正交法优选黄芩的提取工艺.pdf

正交法优选黄芩的提取工艺 朱 玉 王晓华 安徽省医学科学研究所 安徽 合肥 230061 摘要 目的 研究黄芩的提取工艺 方法 以黄芩苷提取率和干膏率作为考察指标 采用L9 3 4正交试验法对黄芩提取工艺 进行优选 结果 提取次数对考察指标具有显著性影响 结论 黄芩可能好的提取工艺为依次加12 10 8倍量50 乙醇 回 流提取3次 每次1 5 h 关键词 黄芩 黄芩苷 正交试验 提取工艺 Extraction process of radix scutellariae with orthogonal test ZHU Yu WANG Xiao2hua Anhui Institute ofM edical Science Hefei 230061 China Abstract A i m To study the extraction process of radix scutellariae M ethods The extraction conditions of radix scutellariae were studied with orthogonal test L9 3 4 the contentof baicalin and dry extractivematerial taken as indexes and alcohol concentration ex2 traction times and extraction ti me as factors Results The extraction times has significant effect on the indexes Conclusion The opti2 mal extraction process is extracting radix scutellariae circumfluencely with 12 10 and 8 times volume of 50 alcohol in turn and 1 5 hours every time Key words radix scutellariae baicalin orthogonal test extraction process 黄芩是唇形科植物Scutellaria baicalensis Georgi 的干燥 根 其性寒味苦 具有清热燥湿 泻火解毒 止血 安胎的功 效 1 黄芩中主要含有以黄芩苷为主的黄酮类有效成分 赵 越平等 2 采用同一种溶剂 75 乙醇 分别以回流法 索氏 抽提法 超声法和浸泡法等不同提取方法 从黄芩原药材中提 取黄芩苷 进行了对比实验 结果用回流法提取黄芩苷快速 简便 提取率高 浸泡法和超声法提取率低 不能真实反映黄 芩中黄芩的实际含量 唐海燕等 3 考察了不同浓度的乙醇 对黄芩中黄芩苷的回流提取效果 结果采用50 乙醇出膏率 通讯作者 王晓华 女 研究员 从事中药化学和新药研发 电话 0551 2824004 E2mail 1210wxh sina com 最高 60 乙醇黄芩苷得率最高 但对提取时间 提取次数等 影响提取效率的因素没有考察 为此 我们采用正交试验的 方法 以黄芩苷提取率和干膏率为考核指标对黄芩的提取工 艺做了进一步的研究 1 仪器与材料 1 1 仪器 Waters2600E型液相色谱仪配996型二极管阵列紫 外检测器 美国WATERS公司 百万之一电子天平 美国PE公 司 S B22002T型超声波清洗器 上海奥特赛恩斯仪器公司 1 2 材料 黄芩苷对照品 中国药品生物制品检定所 批号 715 200010 供含量测定用 甲醇 色谱纯 磷酸 分析 纯 高纯水 医用乙醇 黄芩饮片 炒 购自合肥市和义堂饮 给药容积为0 3 ml 10 g 然后在给药后0 5 h和2 0 h内观察 排便动物数 以 2检验统计处理数据 结果见表 6 3 讨论 便秘是指粪便干燥难解 排便时间超过48 h 儿科临床中 小儿便秘较为多见 