黄芩苷对大鼠缺血再灌注脑组织TNF-α、IL-1β表达的影响.pdf

第2 6卷第3期 2005年6月 西 安 交 通 大 学 学 报 医 学 版 J o u r n a lo fX i a nJ i a o t o ngU n i v e r s i ty M e d i c a l S c i e n c e s V o l 2 6N o 3 J u n 2 0 0 5 黄芩苷对大鼠缺血再灌注脑组织 TN F I L 1 表达的影响 杨养贤1 延卫东1 乔 晋2 石秦东1 蔡 云1 李信民3 西安交通大学 1 第一医院中医科 2 第一医院神经内科 3 医学院生物化学教研室 陕西西安 7 1 0 0 6 1 摘要 目的 探讨黄芩苷对大鼠缺血再灌注脑组织TN F I L 1 的表达和脑水肿及超微结构的影响 方法 采用大 脑中动脉缺血再灌注模型 先将大鼠随机分为假手术组 缺血再灌注组及黄芩苷治疗组 再用免疫组化法检测脑组织 缺血再灌注3 6 2 4hTN F 和I L 1 的表达 用称重法测定缺血再灌注3 6h脑组织含水量 电子显微镜观察缺血再 灌注2 4h脑组织的超微结构及黄芩苷对其影响 结果 TN F 和I L 1 在缺血再灌注3 6 2 4h明显表达 黄芩苷治 疗组的表达较之明显降低 P 0 0 1 缺血再灌注3 6h脑组织含水量明显增高 黄芩苷治疗组脑组织含水量较之明 显降低 P 0 0 5 P 0 0 1 脑组织超微结构显示 神经细胞肿胀 损伤以及细胞迟发性死亡程度显著减轻 结论 黄芩苷能降低脑缺血再灌注后TN F I L 1 的表达 具有一定的脑组织保护作用 关键词 脑缺血再灌注 TN F I L 1 脑水肿 超微结构 黄芩苷 中图分类号 R 2 8 5 5 文献标识码 A 文章编号 1 6 7 1 8 2 5 9 2 0 0 5 0 3 0 2 2 0 0 4 E f f e c t so fB a i c a l i no nt h ee x p r e s s i o no fT N F I L 1 i nc e r e b r a l t i s s u ea f t e r l o c a l c e r e b r a l i s c h e m i a r e p e r f u s i o ni nr a t s Y a n gY a n g x i a n 1 Y a nW e i d o n g 1 Q i a oJ i n 2 S h iQ i n d o n g 1 C a iY u n 1 L iX i n m i n 3 1 D e p a r t m e n to fT r a d i t i o n a lC h i n e s eM e d i c i n e F i r s tH o s p i t a l o fX i a nJ i a o t o n gU n i v e r s i t y 2 D e p a r t m e n to fN e u r o l o g y F i r s th o s p i t a l o fX i a nJ i a o t o n gU n v e r s i t y X i a n7 1 0 0 6 1 3 D e p a r t m e n to fB i o c h e m i s t r y M e d i c a lS c h o o l o fX i a nJ i a o t o n gU n i v e r s i t y X i a n7 1 0 0 6 1 C h i n a A B S T R A C T O b j e c t i v e T os t u dyt h ee f f e c t so fB a i c a l i no nt h ec e r e b r a l e d e m a e xpr e s s i o no fT N F a n dI L 1 a n du l t r a s t r u c t u r e i nl o c a lc e r e b r a l i s c h e m i a r epe r f u s i o ni nr a t s M e t h o d s T h er a t sw e r er a n d o m lyd i v i d e di n t o s h a mope r a t e dc o n t r o lgr o up i s c h e m i a r epe r f u s i o ngr o upa n dB a i c a l i nt r e a t m e n tgr o up T h e l o c a l c e r e b r a l i s c h e m i a r epe r f u s i o nm o d e l sw e r ee s t a b l i s h e dbym i d d l ec