分子生物学常用试剂配置2.doc

分子生物学常用试剂配置点击次数：87 发布时间：2010-1-27 9:51:13分子生物学常用试剂配置分子生物学常用试剂配置一、分子生物学常用贮存液的配制130%丙烯酰胺溶液【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N，N-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37溶解之，补加水至终体积为100ml。用滤器（0.45m孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。240%丙烯酰胺【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N，N-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。3放线菌素D溶液【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1:10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D（分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21，900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20。【注意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。40.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保存于-70510mol/L乙酸酰溶液【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。610%过硫酸铵溶液【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4保存数周。7BCIP溶液【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于482BES缓冲盐溶液【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BESN，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22m滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20。91mol/L CaCl2溶液【配制方法】在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl26H2O，用0.22m滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20。【注意】制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45m孔径）过滤除菌，然后骤冷至0。102.5mol/L CaCl2溶液【配制方法】在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl26H2O，用0.22m滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20。111mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20。【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。12脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份贮存于-70。碱基波长（nm）消化系数（）L/（molcm）A2591.54104G2531.37104C2719.10103T2607.40103比色杯光径为1cm时,吸光度=M130.5mol/l EDTA（pH8.0）溶液【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。【注意】EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0,才能完全溶解。14溴化乙锭（10mg/ml溶液）【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。【注意】小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。152HEPES缓冲盐溶液【配制方法】用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO42H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH调节pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22m滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20。16IPTG溶液【配制方法】IPTG为异丙基硫代-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22m滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20。171mol/L乙酸镁溶液【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。181mol/L MgCl2溶液【配制方法】在800ml水中溶解203.4g MgCl26H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。【注意】MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。19-巯基乙醇（BME）溶液【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4。【注意】BME或含有BME的溶液不能高压处理。20NBT溶液【配制方法】把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于4。21酚/氯仿溶液【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L TrisHCl（pH7.6）抽提几次以平衡这混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/l TrisHCl（pH=7.6）液层,保存于4。【注意】酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。2210mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液【配制方法】用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25的失活速率高于4。pH值为8.0时,20mmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH8.6）并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。23磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2（1034105Pa）高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。241mol/L乙酸钾（pH=7.5）溶液【配制方法】将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20。25乙酸钾溶液（用于碱裂解）【配制方法】在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。263mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液【配制方法】在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。275mol/L NaCl溶液【配制方法】在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。2810%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液【配制方法】在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。【注意】SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。2920SSC溶液【配制方法】在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/l NaOH溶液调节pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。3020SSPE溶液【配制方法】在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4H2O和7.4g EDTA,用NaOH溶液调节pH值至7.4（约需6.5ml 10ml/L NaOH）,加水定容至1L,分装后高压灭菌。31100%三氯乙酸溶液【配制方法】在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。321mol/L Tris溶液【配制方法】在800ml水中溶解121.91g Tris碱,加入浓HCl调节pH值至所需值。pHHCl 7.4 70ml 7.6 60ml 8.0 42ml应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。【注意】如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5、25、和37时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。33Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris）【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2（1.034105Pa）高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。34X-gal溶液【配制方法】X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-D半乳糖苷。用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20。X-gal溶液无须过滤除菌。二、常用抗生素溶液抗生素贮存液a工作浓度浓度保存条件严紧型质粒松弛型质粒氨苄青霉素50mg/ml（溶于水）-2020g/ml60g/ml羧苄青霉素50mg/ml（溶于水）-2020g/ml60g/ml氯霉素34mg/ml（溶于乙醇）-2025g/ml170g/ml卡那霉素10mg/ml（溶于水）-2010g/ml50g/ml链霉素10mg/ml（溶于水）-2010g/ml50g/ml四环素b5mg/ml（溶于乙醇）-2010g/ml50g/mla：以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。