d r e nw a ss t e a d ya n dc o n t r o l l a b l e i nt h i sp a p e r c o m p l i e dw i mt h es t a n d a r do fn e wm e d i c i n er e s e a r c h i n go fn u m b e r 6 f i r s t l yt h ea u t h o rc o l l e c t sl i t e r a t u r e t h e ns t u d i e so np r e p a r a t i o nt e c h n i c s s t a n d a r do f q u a l i t y s t a b i l i z a t i o na n dt h ed i s s o l v ei n v i t r oo fp l a s t e ro fx u e t i ed i n g c h u a n a n dg i v e sa s u m m a r y k e yw o r dj i n n i n go r a ll i q u i df o rc h i l d r e n t e c h n o l o g yo fp r e p a r a t i o n q u a l i t y s t a n d a n d s p r i m a r ys t a b i l i t ye s p e r i m e n t 第一章文献综述 第一章文献综述弟一早义陬综尬 儿童 是一个具有特殊生理特点的群体 处在生长发育的阶段 机体各系统和各 器官的功能尚未成熟 特别是婴幼儿 肝 肾功能 中枢神经系统和内分泌系统的发 育尚不健全 对许多药物的代谢 排泄和耐受性差 用药必须谨慎 有统计表明 国 内市场9 0 o 的药物都没有儿童剂型 儿童发病率高于成人 我国患病儿童占总患病 人口的2 0 o 以上 但用于儿童常见疾病的专用药物却很少 不能满足儿童保健事业 的需要 j j l 金宁口服液是专门针对儿科常见病感冒中最多见证型风热感冒的中药制剂 综合考虑了小儿的生理 病理特点 研制的治疗 j j l 风热感冒的良药 由金银花 连 翘 荆芥 薄荷等中药组成 方中金银花为君药 金银花味甘 性寒 归肺 心 胃 经 功能清热解毒 疏风解表 消痈散肿 凉血止痢 连翘为方中臣药 连翘味苦 性微寒 归肺 心 胆经 功能清宣肺热 清心安神 解毒消肿 薄荷 荆芥 贯众 蚤休 桔梗 野菊花等为佐使药 共具疏风解表 清热解毒之功 经临床验证 疗效 显著 无毒副作用 痊愈显效率在9 0 0 以上 实验研究表明 本制剂具有抗流感病 毒 解热 止痛 抗炎等综合治疗效应 体现了中医药辨证治疗小儿感冒的特色 下面对组方主要药味金银花 连翘的化学成分 药理作用等进行综述 一 金银花 1 化学成分 近年来 国内外对金银花的化学成分进行了大量的研究 结果表明 其富含挥发 油 此外还有黄酮类 有机酸类 三萜类等活性成分 1 1 挥发油成分 e s s e n t i a lo i l 挥发油是金银花的有效成分 吴元鎏等 对山东金银花通过气质联用分离出芳樟 醇 双花醇 王国亮等窿1 从河南栽培的金银花干花蕾挥发油中共鉴定出2 7 种成分 多 为单萜及倍半萜类化合物 张玲等口 4 1 从山东金银花主流品种鸡爪花和大毛花干品挥 发油中分别鉴定出6 5 种和5 9 种成分 主要成分均为棕榈酸 其他成分则多为醇 醛 酮 酸 酯类和烷烃类等 金银花鲜花 干花成分差异较大 鲜花挥发油成分以芳樟 醇为主 含量高达1 4 以上 其他成分多为低沸点的不饱和萜烯类成分 而干花挥发 油成分以棕榈酸为主 一般占2 