香蕉果实品质比较.docx

植物生理学实验3个香蕉品种的果实品质比较分析 小组人员：谢小涵 蒋灵灵 王卓琴 邵方平 龚胜斌本实验通过测定3个香蕉品种的可溶性总糖、VC、可溶性蛋白和有机酸含量来比较这3个香蕉品种的果实品质。1.可溶性总糖含量的测定【实验目的】掌握蒽酮法测定可溶性总糖含量的原理和方法【实验原理】糖（还原糖与非还原糖）在硫酸作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成蓝绿色络合物，其颜色的深浅与糖含量高低呈正相关。利用蓝绿色物质在625nm波长处有最大吸收值的特性进行比色测定，方法简单。【器材与试剂】1.实验仪器与用具分光光度计、恒温水浴锅、天平、离心机、电炉、烘箱、研钵、 剪刀、刻度试管、玻璃棒、漏斗、移液管、容量瓶2.实验试剂葡萄糖标准液（200g/ml）：葡萄糖在80烘箱中烘至恒重，称取100mg，用蒸馏水定容至500ml，即得含糖量为200g/ml的标准液。蒽酮试剂：100mg蒽酮溶于100ml稀硫酸（向76ml浓硫酸中加30ml水），储于棕色瓶内，冰箱保存，最好使用当天配置。乙醇（80）活性炭3.实验材料3个品种的香蕉【实验步骤】1.可溶性糖的提取称取新鲜果肉1g，剪碎研磨至均浆，倒入三角瓶（50ml）中，加入10ml 80乙醇，80水浴40min，不断搅拌，冷却，4000g离心10min，残渣中加入5ml 80乙醇，重复在80水浴中提取2次，合并上清液，加入10mg活性炭，80水浴30min，过滤，定容至25ml，取滤液待测定。2.制作标准曲线取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号1234567葡萄糖标准液（ml）00.10.20.30.40.60.8蒸馏水（ml）10.90.80.70.60.40.2葡萄糖含量（g）0102030406080在每支试管中立即加入蒽酮试剂5ml，混匀，沸水浴10min，冷却。用分光光度计测定625nm处的OD值，绘制标准曲线。3.显色和比色吸取0.2ml样品提取液，加入0.8ml蒸馏水，混合，再加入5ml蒽酮试剂，小心混合，沸水浴10min，冷却。用分光光度计测定625nm处的OD值。从标准曲线上得到提取液中糖的含量。【结果计算】可溶性糖含量（mg/g）=CnV/a （W103）式中，C为从标准曲线查到的待测果实样品葡萄糖含量（g/ml）；a为样品提取液体积（ml）；V为提取液定容体积（ml）；n为稀释倍数；W为果肉重量（g）。【注意事项】1.应用蒽酮试剂与糖反应的呈色程度随时间发生变化，故样品要尽快比色。2.该显色反应非常灵敏，所用器皿需洁净。2.维生素C含量的测定【实验目的】学习并掌握2,6一二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C（抗坏血酸）的原理和方法【实验原理】2，6-二氯酚靛酚钠是氧化性染料，可将还原态的维生素C氧化成脱氢维生素C，而染料本身从深蓝色被还原成无色的衍生物。2，6-二氯酚靛酚钠在酸性条件下呈红色。在滴定终点之前，滴下的2，6-二氯酚靛酚钠立即被还原成无色。当溶液从无色转变成微红色时，即为滴定终点。【器材与试剂】1.实验仪器与用具锥形瓶（50ml）、移液管（1ml和10ml）、容量瓶、微量滴定管（3ml或5ml），研钵2.实验试剂抗坏血酸标准溶液：准确称取50mg抗坏血酸，溶于1的草酸溶液中，稀释至500ml，用棕色瓶储藏，冷藏保存，最好现用现配。2草酸溶液：草酸2g，溶于100ml蒸馏水中。1草酸溶液：1g草酸溶于100ml蒸馏水中。0.01 2,6一二氯酚靛酚溶液：称取104mgNaHCO3溶于300ml热水中，加入50mg 2,6一二氯酚靛酚溶解，冷却后，加水定容至500ml，过滤，滤液储于棕色瓶内（4，可保存一周）。每次临用前，用标准抗坏血酸溶液标定浓度。3.实验材料3个品种的香蕉【实验步骤】1.提取洗净新鲜果实，吸干，称取5g剪碎放入研钵内，加5ml 2草酸研磨成匀浆，倒入100ml的容量瓶内，用2草酸洗数次，定容至刻度，混匀后过滤，根据滤液颜色深浅考虑是否需要脱色。2.滴定标定2,6一二氯酚靛酚溶液。取2个50ml锥形瓶，其中1个加入1ml标准抗坏血酸溶液和9ml 1草酸溶液，混合；另外1个锥形瓶只加入10ml 1草酸溶液（为空白），分别用已标定的2,6一二氯酚靛酚溶液（染料）滴定至粉红色出现，15s不褪色。记录所用的2,6一二氯酚靛酚溶液毫升数，用K表示。取2个50ml锥形瓶。各加入提取液10ml，同样的方法用标定的2,6一二氯酚靛酚溶液滴定，记录两次滴定所得的2,6一二氯酚靛酚溶液毫升数，求平均值为滴定提取液所用的体积V1.