小儿便秘常见病因为饮食不足 食物成 份不当 肠道功能失常 体格与生理的异常及精神因素等 治 疗便秘的根本在于改善饮食内容 多补充水份和含纤维素多 的食物 同时训练排便习惯 药物治疗只在必要时临时使用 中医药在治疗小儿便秘方面有其作用明显 副作用小之独特 效果 便秘的中医辨证论治分食积 燥热 气滞 气血虚弱等证 型 分别采用消食 清热 理气 补气血等治法 6 小儿便通颗粒可以促进正常小鼠小肠蠕动 对抗小鼠因 阿托品所致小鼠小肠抑制状态 缩短正常小鼠的排便时间 增 加排便量和粒数 对因食自身粪便和失水造成的便秘模型具 有一定的治疗作用 同时小儿便通颗粒在剂量小时可以明显 增强胃的排空能力 但当剂量大时作用不明显 可能为该药的 双向调节作用 增加胃的容受性 有助于胃的消化作用 通过 酚红在小鼠小肠中的推进作用可看出 在十二指肠段 因所有 组别动物十二指肠内容物较少而致酚红含量给药组与模型组 无明显差异 但在空肠和回肠段可看出给药各剂量组动物整个 肠壁较松弛 蠕动增加 酚红残留率与空白对照相比较有显著 性差异 提示小儿便通颗粒可调节食物在胃中的容受性 增加 食物在胃中的排空作用和肠道中的推进率 因此本品具有一 定的泻下通便作用 临床可用于治疗小儿便秘 以上实验结果 与中医药理论相吻合 为临床安全合理用药提供了理论依据 参考文献 1 李仪奎 中药药理实验方法学 M 上海 上海科学技术出版 社 1991 321 413 2 鄢顺琴 凤良元 黄德武 等 枳术丸对胃排空肠推进作用的影 响 J 中成药 1996 18 4 30 2 3 陈 奇 中药药理研究方法学 M 北京 人民出版社 1993 356 4 俞励平 文 洁 孙素兰 等 润肠通便颗粒剂药效学研究 J 中药材 2004 28 8 685 7 5 陈 勤 孔小卫 刘 颖 一捻金胶囊泻下通便作用的实验研 J 究 中国中医药科技 2004 11 3 151 3 6 白学斌 梁淼淼 小儿便秘的病因及中西医治疗 J 陕西中医 函授 2006 6 19 21 收稿日期 2006 01 11 052 安 徽 医 药 AnhuiM edical and Phar m aceutical Journal 2006 Apr 10 4 片厂 经鉴定为Scutellaria baicalensis Georgi 2 方法与结果 2 1 样品溶液的制备 取黄芩药材 炒 10 g 按表2加一定 量 一定浓度的乙醇 回流提取一定的时间 一定的次数 合并 滤液 测量总体积 2 2 考察指标的测定 2 2 1 黄芩苷的HPLC法测定 色谱柱 Lichrospher52C18 4 6 mm 25 mm 日本岛津公司 流动相 甲醇 2 水 2 磷酸 47 53 0 2 检测波长 275nm 流速 1ml min 1 对照品溶 液 精密称取在60 减压干燥4 h的黄芩苷对照品1 5 mg 置 25 ml量瓶中 加甲醇超声溶解并稀释至刻度 摇匀 即得 每 1 ml中含黄芩苷60 g 供试品溶液 精密吸取一定量正交 试验样液 相当于0 4 g黄芩 置100 ml量瓶中 加70 甲 醇至刻度 密塞 超声处理30 min 冷却 滤过 弃取初滤液 取 续滤液用微孔滤膜 0 145 m 滤过 滤液作为供试品溶液 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 l 注 入液相色谱仪 测定 即得 2 2 2 干膏的测定 精密吸取正交试验提取液50 ml 置已 干燥恒重的蒸发皿中 水浴挥干 放置烘箱中减压干燥至恒 重 精密称量 算出干膏率 2 3 正交试验及结果 根据有关文献资料和预试验 选择乙 醇浓度 提取时间 提取次数三个因素 每个因素选取3个水 平的实验方案 考虑正交表一般要留有空列 故未将乙醇用量 列入考察因素 根据预实验结果将乙醇用量定为 第一次12 倍量 第二次10倍量 第三次8倍量 因素水平安排见表1 以黄芩苷提取率和提取液干膏率为综合评价指标 选用 L 9 3 4 正交试验表安排实验 