6 以上 芳樟醇含量仅在0 3 9 以下 1 2 黄酮类化合物 f l a v o n o i d s 小儿金宁口服液的药掌研究 中冲太七郎首先从金银花中分得木犀草素 后又分得忍冬苷 高玉敏等畴1 首次从 金银花中分离出4 个黄酮类化合物 分别鉴定为木犀草素 7 0 a d 葡萄糖甙 木犀草 素 7 0 p d 半乳糖甙 槲皮素 3 01 3d 葡萄糖甙及金丝桃甙 黄丽瑛等 1 从金银花氯 仿萃取物中又分得5 一羟基一37 4 7 一三甲氧基黄酮和c o r y m b o s i n 最近李永梅等h 3 对 细毡毛忍冬花蕾进行研究 分离得到了木犀草素和槲皮素 1 3 有机酸类 绿原酸类化合物是金银花的重要有效成分 包括绿原酸和异绿原酸盯一1 1 4 三萜类 娄红祥等田1 从金银花水溶性部分中分离得到3 种具有保肝活性的三萜皂苷 茅青 等n 们从灰毡毛忍冬正丁醇萃取物中分得灰毡毛忍冬皂苷甲 灰毡毛忍冬皂苷乙和川续 断皂苷乙 最近陈昌祥等n 妇从金银花花蕾中分离得到了6 个化合物 其中有一新化合 物 命名为新常春皂苷f 1 5 其他成分 忍冬花蕾中还含有肌醇 1 3 一谷甾醇口1 无机元素有 f e m n c u z n t i s r m o b a n i c r p b v c o l i c a 等 一般认为 金银花的抗菌有效成分为绿原酸类化合物 并以绿原酸的含量作为金 银花的质控标准 但绿原酸并非金银花中唯一的抑菌成分n2 l 挥发油又名精油 是金 银花中的另一类主要有效成分 具有一定的药理活性和浓烈的芳香气味 目前 以金 银花挥发油为主要成分的制剂有金银花注射液 金银花露和清咽糖浆等n3 1 萜类化合 物是金银花挥发油中的主要有效成分 近代药理实验证明 金银花挥发油中的双花醇有较强的体抑菌作用 芳樟醇 香 叶醇 a 一松油醇亦有抗菌抗病毒作用n4 樟醇可平喘镇咳 治疗小儿肺炎及扁桃体炎 虚盘 1 5 号手 o 2 提取工艺 关于黄酮类化合物的提取 丁立军等n 们采用水提法 醇提法 超声波法探讨了从 金银花中提取黄酮类化合物的最佳工艺条件 实验结果表明 超声波法的提取效果最 好 即在6 0 倍于样重的4 0 乙醇中浸泡2 4 小时后 再经超声波萃取4 5 分钟条件下 金银花中总黄酮类化合物浸出率最高 金银花乙醇提取液中绿原酸的含量高于水提取液 但浸出物得率低于后者 由金 银花高效液相色谱图可以看出 金银花水 乙醇提取液中组分相同 但各组分的含量 不同 醇提取液中除绿原酸色谱峰大于水提取液 其余色谱峰均小于后者 而且抑菌 试验结果亦显示出 水提取液的抑菌效果优于乙醇提取液 这就证实了金银花中除绿 原酸外其他组分亦具有抑菌活性 因此优选会银花的提取工艺时 测定绿原酸含量并 2 第一章文献综述 结合测定浸出物得率是合理的 侯冬岩等报道用蒸馏一萃取法提取金银花中挥发性物质 测得金银花挥发油的含 量为2 5 2 用g c m s 法从金银花挥发油中分离并确定出5 0 种化学成分 用峰面积归 一化法通过化学工作站数据处理系统 得出各化学成分在挥发油中的相对百分含量 金银花中含有木犀草素 异绿原酸 绿原酸等多种黄酮类化合物 黄酮类化合物 主要指以2 一苯基色原酮为基核的一类化合物 以游离的甙原或以与糖结合的甙类等 形式存在于很多植物中 现代医学研究表明 黄酮类化合物具有降低心肌耗氧量 使 冠脉和脑血管的血液流量增加 抗心律 软化血管 降血糖和血脂等作用 同时它还 是一种天然的抗氧化剂 具有清除人体中超氧离子自由基 抗衰老 增加机体免疫力 的生理活性作用 本文采用加热回流法和超声波法从金银花中提取黄酮类化合物 加 热回流法 取岫岩金银花粉碎后 4 0 目 于6 0 干燥6 h 精密称取2 1 2 3 6 9 用4 0 