【结果计算】样品名 称样品质量（W）/g提取液总体积(V）/ml测定时所取滤液（V3）/ml滴定样液所用染料体积（V1）/ml滴定空白所用染料体积（V2）/ml1ml染料氧化维生素C的量（K）/mg维生素C含量（mg/100g）维生素C含量（mg/100g）=（V1-V2）KV （WV3）100【注意事项】1.滴定维生素C时不要超过2min，因为样品内一般都含有其他物质，其还原染料的能力比维生素C迟缓，快速滴定可以减少它们的影响。2.染料2,6一二氯酚靛酚溶液的用量在1-4ml，超过此范围则应减少样品量或将提取液适当稀释。3.样品提取液要避免日光直射，否则会加速抗坏血酸的氧化。4.提取物中存在色素类物质，会影响滴定终点的观察，可加入适量白陶土进行脱色过滤后再滴定。每次滴定时以标准坏血酸溶液标定。3.有机酸含量的测定【实验目的】学习并掌握用指示剂滴定法测定有机酸含量的原理和方法。【实验原理】植物组织中的有机酸易溶于水、醇和醚，可用这些溶剂先将有机酸提出，然后用氢氧化钠标准溶液滴定，以酚酞为指示剂，通过消耗的氢氧化钠标准溶液的体积计算植物组织内有机酸的含量。【器材和试剂】1.实验仪器与工具电子天平、电热恒温水浴锅、研钵、量筒、移液管、烧杯、容量瓶、漏斗、锥形瓶、碱式滴定管等玻璃仪器和滤纸2.实验试剂0.1mol/L氢氧化钠标准溶液、酚酞指示剂、10g/L 95%乙醇溶液等3.实验试材3个品种的香蕉【实验步骤】1.样品提取称取5g果实，放入研钵中，加少许石英砂研磨成匀浆，用蒸馏水洗入50ml三角瓶中，加水约30ml，放入80水浴中浸提30min，期间不断搅拌。取出冷却，过滤入50ml容量瓶中，并用蒸馏水洗残渣数次，定容至刻度，充分摇匀做测定用。 2.测定根据预测酸度，用移液管取10-15ml样液到50ml三角瓶中，加入酚酞指示剂3-5滴，用0.1mlo/L氢氧化钠标准溶液滴定至出现微红色，摇30-60s不褪色为滴定终点，记下所消耗体积。取3次平均值。【结果计算】有机酸含量（）=cV1k50（V0m）100式中，c为氢氧化钠标准溶液摩尔浓度；V1为滴定时所消耗的氢氧化钠标准溶液体积（ml）；k为换算为某种酸克数的系数，见下表；50为试样浸提后定容体积（ml）；V0为吸取滴定用的样液体积（ml）；m为试样质量（g）。几种有机酸的换算系数（k）有机酸名称换算系数（k）果蔬与制品苹果酸0.067仁果类、核果类水果结晶柠檬酸（1个结晶水）0.070柑橘类、浆果类水果酒石酸0.075葡萄草酸0.045菠菜乳酸0.090盐渍、发酵制品乙酸0.060醋渍制品4.可溶性蛋白质含量的测定【实验目的】掌握考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量的基本原理和方法。【实验原理】考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。该染料在游离状态下呈红色，在稀酸溶液中当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者最大光吸收在465nm，后者在595nm在一定蛋白质浓度范围内（1-1000g），蛋白质与色素结合物在595nm波长下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。 考马斯亮蓝G-250于蛋白质结合反应十分迅速，2min左右即达到平衡。其结合物在室温下1h内保持稳定。此法灵敏度高，易于操作，干扰物质少，是一种比较好的定量法。其缺点是在蛋白质含量很高时线性偏低，且不同来源蛋白质与色素结合状况有一定差异。【器材与试剂】1.实验仪器与用具电子天平、分光光度计、离心机、研钵、刻度试管及试管架、移液管（1ml和5ml）、容量瓶（10ml）2.实验试剂考马斯亮蓝G-250染色液：称取考马斯亮蓝100mg，用50ml95%乙醇溶解，加100ml85%磷酸，加水稀释至1L，储于棕色瓶中。标准蛋白溶液（0.1mg/ml）：称取10mg牛清蛋白，用0.9%的氯化钠溶解，定容至100ml。3.实验器材 三个品种的香蕉【实验步骤】1.取7支试管，按下表加入试剂。混合摇匀，放置5-20min。用分光光度计测定OD595值。以OD595为纵坐标，标准蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。0123456牛血清蛋白（mg/ml）00.10.20.40.60.81.0蒸馏水（ml）10.90.80.60.40.20考马斯亮蓝试剂（ml）55555552.称取果肉样品2g放入研钵中，加2ml蒸馏水研磨成匀浆，移到离心管中，用6ml蒸馏水分次洗涤研钵，转移至离心管中，4000r/min离心15min，上清液转入容量瓶，蒸馏水定容至10ml