测定并计算结果见表2 表3 黄芩苷提取率 提取液中黄芩苷的含量 黄芩饮片 中黄芩苷的含量 100 干膏率 提取液总固体量 投 料黄芩饮片量 100 综合评价 黄芩苷提取率 干膏率 2 4 结果分析 从表2试验结果位级计算可以看出 K1a K2a K3a 故因素A选择水平1 即乙醇浓度为50 K3b K2b K1b 故因素B选择水平3 即提取时间为2h K3c K2c K1c 因此因素C应选择水平3 即提取次数为3次 因素C的 R值最大 说明提取次数对检测指标影响最大 各因素对黄 芩提取工艺的影响程度依次为C A B 即提取次数 乙醇 浓度 提取时间 从表3试验结果方差分析同样得出 因素 C影响显著 因素B A对检测指标影响不显著 影响黄芩苷 提取率因素大小顺序为C A B 即提取次数 乙醇浓度 提取时间 综上分析 提示黄芩提取工艺方案以A1B3C3组合为佳 条件为黄芩饮片 炒 分别加12 10 8倍量50 乙醇 回流提 取3次 每次2 h 3 小结和讨论 由于从黄芩中提取黄芩苷的工艺研究报道较多 大多以 水为溶剂进行煎煮提取 然后通过调酸碱度等操作得到黄芩 苷粗品 收率在4 5 但该法操作繁琐 生产成本高 4 而且黄芩素 汉黄芩素等苷元成分难以提取出来 在预试验 中 我们首先比较了水煎煮提取黄芩 50 乙醇提取黄芩2种 方法 结果黄芩苷的提取率基本一致 均在85 左右 同时考虑水提取物中杂质成分太多 不利于制剂成型 我们在预试验中 还从制剂吸湿性的角度比较了50 乙醇提 表1 实验因素水平表 水平 因素A 乙醇浓度 因素B 提取时间 因素C 提取次数 150 1 h1次 260 1 5 h2次 370 2 h3次 表2 正交试验表及结果 水平 因素 ABCD 试验结果 黄芩苷 提取率 干膏率 综合 评价 1111154 9826 5181 49 2122286 4735 68122 15 3133388 3138 95127 26 4212373 6833 07106 75 5223186 1038 29124 39 6231265 9328 0593 98 7313279 3435 67115 01 8321353 0125 7278 73 9332175 7132 56108 27 K1330 90 303 25 254 20 314 15 K2325 12 325 27 337 17 331 14 G yi 2 917820 K3302 01 329 51 366 66 312 74CT G N 101980 R9 638 7537 496 13 表3方差分析结果 方差来源离差平分和 自由度均方F值因素影响 P A 乙醇浓度 155 95277 982 22不显著 P 0 05 B 提取时间 132 66266 251 90不显著 P 0 05 C 提取次数 2266 9021133 50 32 35显著 P 0 05 D 误差 70 08235 04 取与水提取后干膏的差别 取两者干膏细粉各约5 g 精密称 定 各置敞口的烧杯中 铺平 放置在相对湿度为70 的空气 中 8 24 h 8 d后 各称重 比较水份含量见表4 可以看出 50 乙醇提取物有更好的抗湿能力 表4 50 乙醇与水提干膏吸湿性比较 干膏 水分 8 h24 h8 d 50 醇提2 055 036 11 水提2 115 138 62 采用正交实验优选黄芩的提取工艺无论是以直观分析得 出的理想的最佳提取条件 还是经过统计学处理得出的方差 分析结果 都表明 C 提取次数 对检测指标影响最大 而B 提取时间 影响最小 鉴于K2b K3b两者数值相对较为接近 从省时 降耗 降低成本及实际需要 我们认为因素B选择水 平2 即每次1 5 h 更加适合工业化生产 因此黄芩的最佳 提取工艺参数 黄芩饮片 炒 回流提取3次 分别加12 10 8 倍量50 乙醇 每次1 5 h 趁热过滤 参考文献 1 中华人民共和国药典委员会 中华人民共和国药典2005年版 一部 S 北京 化