e r e b r a l a r t e ryo c c u s i o n MC AO T h ec o n t e n t so fb r a i nw a t e rw e r e m e a s u r e dw i t hd ry w e ta t 3h o u ra n d6h o u ra f t e r i s c h e m i a r epe r f u s i o n T h ee xpr e s s i o no fT N F a n dI L 1 a t 3h 6h 2 4ha f t e r i s c h e m i a r epe r f u s i o na n dt h ee f f e c t so fB a i c a l i no nt h e m w e r ee v a l u a t e dw i t hi mm u n o h i s t o c h e m i c a l m e t h o d T h eu l t r a s t r u c t u r ew a so b s e r v e du n d e re l e c t r o nm i c r o s c opea t2 4h o u ra f t e r i s c h e m i a r epe r f u s i o n R e s u I t s T h ee xpr e s s i o n so fT N F a n dI L 1 w e r ev e ryl o wi ns h a mope r a t e dc o n t r o lgr o up A t3h 6h 2 4ha f t e r i s c h e m i a r epe r f u s i o n t h e e xpr e s s i o n s w e r es ign i f i c a n t lyi n c r e a s e d I n t h egr o upst r e a t e d w i t h B a i c a l i c t h e e xpr e s s i o n sw e r es ign i f i c a n t lyd e c r e a s e d T h ec o n t e n t so fb r a i n w a t e ri n c r e a s e d m o r es ign i f i c a n t lyi ni s c h e m i a r epe r f u s i o ngr o upa t3h o u ro r6h o u rt h a nt h a ti ns h a m ope r a t e dc o n t r o lgr o up a n dc o mpa r e dw i t hi s c h e m i a r epe r f u s i o ngr o up t h e c o n t e n t s o f b r a i n w a t e r i n B a i c a l i n t r e a t m e n tgr o upw e r e d e c r e a s e d s ign i f i c a n t ly 0 0 5 0 0 1 C o mpa r e dw i t hi s c h e m i a r e pe r f u s i o ngr o up t h ed egr e e so fe d e m a i mpa i r m e n ta n dd e a t ho f n e r v ec e l l sw e r e l igh t e n e di nB a i c a l i nt r e a t m e n tgr o upa t 2 4h o u ra f t e r i s c h e m i a r epe r f u s i o n C o n c I u s i o n B a i c a l i n m ayd e c r e a s e t h ee xpr e s s i o n so fT N F a n dI L 1 a n dh a s apr o t e c t i v ee f f e c t o nt h ec e r e b r a l i s c h e m i a t i s s u ed u r i ng t h e i s c h e m i a r epe r f u s i o n K E Y WO R D S c e r e b r a l i s c h e m i a r epe r f u s i o n T N F I L 1 b r a i ne d e m a u l t r a s t r u c t u r e B a i c a l i n 收稿日期 2 0 0 4 0 8 2 6 修回日期 2 0 0 4 1 0 2 