m 1 7 0 乙醇浸泡过夜 加热回流3 次 每次4 h 抽滤 合并滤液 并用少量7 0 乙醇洗涤容 器 洗液并入滤液中 在水浴上减压蒸馏 除去醇液 提取液用石油醚脱脂3 次 浓 缩得浸膏0 1 3 1 5 9 用适量9 5 乙醇溶解 过滤至l o o m l 容量瓶中 洗涤 合并滤液 与洗液 用9 5 乙醇定容至刻度 摇匀 作为贮备液 超声波法 取岫岩金银花粉碎 后 4 0 目 于6 0 干燥6 h 精密称取1 0 o o g 放入锥形瓶中 加入9 5 乙醇5 0 m l 在 冰水浴中用超声波振荡器振荡2 0 m i n 将提取液过滤至l o o m l 容量瓶中 残渣再重复 振荡提取2 次 将3 次的滤液合并 在水浴上减压蒸馏 得浸膏0 8 5 5 0 9 然后用9 5 乙醇溶解 并用9 5 乙醇溶液定容至刻度 摇匀 放置以备用 在黄酮类化合物的定 量分析中 采用光谱分析方法可在特定的碱性条件下加入显色剂使之呈现特征颜色 进行测定时 加入亚硝酸钠 硝酸铝 氢氧化钠作为显色剂 可排除其它物质的干扰 从而提高测定准确度 高效液相色谱法测定金银花中绿原酸的含量 色谱条件和色谱图 色谱柱 b o n d a p a k c l 8 4 6 m m 3 0 0 m m 1 0i lm 中国科学院大连化学物理研究所提供 流动相 甲醇一乙腈一0 o l m o l l 磷酸二氢钠溶液 用冰醋酸调p h 为3 0 1 0 1 3 7 7 检测波 长 3 2 6 n m 流速 i m l m i n 衰减 1 0 2 4 灵敏度 0 1 a u f s 柱温 室温 流速 0 2 5 c m m i n 3 药理作用 金银花及其同属植物药理作用研究表明 金银花具有抗病原微生物 解热 抗炎 保肝 止血 抗氧化 免疫调节等作用 3 1 抗病原微生物作用 实验研究结果表明 金银花对多种致病菌均有一定的抑制作用 包括金黄色葡萄 球菌 溶血性链球菌 大肠杆菌 痢疾杆菌 霍乱弧菌 伤寒杆菌 副伤寒杆菌 对 3 小儿 g j 1 口服液的药学研究 肺炎球菌 脑膜炎双球菌 绿脓杆菌 结核杆菌亦有效 水浸剂比煎剂作用强 金银 花对致龋病的变形链球菌 放线粘杆菌和引起牙周病的产黑色素类杆菌 牙龈类杆菌 及伴放线嗜血菌亦显示了较强的抗菌活性 金银花于体外有一定的抗钩体作用 对皮 肤真菌有一定抑制作用 金银花水煎剂 1 2 0 在人胚肾原代单层上皮细胞组织培养 上 对流感病毒 孤儿病毒 疱疹病毒增多有抑制作用 金银花对革兰氏阴性细菌内 毒素有较强的拮抗作用 对抗艾滋病病毒 h i v 亦显示中等活性 3 2 解热 抗炎作用 实验研究结果表明 金银花水煎液 口服液和注射液对角叉菜胶 三联菌苗致热 有不同程度的退热作用 对蛋清 角叉菜胶 二甲苯所致足水肿亦有不同程度的抑制 作用 3 3 保肝作用 动物实验研究结果表明 金银花中的三萜皂苷对小鼠肝损伤有明显的保护作用 黄褐毛忍冬总皂苷能显著抑制乙酰氨基酚及d 一半乳糖胺所致肝中毒小鼠血清a l t 的 升高及降低肝脏甘油三酯含量 并明显减轻肝脏病理损伤的严重程度 使肝脏点状坏 死数总和及坏死改变出现率明显降低 并且对醋氨酚与镉所致小鼠急性肝损伤也有明 显的保护作用 动物实验研究结果表明 金银花所含多种绿原酸类化合物具有显著的 利胆作用 可增进大鼠胆汁分泌 3 4 止血作用 实验研究结果表明 会银花炭水煎液 混悬液具有显著的止血作用 而且混悬液 的作用强于水煎液 金银花炭中鞣质的含量仅为生品的1 2 但其止血作用却明显优 于生品 从而提示鞣质并非金银花炭止血作用的唯一物质基础 3 5 降血脂作用 动物实验研究结果表明 金银花能显著降低多种模型小鼠血清胆固醇 t c 及动脉 粥样硬化指数 a 1 提高高密度脂蛋白一胆固醇 