三、常用的电泳缓冲液缓冲液使用液浓贮存液（每升）Tris-乙酸（TAE）1：0.04mol/L Tris-乙酸50：242g Tris碱0.001mol/L EDTA57.1ml冰乙酸100ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）Tris-磷酸（TPE）1:0.09mol/L Tris-磷酸10:10g Tris碱0.002mol/L EDTA15.5ml85%磷酸（1.679g/ml）40ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）Tris-硼酸（TBE）a0.50.045mol/L Tris-硼酸5：54g Tris碱0.001mol/L EDTA27.5硼酸20ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）碱性缓冲液b1:50mmol/L NaOH1:5ml 10mol/L NaOH1mmol/L EDTA2ml 0.5mmol/L EDTA（pH8.0）Tris-甘氨酸c1:25mmol/L Tris5:15.1g Tris250mmol/L 甘氨酸94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3）0.1% SDS50ml 10% SDS（电泳级）130%丙烯酰胺溶液【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N，N-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37溶解之，补加水至终体积为100ml。用滤器（0.45m孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。240%丙烯酰胺【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N，N-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。3放线菌素D溶液【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1:10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D（分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21，900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20。【注意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。40.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保存于-70510mol/L乙酸酰溶液【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。610%过硫酸铵溶液【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4保存数周。7BCIP溶液【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于482BES缓冲盐溶液【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BESN，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22m滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20。91mol/L CaCl2溶液【配制方法】在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl26H2O，用0.22m滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20。【注意】制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45m孔径）过滤除菌，然后骤冷至0。102.5mol/L CaCl2溶液【配制方法】在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl26H2O，用0.22m滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20。111mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20。【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。12脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份贮存于-70。碱基波长（nm）消化系数（）L/（molcm）A2591.54104G2531.37104C2719.10103T2607.40103比色杯光径为1cm时,吸光度=M130.5mol/l EDTA（pH8.0）溶液【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。【注意】EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0,才能完全溶解。14溴化乙锭（10mg/ml溶液）【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。【注意】小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。152HEPES缓冲盐溶液【配制方法】用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO42H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH调节pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22m滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20。16IPTG溶液【配制方法】IPTG为异丙基硫代-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22m滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20。171mol/L乙酸镁溶液【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。181mol/L MgCl2溶液【配制方法】在800ml水中溶解203.4g MgCl26H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。【注意】MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。19-巯基乙醇（BME）溶液【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4。【注意】BME或含有BME的溶液不能高压处理。20NBT溶液【配制方法】把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于4。21酚/氯仿溶液【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L TrisHCl（pH7.6）抽提几次以平衡这混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/l TrisHCl（pH=7.6）液层,保存于4。【注意】酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。2210mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液【配制方法】用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25的失活速率高于4。pH值为8.0时,20mmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH8.6）并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。23磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2（1034105Pa）高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。241mol/L乙酸钾（pH=7.5）溶液【配制方法】将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20。25乙酸钾溶液（用于碱裂解）【配制方法】在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。263mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液【配制方法】在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。275mol/L NaCl溶液【配制方法】在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。2810%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液【配制方法】在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。【注意】SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。2920SSC溶液【配制方法】在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/l NaOH溶液调节pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。3020SSPE溶液【配制方法】在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4H2O和7.4g EDTA,用NaOH溶液调节pH值至7.4（约需6.5ml 10ml/L NaOH）,加水定容至1L,分装后高压灭菌。31100%三氯乙酸溶液【配制方法】在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。321mol/L Tris溶液【配制方法】在800ml水中溶解121.91g Tris碱,加入浓HCl调节pH值至所需值。pHHCl 7.4 70ml 7.6 60ml 8.0 42ml应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。【注意】如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5、25、和37时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。33Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris）【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2（1.034105Pa）高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。34X-gal溶液【配制方法】X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-D半乳糖苷。用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20。X-gal溶液无须过滤除菌。二、常用抗生素溶液抗生素贮存液a工作浓度浓度保存条件严紧型质粒松弛型质粒氨苄青霉素50mg/ml（溶于水）-2020g/ml60g/ml羧苄青霉素50mg/ml（溶于水）-2020g/ml60g/ml氯霉素34mg/ml（溶于乙醇）-2025g/ml170g/ml卡那霉素10mg/ml（溶于水）-2010g/ml50g/ml链霉素10mg/ml（溶于水）-2010g/ml50g/ml四环素b5mg/ml（溶于乙醇）-2010g/ml50g/mla：以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。