9 基金项目 西安市科技攻关项目 N o Y G 2 0 0 0 2 3 作者简介 杨养贤 1 9 5 4 女 汉族 副教授 主要从事脑血管病的中西医结合研究 3期 杨养贤 延卫东 乔 晋 等 黄芩苷对大鼠缺血再灌注脑组织TN F I L 1 表达的影响 脑缺血再灌注诱发大量白细胞浸润是造成脑组 织损伤的重要途径之一 而白细胞的浸润主要与细 胞间黏附分子 1 i n t e r c e l l u l a ra d h e s i o nm o l e c u l e 1 I C AM 1 有 关 肿 瘤 坏 死 因 子 t u m o rn e c r o s i s f a c t o r TN F 和白细胞 介 素 1 i n t e r l e u k i n 1 I L 1 是两个重要的细胞因子 不仅可以直接促 进中性粒细胞向缺血区聚集 而且可上调I C AM 1的 表达 也可通过抑制核因子K a p p a B N F B 使巨噬 细胞和有关细胞分泌其他炎性因子加重缺血再灌注 损伤 所以干预脑缺血再灌注时细胞因子的表达就 可能减轻缺血再灌注损伤 为此 我们利用大鼠脑缺 血再灌注损伤模型 观察了黄芩苷对缺血再灌注时脑 组织TN F I L 1 的表达及含水量和超微结构的 影响 1 材料与方法 1 1 动物及分组 雄性S D大鼠5 9只 3 5月龄 体质量2 5 0 3 1 0g 由西安交通大学医学院实验动物 中心提供 随机分为假手术组 缺血再灌注组及黄芩 苷治疗组 2 1只用于TN F I L 1 的测定 其中假 手术组3只 缺血再灌注组与黄芩苷治疗组各9只 后2组按缺血再灌注后3 6 2 4h均分为3个亚组 3 5只用于脑组织含水量的测定 其中假手术组7只 缺血再灌注组与黄芩苷治疗组各1 4只 后2组按缺 血再灌注后3 6h均分为2个亚组 另3只用于缺 血再灌注后2 4 h脑组织超微结构观察 其中假手术 组 缺血再灌注组 黄芩苷治疗组各1只 实验动物 分别进行以下处理 假手术组 行假手术后腹腔注 射1m L生理盐水 缺血再灌注组 术后腹腔注射 1m L生理盐水 黄芩苷治疗组 术后腹腔注射黄芩 苷注 射 液1 6 0 m g k g 河 北 雾 灵 制 药 厂 批 号 2 0 0 2 0 1 0 1 1 2 大鼠缺血再灌注模型 采用文献 1 2 报道的方 法制作大鼠大脑中动脉缺血 m i d d l ec e r e b r a la r t e r y o c c l u s i o n MC AO 再灌注模型 缺血再灌注组 黄 芩苷治疗组大鼠分离左侧颈总动脉 C C A 颈外动 脉 E C A 颈内动脉 I C A 及E C A的分支 甲状腺上 动脉 枕动脉和咽升动脉 用双极电凝器快速切断3 个分支 于接近舌骨底处结扎E C A 然后在靠近结扎 处剪一小口 取3c m长3 0单股尼龙线 将头部预先 加热成直径约0 2 2 0 2 4mm 长约2mm的鼓槌 状 由E C A切口处插入I C A 再利用尼龙线的弹力 调整方向进入颅腔至大脑前动脉 MC A起始处血流 即被阻断 一般插入长度为1 6 5 1 7 5mm 2h后 轻柔缓慢地拔出尼龙线 有阻力时停止 MC A即开 始再灌注 再灌注后3 6 2 4h分别处死取样 假手 术组仅切开颈部皮肤 分离出C C A E C A I C A之后 即逐层缝合皮下组织和皮肤 1 3 脑组织中TN F 和I L 1 的测定 大鼠缺血 再灌注3 6 2 4h后 分 别 用2 0g L戊 巴 比 妥 钠 5 0m g k g 麻醉 仰卧打开胸腔 经左心室插入针头 至升主动脉 剪开右心耳 用生理盐水2 0 0m L左右 灌注冲洗 再用4 0g L多聚甲醛 0 1m o l L P B配 制 p H 7 4 2 0 0m L缓慢灌注固定 开颅取脑 将脑组 织置4 0g L多聚甲醛中后固定2 4h 然后在冰冻切 片机上行1 0 m厚的冠状切片 采用免疫组化法测 定TN F I L 1 试剂盒由博士德生物制药公司提 供 其结果判定阳性为棕黄色 TN F I L 1 着色以 胞浆为主 在4 0 0倍视野下 每张切片随机选取7个 不同的视野 记录阳性细胞数量 每组观察相同部位 4个切片 并计算其平均值 1 4 脑组织含水量的测定 大鼠再灌注3 6h后分 别断头处死 在1m i n内快速撬开颅骨取出脑组织 取左侧脑组织电子分析天平称取湿重后 将称完湿重 GW 的脑组织置1 1 0 电热恒温烤箱中烤4 8h 后 称取干重 DW 脑组织含水量用下式计算 脑组织 含水量 WC GW G D GW 1 0 0 1 5 脑组织超微结构观察 取大脑中动脉供血区皮 质5mm 5mm大小 在 4 条件下快速切成 1mm 3以 下 小 块 置 于 2 5g L戊 二 醛 中 前 固 定 0 1m o l L磷酸缓冲液浸洗 1 0g L四氧化锇 O s O4 后固定2h 0 1m o l L磷酸缓冲液浸洗 