h d l c 含量 保护胰腺b 细胞及弱降 糖作用 3 6 抗生育作用 动物实验研究结果表明 金银花乙醇提取后的煎剂注射给药 对小鼠 狗 猴等 多种动物具有抗生育作用 3 7 对免疫系统的作用 动物实验研究结果表明 金银花具有促进白细胞 促进炎性细胞吞噬功能 降低 豚鼠t 细胞a 一醋酸萘酯酶 a n a e 百分率 降低中性粒细胞 p m n 体外分泌功能 恢复 巨噬细胞和调理淋巴细胞功能 显著增强i l 一2 的产生 具有调二市机体免疫功能的作 用 4 第一章文献综述 3 8 抗氧化作用 利用h 2 0 2 c t m a b 鲁米诺发光体系研究证明 金银花水提物在体外对h 2 0 具有直接 的清除作用 且呈线性量效关系 说明其具有抗氧化反应的作用 3 9 中枢兴奋等作用 动物实验研究结果表明 金银花中所含绿原酸可引起大鼠 小鼠中枢神经系统兴 奋 口服大剂量绿原酸能增加胃肠蠕动 促进胃液及胆汁分泌 此外绿原酸还能轻微 增加肾上腺素及去甲肾上腺素对猫与大鼠的升压作用 3 1o 毒副作用 实验研究结果表明 金银花中绿原酸具有致敏原作用 可引起变态反应 但口服 无此反应 因绿原酸可被小肠分泌物转化成无致敏活性的物质 实验也证明金银花有 轻微溶血作用 二 连翘 连翘为木犀科连翘属落叶灌木连翘的果实 性平 味甘 苦 具有清热解毒 消 肿散结的功效 现代药理表明 连翘具有抗菌 抗病毒 保肝抗炎解热功效n7 i 故现 代医学常用于治疗急性呼吸道感染 皮肤化脓性感染 急性肾炎等病症 连翘中含有 多种化学成分 如三萜类n8 木脂素类 9 其中三萜类中的熊果酸和齐墩果酸为抗肝 损伤的有效成分啪3 1 化学成分 1 1 苯乙醇苷类 1 9 8 1 年 e n d ok a t s u y a 等人从连翘的叶中分得连翘酯苷 f o r s y t h o s i d ea 妇2 j 1 9 8 2 年 n i s h i b es a n s e i 等人从连翘果实中分得f o r s y t h i a s i d e 乜2 比较了这2 种成 分的结构式和光谱数据 发现二者为同一物质 1 9 8 2 年 n i s h i b es a n s e i 等人从连翘果实中分离得到1 种抗菌活性成分s u s p e n s a s i d e 口朝 同年 e n d ok a t s u y a 等从连翘果实中分离出f o r s y t h o s i d ec 和f o r s y t h o s i d ed 乜4 j 从三者的光谱数据和结构式来看 s u s p e n s a s i d e 和f o r s y t h o s i d ec 为同 一物质 从连翘的果实中还分离出一种酚性化合物 为棕黄色粉末 其水溶液在紫外线下 呈碧绿色荧光 实验式c j h 0 7 定名为连翘酚 f o r s y t h 0 1 汹1 1 2 目脂体及其苷类 1 9 7 7 年 西部三省等报道了对连翘果实中目脂体苷成分的研究结果 证明连翘果 实含连翘苷1 6 m g g 瞳7 另1 9 9 7 年 刘东雷等报道 自连翘的果实中分离得到3 种目 脂素单糖苷 根据理化数据和光谱手段鉴定为 松脂素一b d 一葡萄糖苷 5 小儿金宁口服液的药掌研究 p i n o r e s i n o l b d g l u c o s i d e 1 松脂素单甲基醚一b d 葡萄糖苷 p i n o r e s i n o lm o n om e t h y le t h e r b d g l u c o s i d e 2 连翘苷 p h i l l y r i n 3 其中 2 为本种植物首次分离嘲 1 3 五环三萜类 西部三省等研究表明 