生产实习,狂犬疫苗.doc

生产实习鉴定考核表 实习单位 宁波荣安生物药业有限公司 班 级 生物工程102 学 号 2010023609 姓 名 钟佳云 实习前自主小结宁波荣安生物药业有限公司始建于2001年4月，系浙江卫信生物药业有限公司、宁波保税区控股公司、宁波市卫汉生物工程有限公司共同创办的一家生物制药生产企业。是宁波市科委认定的“高新技术企业”。 公司位于宁波市保税区留学生创业园内，厂区占地25亩，建筑面积14000平方米，拥有6000平方米符合GMP要求的洁净 厂房，是集生产、销售、科研、管理一体化的现代药业基地。公司的“人用狂犬病疫苗（ Vero细胞）”生产车间于2002年3月通过国家GMP认证，是宁波市首家获得GMP认证证书的生物制药企业，填补了宁波市医药界的空白。 目前，公司的主导产品为国家二类新药人用狂犬病疫苗（Vero细胞），主要用于被动物或可疑动物咬伤、抓伤者的治疗和预防作用，以Vero细胞（非洲绿猴肾细胞）为狂犬病毒载体， 通过传代增殖培养后，收获病毒液，灭活剂灭活病毒超滤、纯化获得高纯度抗原制成。公司引进了国内、外先进的Vero细胞生产技术，配备了一流的先进生产设备和检测仪器，引进了国内从事生物制品生产、研发的资深人才，以严格的GMP管理从事疫苗的生产、质控，为公司生产出高质量的产品奠定了坚实的基础。同时，公司针对我国药品市场的变化，抓住WTO入关以后给国内企业带来的 挑战和机遇，对未来发展勾画了一幅宏图，即对主导产品“人用狂犬病疫苗”制订出打造品牌 的战略方针，培养造就自己的研究开发能力，紧随国际先进水平重点攻克具有市场前景的产品和项 目，经过不到一年的时间，公司自主开发的乙型脑炎（Vero细胞）已经获得了较好的产品研究成果， 正处于临床申报阶段，力争早日投放市场。冻干人用狂犬病疫苗、人用狂犬病疫苗:凡被狂犬或其他疯动物咬伤、抓伤时，不分年龄、性别均应立即处理局部伤口（用清水或肥皂水反复冲洗后再用碘酊或酒精消毒数次），并及时按暴露后免疫程序注射本疫苗；凡有接触狂犬病病毒危险的任用（如兽医、动物饲养员、林业从业人员、屠宰场工人、狂犬病实验人员等），按暴露前免疫程序预防接种。接种本疫苗后，可刺激机体产生抗狂犬病病毒免疫力。用于预防狂犬病。 学生签名： 年 月 日生产实习日记日 期实 习 内 容备 注6.24听讲座，了解制药公司6.25参观公司车间，了解GMP车间构成6.26了解狂犬病疫苗工艺流程6.27细胞扩增培养6.28病毒液收获、离心 1 前言11 实习目的 毕业实习是学生大学期间的一门必修课，也是每一个大学生的重要实践内容。它不仅让我们学到了很多在课堂上学不到的知识，还使我们开阔了视野，增长了见识，为我们以后更好地把所学的知识运用到实际工作中打下坚实的基础。通过生产实习，我更深入地了解了专业知识，进一步掌握狂犬病疫苗生产的流程和要求，了解狂犬病疫苗生产过程中存在的问题以及理论和实际相冲突的难点问题。最后通过撰写实习报告，我学会了综合应用所学知识，提高分析和解决专业问题的能力。12 实习要求熟悉工艺知识、技术资料，记录讲解内容2 主题21 工厂简介 宁波荣安生物药业有限公司始建于2001年4月，系浙江卫信生物药业有限公司、宁波保税区控股公司、宁波市卫汉生物工程有限公司共同创办的一家生物制药生产企业。是宁波市科委认定的“高新技术企业”。公司位于宁波市保税区留学生创业园内，厂区占地25亩，建筑面积14000平方米，拥有6000平方米符合GMP要求的洁净 厂房，是集生产、销售、科研、管理一体化的现代药业基地。 目前，公司的主导产品为国家二类新药人用狂犬病疫苗（Vero细胞），主要用于被动物或可疑动物咬伤、抓伤者的治疗和预防作用，以Vero细胞（非洲绿猴肾细胞）为狂犬病毒载体， 通过传代增殖培养后，收获病毒液，灭活剂灭活病毒超滤、纯化获得高纯度抗原制成。