酒精梯度脱 水浸透后 还氧丙烷置换 环氧树脂E p o n 8 1 2包埋 聚合后作半超薄切片1 2 m 美兰染色后光学显微 镜下定位 L K B V型下超薄切片机切成5 0 7 0n m 厚度的超薄切片 最后经醋酸铀 枸櫞酸铅染色 H 6 0 0型透射电子显微镜观察 拍片 1 6 统计学处理 所有数据采用S P S S 1 1 0统计软 件进行分析 以 组间比较采用t检验 2 结 果 2 1 脑缺血再灌注时TN F I L 的表达 结果显 示 脑组织TN F I L 1 在假手术组表达的极少 缺 血再灌注组 黄芩苷治疗组TN F I L 1 的表达明 显高于假手术组 有显著性差异 P 0 0 0 1 再灌注 3 6 2 4h黄芩苷治疗组明显低于对应时点的缺血再 灌注组 有显著性差异 P 0 0 1 说明黄芩苷能降 低脑缺血再灌注时TN F I L 的表达 图1 4 表1 122 西 安 交 通 大 学 学 报 医 学 版 第2 6卷 图1 缺血再灌注2 4h组TN F 的表达 F i g 1T h ee x p r e s s i o no fTN F i n i s c h e m i a r e p e r f u s i o ng r o u pa t 2 4h 4 0 图2 再灌注2 4h治疗组TN F 的表达 F i g 2T h ee x p r e s s i o no fTN F i nt r e a t m e n tg r o u pa t 2 4ha f t e r i s c h e m i a r e p e r f u s i o n 4 0 图3 缺血再灌注2 4h组I L 1 的表达 F i g 3T h ee x p r e s s i o no f I L 1 i n i s c h e m i a r e p e r f u s i o ng r o u pa t 2 4h 2 0 图4 再灌注2 4h治疗组I L 1 的表达 F i g 4T h ee x p r e s s i o no f I L 1 i nt r e a t m e n tg r o u pa t 2 4ha f t e r i s c h e m i a r e p e r f u s i o n 2 0 表1 脑缺血再灌注不同时间缺血脑组织TN F I L 1 的表达 T a b l e1 T h ee x p r e s s i o n so fTN F a n dI L 1 i nc e r e b r a l t i s s u eo fd i f f e r e n tp e r i o da f t e rc e r e b r a l i s c h e m i a r e p e r f u s i o n 23 I t e mS h a m I s c h e m i a r e p e r f u s i o n 3h6h2 4h T r e a t m e n t 3h6h2 4h n3333333 TN F 04 1 2 8 2 3 6 4 3 7 8 2 7 6 4 4 3 2 2 8 72 8 5 8 2 1 4 3 0 0 7 2 2 8 3 1 7 3 2 3 4 I L 1 04 3 9 6 2 7 9 4 5 3 7 3 0 1 4 5 9 2 3 3 12 8 7 3 2 6 4 3 2 2 1 2 7 6 3 3 7 6 2 8 1 P 0 0 1 v s i s c h e m i a r e p e r f u s i o ng r o u p 2 2 缺血再灌注时脑组织的含水量 结果显示 缺 血再灌注组脑组织含水量明显高于假手术组 并随再 灌注时间延长而增加 缺血再灌注3 6h组和假手术 组比较有显著性差异 P 0 0 5和P 0 0 1 黄芩苷 治疗组含水量明显低于缺血再灌注组 再灌注3h黄 芩苷治疗组与缺血再灌注3h组比较有显著性差异 P 0 0 5 再灌注6h黄芩苷治疗组与缺血再灌注 组6h组比较有显著性差异 P 0 0 1 表1 表2 脑缺血再灌注不同时间脑组织含水量的变化 T a b l e2 T h ec o n t e n t so f t h eb r a i nw a t e r i nd i f f e r e n tp e r i o da f t e rc e r e b r a l i s c h e m i a r e p e r f u s i o n 23 I t e mS h a m I s c h e m i a r e p e r f u s i o n 3h6h T r e a t m e n t 3h6h n77777 W e tw e i g h t m g 1 3 9 4 8 4 0 81 4 7 2 3 6 6 51 4 4 2 7 4 8 11 3 9 9 0 2 7 31 3 9 2 8 5 3 2 