连翘含有下列3 种五环三萜化合物 白桦酯酸 b e t u l i n i c a c i d 齐墩果酸 o l e a n o l i ca c i d 和熊果酸 u r s o l i ca c i d 啪瑚1 刘j 下光等在研究连翘抗急性肝炎有效部位时 曾分离到两个三萜 齐墩果酸和熊 果酸口 另李红兵等用薄层比色法测得连翘中齐墩果酸含量为2 2 8 羽 1 9 9 1 年 胡 旺云等还首次从连翘得二氯甲烷可溶部位分得乙酰化三萜is o b a u e r e n y la c e t a t e 和 2 0 s 一d a m m a r 2 4 0 e m e 3b 2 0 d i o l 一3 一a c e t a t e 3 3 1 1 4 挥发油 挥发油存在于连翘的种子连翘心中 含量在4 以上 平均可达3 8 在自然界 含挥发油如此高的植物并不多见 刘国声等对连翘种子中挥发油成分进行气相色谱一 质谱一计算机联用分析 又用减压分馏 柱层析等方法进行了挥发油中主成分的提取 分离 还测定了几种主成分在挥发油中的百分含量 a 一蒎烯1 5 7 9 卜0 一蒎烯6 0 2 伞花烃3 5 芳樟醇6 o 口4 石素贤等自连翘果实中蒸出挥发油 收油率0 2 用毛细管气相色谱法分离出 2 3 个峰 并用气相色谱一质谱法从中共鉴定了1 9 个成分 其主要成分是8 一蒎烯 7 6 2 7 q 一蒎烯 1 5 1 1 水芹烯 1 5 5 对聚伞花烯 1 2 0 芳樟醇 1 0 8 也蟹 3 5 寸0 卫世安等对连翘种子和果皮中的挥发油进行了研究 共鉴定出1 9 个成分 含量 在5 以上的主要成分是b 一蒎烯 q 一蒎烯和松油烯一4 一醇 果皮和种子中的挥发油含 量分别为0 3 2 0 3 7 m l g 和3 3 4 0 m l g 二者的成分及其相对含量基本一 致 圳 徐植灵等从连翘果实中提取了挥发油 用气相色谱一质谱联用法分析其挥发油的 化学成分 鉴定出b 一蒎烯 香桧烯 q 一蒎烯等5 6 个化合物 并用气相色谱测定了 挥发油中各成分的相对含量 其鉴定率达9 3 3 7 订1 2 提取分离 郝旭亮等采用气相色谱一质谱联用技术 g c m s 进行分析 比较水蒸汽蒸馏法 s d 和超临界c o 萃取法 s f e c 0 2 所提连翘挥发油的化学成分及其含量 两种方法所得挥 发油主要成分基本一致 均为b 一蒎烯 c t 一蒎烯和桧萜 4 一 卜异丙基 一苯甲醇和2 一 4 一 异丙基 一苯甲醇两成分为s f e c o 方法所得 其余成分两种方法均可提出 含量略有 差异 并首次从连翘中得到桧萜 反一松香芹醇 香桃木醇等成分 结果发现s f e c o 6 第一章文献综述 法提取效率高 提取成分较完全 为提取连翘挥发油的理想方法啪1 王鹏等采用正交试验法对超临界c 0 萃取连翘挥发油的条件进行了研究 结果显 示最佳萃取条件为萃取压力3 0 m p a 萃取温度3 5 解析压力6 7m p a 解析温度5 0 粉碎度o 5 5 咖 按对结果的影响大小依次排列为萃取温度 粉碎度 萃取压力 解析压力 解析温度 用气相色谱一质谱联用技术测定了最佳萃取条件所得连翘挥发 油的化学成分 从中鉴定出2 1 种成分 并测定了其相对含量 主要成分为q 一蒎烯 b 一蒎烯 萜品醇一4 q 一萜品醇 苯甲醇等呻3 张忠义等对连翘的亲脂性化学成分进行了研究 采用超临界c o 萃取技术从连翘 中提取亲脂性成分 并用g c m s 计算机联用技术分离鉴定其中的化学组成 计算其相 对含量 萃取物得率6 4 8 该萃取物由醋酸旱哪醇酯等2 1 个成分组成h 石钺等对银翘散抗流感病毒作用的物质基础进行研究 运用色谱技术进行分离 波谱等方法鉴定化合物的结构从银翘散抗流感病毒有效部位群 