2.2.1动物细胞培养和核移植技术.pptx

细胞工程的概念 应用细胞生物学和的原理和方法 通过水平或水平上的操作 按照人们的意愿来改变细胞内的或获得产品的一门综合科学技术 根据操作对象的不同 分为工程和工程 分子生物学 细胞 细胞器 遗传物质 细胞 植物细胞 动物细胞 专题二细胞工程 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体制备 细胞核移植 动物细胞工程技术 动物细胞工程的基础 学习目标1 简述动物的细胞培养及条件 2 举例论证动物细胞培养技术的应用及意义 3 简述动物核移植的过程 意义及应用前景 重点 1 动物细胞培养的过程 2 动物核移植的过程 难点 原代培养和传代培养的概念 2 2 1动物细胞培养和核移植技术 问题探讨 烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植 但对于大面积烧伤病人来讲 健康皮肤很有限 请同学们想一想如何来治疗该病人 取该患者的皮肤进行细胞培养 获得足量的细胞后再移植 动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织 将它分散成 细胞 然后 放在适宜的培养基中 让这些细胞生长和增殖 原理 细胞增殖 动物细胞培养 单个 思考与讨论 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中 根据你所学的内环境知识 思考并讨论以下问题 1 体外培养细胞时需要提供哪些物质 2 体外培养的细胞需要什么样的环境条件 一 动物细胞培养的条件 1 无菌 无毒的环境 a 对培养液和培养用具 处理 b 添加一定量的 以防培养过程中的污染 c 定期 以便清除代谢产物 防止细胞积累对细胞自身造成伤害 无菌 更换培养液 代谢产物 抗生素 2 营养 合成培养基成分有糖 无机盐 微量元素等 除了合成培养基 通常还需加入等天然成分3 温度和pH 哺乳动物为 pH为 4 气体环境 95 和5 的混合气体 氨基酸 血清 血浆 促生长因子 7 2 7 4 36 5 0 5 CO2 空气 细胞代谢所必需的 维持培养液的PH 二 动物细胞培养的过程 1 培养时为何要将组织分散成单个细胞 如何处理 2 动物细胞培养瓶内表面为何要光滑 无毒 4 什么是原代培养和传代培养 二者如何区分 5 概述动物细胞培养的过程 成块的组织细胞靠在一起 彼此限制了细胞的生长和增殖 先剪碎 再胰蛋白酶处理 易于培养的细胞贴壁 进行生长增殖 3 培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂 增殖 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时 细胞分裂就会停止分裂增殖 这种现象叫接触抑制 归纳过程 取的组织 器官 细胞悬浮液 酶 细胞贴壁 接触抑制 培养 培养 无限传代 单个细胞 加液 动物胚胎或幼龄动物 胰蛋白 培养 原代 传代 未 已 1 动物细胞生长特点 1 细胞贴壁 培养液中分散的细胞很快贴附在瓶壁上生长繁殖 称为细胞贴壁或贴壁生长 2 接触抑制 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时 细胞就会停止分裂增殖的现象 核心要点突破 2 如何区分原代培养与传代培养 原代培养 通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养 传代培养 贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理 然后分瓶继续培养 让细胞增殖 即为传代培养 细胞贴壁过程 培养皿或培养瓶内表面光滑 五毒 易于贴附 接触抑制 细胞在贴壁生长过程中 随着细胞分裂 数量不断增加 最后形成一个单层 此时细胞间相互接触 细胞分裂和生长停止 数量不再增加 接触抑制 动物细胞生长特性 部分细胞突变 获得不死性 向癌细胞方向发展 糖蛋白减少 传代培养的细胞能一直传代下去吗 有些为何能一直传下去吗 人类一般保存的是哪类细胞呢 为什么 不都能 发生突变 朝着癌细胞方向发展 保存10代以内的细胞 因为10 50部分细胞的细胞核型可能发生变化 有少部分还发生突变向癌细胞方向发展 原代培养与传代培养 区别概念 细胞的全能性 细胞增殖 固体或半固体培养基蔗糖 植物激素 液体培养基葡萄糖 动物血清 获得新个体或细胞产品 大量产生细胞或细胞产物 都需人工条件下的无菌操作 动物细胞培养技术的应用 1 生产蛋白质生物制品 病毒疫苗 干扰素 单克隆抗体等 2 获得大量自身的皮肤细胞 用于植皮 3 用于检测有毒物质 4 用于生理 病理 药理等方面的研究 为治疗和预防疾病提供理论依据 5 基因工程的受体细胞 下列哪种营养物质是动物培养中不需要的 A 淀粉B 氨基酸C 无机盐D 水 为了使用于培养的动物组织细胞分散开以便配成一定浓度的悬浮液 选取出来的动物组织应先用下列哪种物质处理 A 胃蛋白酶B 胰蛋白酶C 盐酸D 胰脂肪酶 学习展示 在动物细胞培养中 有部分细胞可能在培养条件下无限制的传代下去 这种传代细胞被称为 A 原代细胞B 传代细胞C 细胞株D 细胞系 某生物制药厂利用动物细胞培养的方法 生产细胞产物 生长因子 这样的细胞培养属于 A 原代培养B 传代培养C 直接培养D 间接培养 08年宁夏卷回答下列有关动物细胞培养的问题 在动物细胞培养的过程中 当贴壁细胞分裂生长到细胞表面时 细胞会停止分裂增殖 这种现象称为细胞的 此时 瓶壁上形成的细胞层数是 要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来 需要用酶处理 可用的酶是 随着细胞传代次数的增多 绝大部分细胞分裂停止 进而出现的现象 但极少数细胞可以连续增殖 其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成细胞 该种细胞的黏着性 细胞膜表面蛋白质 糖蛋白 的量 相互接触 单层 胰蛋白酶 衰老甚至死亡 接触抑制 不死性 降低 减少 动物细胞培养 细胞培养的概念 细胞培养的过程 细胞培养的条件 细胞培养技术的应用 细胞培养的原理 动物细胞核移植 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核 移如入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中 使其重组并发育成一个新的胚胎 这个新的胚胎最终发育为动物个体 克隆动物 用核移植的方法得到的动物 动物体细胞核移植技术和克隆动物 一 分类 细胞分化程度低 恢复全能性容易 细胞分化程度高 恢复全能性困难 多莉羊的培育过程 无性生殖 二 体细胞核移植的过程 卵母细胞去核 体细胞培养 电刺激使两细胞融合 重组细胞 重组胚胎 新个体 在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前 为什么必须先去掉受体卵母细胞的核 为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞 用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞 为什么 10代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型 未发生突变 思考题 3 体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100 的复制吗 为什么 不是 克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核 但核外还有少部分DNA 如线粒体DNA 来自受体卵母细胞 此外 表现型还受环境影响 4 对比多莉羊和课本高产奶牛的克隆过程 找出操作过程的不同点 多莉克隆过程的受体细胞是去核卵细胞 而高产奶牛的克隆过程的受体细胞是去核卵母细胞 多莉克隆过程是将供体细胞核注入受体细胞 而高产奶牛的克隆过程是将供体细胞注入受体细胞 三 克隆动物的研究意义 1 克隆动物作为生物反应器 生