公司引进了国内、外先进的Vero细胞生产技术，配备了一流的先进生产设备和检测仪器，引进了国内从事生物制品生产、研发的资深人才，以严格的GMP管理从事疫苗的生产、质控，为公司生产出高质量的产品奠定了坚实的基础。同时，公司针对我国药品市场的变化，抓住WTO入关以后给国内企业带来的 挑战和机遇，对未来发展勾画了一幅宏图，即对主导产品“人用狂犬病疫苗”制订出打造品牌 的战略方针，培养造就自己的研究开发能力，紧随国际先进水平重点攻克具有市场前景的产品和项目，经过不到一年的时间，公司自主开发的乙型脑炎（Vero细胞）已经获得了较好的产品研究成果， 正处于临床申报阶段，力争早日投放市场。 22工艺流程细胞扩增，37培养病毒接种对照细胞外源因子检查3335病毒培养无菌检查、病毒滴定、支原体检查病毒液收获、离心0.45m澄清过滤300KD超滤浓缩病毒液灭活、水解无菌检查、蛋白含量、灭火验证试验 蛋白含量 分子筛层析加入人血白蛋白（冻干）人用狂犬病疫苗vero细胞原液无菌检查、抗原含量、细菌内毒素检查3.1材料与方法3.11疫苗毒株 狂犬病病毒疫苗株LEP-Flury第六代，由中国兽医药品监察所鉴定、保管、分发，用于疫苗的制备；主种子批和工作种子批毒株各传 5代，分别按WHO和中国药典三部（2005 版）要求进行各项质量指标检测，合格的疫苗株种子批置-80 保存备用。3.12细胞及病毒培养 将BHK21 C13细胞接种于15L转瓶中培养，待细胞长成单层，细胞浓度达0.5106个/ml 时，用胰酶消化，收集，经1000g离心 5min，重悬于新鲜细胞培养液中，取2109个细胞，接种生物反应器悬浮培养阶段主要参数为： pH 7.2，DO 30%，温度37 ，转速30 r/min 。2d后循环培养，接种约24h后采用循环加液。病毒接种时，停止灌注。病毒培养阶段主要参数为：pH 7.4 ，DO 50% ，温度37，转速30 r/min。接种病毒 2h后，开始灌注，按3.0L/d进行灌注培养，每天取样测定细胞密度/细胞活力、葡萄糖、乳酸及铵的浓度，观察细胞病变，并检测病毒滴度。3.13病毒原液的浓缩、纯化及灭活 每个批次的病毒原液在浓缩、纯化、灭活时，加入终浓度为0.5% 的甘氨酸、0.1%的山梨醇作为稳剂，检测病毒滴度、抗原效价，并与未加稳定剂样品进行比较。毒力检定合格的病毒液合并后，用0.45m的中空纤维柱进行澄清，经100、500和750kD的中空纤维柱30倍浓缩，浓缩前后测定病毒毒力、牛血清白蛋白含量及病毒液抗原含量。采用Sephamse 6FF凝胶介质层析，平衡液及洗脱液均为0.02mol/L 的PBS，收集第1峰，即为纯化的病毒液。将-丙内酯按1/4000(v/v)终浓度加纯化的病毒液中，4 灭活16h，37 水解2h，进效力试验。3.14病毒液及成品检定病毒收获液、浓缩液的病毒滴度、病毒浓缩液蛋白含量、病毒灭活的验证、纯化液蛋白含量及内毒素检测均按中国药典三部（2005 版）相关要求进行。小牛血清白蛋白残留量测定采用反向间接血凝法，应不高于50 ng/ml ；BHK21 细胞残余DNA 含量的测定应不高于100 pg/头份。3.15成品的配制及其稳定性检测纯化后的病毒液鉴定合格后，加入一定比例的稳定剂（0.5% 的甘氨酸，1%的山梨醇），即为成品。分别在4、37、45 放置2年、1个月，12h，每隔一定时间取样保存，NIH法测定疫苗的效价。3.16统计学分析使用SPSS统计学软件进行统计分析，实验中细胞密度、代谢物浓度、病毒滴度、效价等指标均为3次以上试验的均值，所得数据以均数标准差表示，浓缩、纯化、灭活工艺的试验结果均采用配对t检验,以p0.05为差异有统计学意义。4总结短短的实习期很快就结束了，非常感谢宁波荣安生物药业有限公司和浙江万里学院给我们提供这样珍贵的实习机会，感谢实习期间老师在工作和生活上对我们的关心和照顾。这是我们大学生涯里精彩的一章。这次实习是对我们所学