e f y 中分离得到1 1 种成分 鉴定为牛蒡子苷 i 连翘苷 i i 连翘酯苷 i i i 甘草苷 甘草素 v 染料木素 芒柄花素 大豆素 6 一甲氧基大豆素 3 37 4 三甲氧 基鞣花酸 x 和绿原酸 其中染料木素 大豆素 6 一甲氧基大豆素和3 3 4 一 三甲氧基鞣花酸为首次从银翘散群药中获得晗4 3 药理作用 3 1 抗菌作用 连翘属植物中的咖啡酰糖苷类成分连翘酯苷 s u s p e n s i d e b h y d r o x y a x t e o s i d e f o r s y t h o s i d eb 均有很强的抗菌活性 3 其乙醇提取物抗菌谱 广 对多种革兰氏阳性菌 阴性菌均有抑制作用 其煎剂的最低抑菌浓度 m i c 分别 为 志贺氏痢疾杆菌 史氏痢疾杆菌 鼠疫杆菌 人型结核杆菌1 6 4 0 金黄色葡萄 球菌 伤寒杆菌 霍乱弧菌1 3 2 0 肺炎双球菌 副伤寒杆菌l 1 6 0 溶血性链球 菌 福氏痢疾杆菌 大肠埃希氏菌 变形杆菌 白喉杆菌1 8 0 连翘酚为其抗菌 的主要成分 对金黄色葡萄球菌及志贺氏痢疾杆菌的m i c 分别为1 5 1 2 0 及l 1 0 2 4 其抗菌作用稳定而彻底 该油还有明显抑制金黄色葡萄球菌血浆凝固醇对血浆的凝固 作用 可使感染家兔血液中金黄色葡萄球菌的数量明显减少 金黄色葡萄球菌在含有 该油的培养基中连续2 0 代传代培养 未见耐药性形成 们1 此外 对龋病主要致病菌 具有体外抑菌作用h4 比较连翘 金钟花 朝鲜连翘各果实水浸膏的抗菌作用 以连 翘为最强h 引 3 2 抗病毒作用 连翘属植物提取物有抗柯萨奇b 5 病毒及埃柯病毒的作用n 引 柯萨奇b 组病毒是 引起心肌炎的病因之一 比较连翘 寸冬 双花 山豆根4 种中药水煎剂抗柯萨奇b 7 小儿金宁口服液的药掌研究 组病毒的活性 以连翘为最佳 连翘在先加药后加病毒组 感染病毒同时加药组 感 染病毒后加药组中 均有一定的抗病毒作用 引 鸡胚体外试验证明连翘对亚洲甲型流 感病毒 鼻病毒1 7 型等也有抑制作用 3 3 抗炎作用 大鼠巴豆油性肉芽囊实验证明 连翘醇提取物的水溶液腹腔注射有非常明显的抗 渗出作用及降低炎性部位血管壁脆性作用 而对炎性屏障的形成无抑制作用 用3 2 p 标记红细胞实验也观察到其渗入已注射连翘提取物水溶液的大鼠巴豆油性肉芽囊内 的数量明显减少 表明连翘尚能促进炎性屏障的形成 复方连翘注射液具有明显的抗 炎作用 能降低大鼠和小鼠毛细血管的通透性 减少炎性渗出 对蛋清所致足爪水肿 有抑制作用 并能增强小鼠炎性渗出细胞的吞噬能力 从而增强机体的抗防御机能h 8 1 并对烟雾刺激所致地鼠呼吸道炎症具有保护作用h9 1 3 4 对心血管系统的影响 连翘果壳所含齐墩果酸有轻微的强心作用 1 0 0 连翘注射液0 2 5 9 k g 静注可使 麻醉犬的血压显著下降 从1 2 0 0 0 衄h g 降至4 5 5 0 f i l mh g 0 5 9 k g 耳缘静注也可 使麻醉兔的血压急速从1 0 0 m mh g 降至4 0 4 2 栅h g 在3 0 s 内即降至最低点 一般在 3 4 m i n 恢复到原来水平 其所含的芦丁能增强毛细血管的致密度 对毛细血管破裂 出血 皮下溢血有止血作用 复方连翘注射液腹腔注射或静注有降压作用 而静滴无 此作用 清胆注射液 以连翘为主要组方 对内毒素性休克有一定的升高和稳定血压作 用 平均升高血压可达4 4 咖h g 继续给药及补液情况下可使血压继续升高 升压时 伴有脉压差增大 对血压的作用可能是由于本品有扩张血管和收缩血管双重作用 前 者改善微循环的血液灌注 后者保持血管张力 以维持一定血压 3 4 抗内毒素作用 