缓冲液使用液浓贮存液（每升）Tris-乙酸（TAE）1：0.04mol/L Tris-乙酸50：242g Tris碱0.001mol/L EDTA57.1ml冰乙酸100ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）Tris-磷酸（TPE）1:0.09mol/L Tris-磷酸10:10g Tris碱0.002mol/L EDTA15.5ml85%磷酸（1.679g/ml）40ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）Tris-硼酸（TBE）a0.50.045mol/L Tris-硼酸5：54g Tris碱0.001mol/L EDTA27.5硼酸20ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）碱性缓冲液b1:50mmol/L NaOH1:5ml 10mol/L NaOH1mmol/L EDTA2ml 0.5mmol/L EDTA（pH8.0）Tris-甘氨酸c1:25mmol/L Tris5:15.1g Tris250mmol/L 甘氨酸94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3）0.1% SDS50ml 10% SDS（电泳级）一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。 10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/LEDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。 1mol/LHEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。 1mol/LHCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。 25mg/mlIPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20。 1mol/LMgCl2:溶解20.3gMgCl26H2O于足量的水中，定容到100ml。 100mmol/LPMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20。 20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。 10mg/mlRnase（无DNase）（DNasefreeRNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl调pH至7.5，于-20贮存。（配制过程中要戴手套） 5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。 10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。 10SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。 100三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制） 2.5Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20。 100Denhardt试剂（Denhardtsregent）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量 2%聚蔗糖（Ficoll，400型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA（组分V） 水2g2g2g 加水至总体积为100ml,依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20贮存。 10标准DNA连接酶缓冲液（standardDNAligasebuffer）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/LTris-HCl:5ml1mol/L贮液,100mmol/LMgCl2:1ml1mol/L贮液,100mmol/LDTT:1ml1mol/L贮液,2mmol/LATP:200ul100mmol/L贮液,5mmol/L盐酸亚精胺（可选）:50ul1mmol/L贮液,0.5mg/mlBSA（组分V）（可选）:0.5ml10mg/mL贮液,水:2.25ml 2006-9-14 04:29 回复 他很挖卡卡 0位粉丝 2楼将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20。 100mmol/LdNTP溶液（dNTPsolutions）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80可贮存至少6个月。 10mmol/LdNTP混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量 10mmol/LdATP 10mmol/LdCTP 10mmol/LdGTP 10mmol/LdTTP 水2ul100mmol/LdATP贮液 2ul100mmol/LdCTP贮液 2ul100mmol/LdGTP贮液 2ul100mmol/LdTTP贮液 12ul 20PEG8000/2.5MNaCl 成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量 质量浓度为20聚乙二醇 2.5mol/L氯化钠 水20g 50ml5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠 补足100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。 20SSC 成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量 300mmol/L柠檬酸三钠（二水） 3mol/L氯化钠 水88.2g 175.3g 补足1L 溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。 DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水 加100ulDEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1。在37温浴至少12h，然后在15psi条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。 甲酰胺（deionizedformamide） 直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80贮存（防止氧化）。 磷酸缓冲液（phosphatebuffer） 按照下表所给定的体积，混合1mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。 1mol/L磷酸二氢钠（ml）1mol/L磷酸氢二钠（ml）最终pH值 TE（用于悬浮和贮存DNA） 成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量 10mmol/LTrisHCl 1mmol/LEDTA 水1ml1mol/LTris-HCl（pH7.4-8.0，25） 200ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 98.8ml Tris缓冲液（Tris-HClbuffer） 将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。 浓盐酸的体积（ml）pH 2006-9-14 04:29 回复 他很挖卡卡 0位粉丝 3楼二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液 电泳缓冲液 50Tris-乙酸（TAE）缓冲液 成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量 2mol/LTris碱 1mol/L乙酸 100mmol/LEDTA 水242g 57.1ml的冰乙酸（17.4mol/L） 200ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0） 补足1L 5Tris-硼酸（TBE）缓冲液 成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量 445mmol/LTris碱 445mmol/L硼酸盐 10mmol/LEDTA 水54g 27.5g硼酸 20ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0） 补足1L 染料 1溴酚蓝（bromophenolblue）加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。 1二甲苯青FF（xylenecyanoleFF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。 10mg/ml的溴化乙锭（ethidiumbromide） 小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4贮存。 凝胶上样液（gelloadingsolutions） 6碱性凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.3N氢氧化钠 6mmol/LEDTA 18聚蔗糖（400型） 0.15溴甲酚绿 0.25二甲苯青FF 水300ul10N氢氧化钠 120ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 1.8g 15mg 25mg 补足到10ml 6聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF 5mmol/LEDTA 15聚蔗糖（400型） 水1.5ml1溴酚蓝 1.5ml1二甲苯青FF 100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 1.5g 补足到10ml 6溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.25溴酚蓝 0.25二甲苯青FF 15聚蔗糖（400型） 水2.5ml1溴酚蓝 2.5ml1二甲苯青FF 1.5g 补足到10ml 6甘油凝胶上样液（4贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF 5mmol/LEDTA 50甘油 水1.5ml1溴酚蓝 1.5ml1二甲苯青FF 100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 3ml 3.9ml 6蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF 5mmol/LEDTA 40聚蔗糖 水1.5ml1溴酚蓝 1.5ml1二甲苯青FF 100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 4g 补足到10ml 10十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.2溴酚蓝 0.2二甲苯青FF 200mmol/LEDTA 0.1SDS 50甘油 水20mg 20mg 4ml0.5mol/LEDTA(pH8.0) 100ul10SDS 5ml 补足到10ml 2006-9-14 04:30 回复 他很挖卡卡 0位粉丝 4楼三.常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1NNaOH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1mol/L氯化钾2.5ml 用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。 SOC培养基 成分、方法同S