近年来随着抗生素的广泛应用 革兰氏阳性菌感染性疾病已逐渐减少 而革兰氏 阴性菌感染性疾病则显著增多 革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖内毒素有复杂的 生物活性 可直接或间接的对机体产生损伤作用 且是引起休克的主要原因 目前临 床应用的抗生素 在使细菌细胞被摧毁的同时也释放出大量的内毒素 加重内毒素血 症的程度 有人通过实验对几种常用的中草药进行体外抗内毒素效力比较 结果表明 相同浓度 1 0 0 的双花 公英 连翘 地丁 败酱草药液中加入等量的内毒素 1 0 0 0 0 p g 经相互作用后 其残余内毒素量分别为5 4 0 1 0 8 0 7 5 0 8 0 0 和1 1 5 0 p g 减毒倍数分 别为1 8 5 9 3 1 3 3 5 6 和8 7 以连翘 双花作用为最强 且这种作用是对内毒 素的直接摧毁而不是对其活性的暂抑制瞄0 1 3 5 抑制弹性蛋白酶活力的作用 弹性蛋白酶是一种蛋白水解酶 能分解肺泡壁的弹力纤维 人体内的弹性蛋白酶 主要来源于中性粒细胞及肺泡巨噬细胞 慢性阻塞性肺疾病 c o p d 患者体内弹性蛋白 第一章文献综述 酶抑制剂先天性缺乏或活力下降 因而检测慢性阻塞性肺疾病患者体内弹性蛋白酶活 力以寻找弹性蛋白酶抑制剂药物已引起临床及实验工作者的关注 有人以琼脂扩散测 定法比较了连翘 丹参 当归 川穹嗪等抑制弹力蛋白酶活力强弱 结果表明这4 种 中药对弹性蛋白酶活力均有显著抑制作用 其中以连翘为最优 当连翘为 7 5 m g 2 5 9 m 1 时即能完全抑制该酶的活力 而等量的月 参 当归 川穹嗪虽对其有 显著抑制作用 但在琼脂板上仍出现了该酶的溶解环 所以进一步研究连翘的这种作 用并分析其有效成分 可望发掘出抑制弹性蛋白酶的新药隋 3 6 抑制c a m p 磷酸二酯酶活力的作用 磷酸二酯酶能水解c a m p 细胞内c a m p 的浓度随生理现象和病理状态变化而变化 因而被视为重要的生理活性物质之一 体外实验表明连翘属植物中的苯乙醇苷类及木 质素类均有抑制c a m p 磷酸二酯酶活力的作用 对其构效关系的研究表明 木质素同 族元素中两对位酚羟基对其活性有重要影响 若两对位酚羟基被甲基化或酰糖基取 代 其活性将大大降低 3 7 解热作用 连翘煎剂4 9 生药 k g 灌胃 能使静注枯草杆菌浸液所致的家兔发热作用显著下 降 1 h 后恢复正常 随后还可降致正常体温以下 复方连翘注射液也有明显的解热作 用 能减弱伤寒菌苗所致家兔的发热 也能降低正常家兔的体温 3 8 保肝作用 连翘1 1 注射液给大鼠皮下注射能明显降低大鼠皮下注射四氯化碳引起的血清谷 丙转氨酶活性增高 对照组为 3 3 7 0 0 6 3 5 0 u 给药组为 1 4 6 5 0 1 1 1 0 u 同 时肝脏坏死和变性明显减轻 肝细胞内积蓄的肝糖元及核糖核酸含量大部分恢复或接 近正常 表明连翘具有抗肝损伤作用 从连翘中得到的连翘苷b 部分 齐墩果酸和熊 果酸是连翘抗肝损伤的有效成分 均能降低实验性肝损伤动物的血清谷丙转氨酶水 平 3 9 镇吐作用 连翘煎剂灌胃能减少家鸽翼静脉注射洋地黄酊或犬注射阿朴吗啡引起的呕吐次 数 延长洋地黄所致呕吐的潜伏期 其镇吐效果与注射氯丙嗪2 h 后相仿 镇吐作用 可能是由于连翘能抑制延脑催吐化学感受区之故 3 1o 利尿作用 1 0 0 连翘注射液0 2 5 9 k g 静注对麻醉犬有显著而肯定的利尿作用 给药后o 5 和 1 h 的利尿作用分别为对照组的2 2 和1 6 6 倍 连翘所含的齐墩果酸有轻微的强心利 尿作用 3 11 镇痛作用 9 3 12 连翘对于活性氧具有抑制作用嗽1 重用连翘还可以用于治疗过敏性