D r yw e i g h t m g 2 9 2 4 0 9 32 0 6 0 1 3 82 8 2 5 1 4 12 6 0 0 1 4 52 5 9 6 1 3 3 W a t e r c o n t e n t 7 9 0 2 1 3 28 1 4 2 1 3 9 8 5 9 6 1 6 4 8 0 2 6 1 4 2 8 1 3 5 1 3 9 N o t e s P 0 0 1 P 0 0 5 v s c o n t r o l P 0 0 1 P 0 0 5 v s i s c h e m i a r e p e r f u s i o ng r o u p 2 3 脑组织的超微结构观察 假手术组 大脑皮质 神经元核膜连续完整 细胞核圆形 核内染色质分布 均匀 常染色质丰富 胞质内细胞器丰富 线粒体圆形 或椭圆形 粗面内质网堆叠排列及核糖体丰富 缺血再灌注2 4h组 神经结构损伤明显 部分区 域溶解 形成空白区 出现较多的凋亡细胞及凋亡小 体 神经元细胞明显肿胀 电子密度降低 细胞核圆 形 核内染色质松散 核周有一薄层致密染色质团块 细胞质空化明显 细胞器减少 仅有的粗面内质网结 构扩张并脱颗粒 线粒体肿胀 嵴断裂 溶解 甚至成 空腔 图5 6 再灌注2 4h黄芩苷治疗组 神经细胞结构空白明显 减少 未见凋亡细胞及凋亡小体 仅有部分细胞出现细 胞核染色质致密染色质团块 出现早期凋亡细胞的结 构 神经元细胞仍有轻度肿胀 核圆形 核仁居中 核内 染色质分布均匀 细胞浆内细胞器丰富 可见丰富的粗 面内质网及轻度肿胀的线粒体 高尔基体扁平囊略有扩 张 核糖体丰富 神经元结构基本正常 图7 8 222 3期 杨养贤 延卫东 乔 晋 等 黄芩苷对大鼠缺血再灌注脑组织TN F I L 1 表达的影响 图5 缺血再灌注2 4h组神经细胞结构 F i g 5T h en e r v ec e l l i ns c h e m i a r e p e r f u s i o ng r o u pa t 2 4h 1 50 0 0 图6 缺血再灌注2 4h治疗组神经细胞结构 F i g 6T h en e r v ec e l l i nt r e a t m e n tg r o u p t a t 2 4ha f t e r i s c h e m i a r e p e r f u s i o n 1 50 0 0 图7 缺血再灌注2 4h组凋亡细胞 F i g 7A p o p t o s i s i n i s c h e m i a r e p e r f u s i o n g r o u pa t 2 4h 80 0 0 图8 缺血再灌注2 4h黄芩苷治疗组细胞凋亡的早期结构 F i g 8A p o p t o s i s i nt r e a t m e n tg r o u pa t 2 4ha f t e r i s c h e m i a r e p e r f u s i o n 40 0 0 3 讨 论 脑缺血继发的炎症级联反应在缺血再灌注损伤 中起着重要的作用 炎症反应的特征是白细胞浸润 脑组织 造成血管通透性增加和血浆蛋白渗出 3 目 前已经发现 短暂性脑缺血就会诱导I L 1 的表达 再 灌 注3 0 m i n缺 血 的 皮 质 即 可 检 测 到I L 1 mR NA 4 F e u e r s t e i n等将TN F 直接注入脑实质 发现毛细血管内皮细胞损伤 血管周围水肿形成和白 细胞黏附于毛细血管 5 以上研究强烈显示缺血 再 灌注早期产生的前炎症因子I L 1 和TN F 是促使 缺血性脑损伤向炎症性损伤转变的重要基础 由于 TN F I L 1 能通过N F B使巨噬细胞和其他细胞 分泌黏附分子 I L 6 I L 8 等其他细胞因子 6 而在 白细胞浸润中发挥重要作用的I C AM 1被上调后 在 与选择素 整合素协同作用下 致使白细胞滚动 迁 移 最终和内皮细胞黏附 并穿越内皮浸润到缺血的 脑组织 白细胞聚集在损伤区 通过微血管的阻塞 自由基形成 细胞毒素酶的释放 血管收缩反应的改 变 细胞因子的升高以及趋化因子的释放等多种机 制 7 8 最终造成脑组织的进一步损伤 神经元在缺 血晚期死亡方式为细胞调亡 研究证实 TN F 还可 通过多种机制 如与其I型受体p 5 5结合的途径诱导 细胞凋亡 9 而I L 1 也可能参与了缺血性脑损伤引 起的神经元死亡 4 许多学者尝试通过拮抗或下调 TN F I L 1 表达的途径 减轻再灌注后炎症连锁反 应造成的损害 如B a r o n e等应用单克隆TN F 抗体 阻断内源性TN F 活性和TN F 诱导的细胞调亡 显著减轻了缺血再灌注损伤 缩 小 了 脑 梗 死 的 面 积 1 0 Y a m a s k a k i等用I L 1 中和抗体或I L 1 阻 制剂原卟啉锌在脑内注射 发现脑水肿及梗死区的白 细胞浸润减轻 梗死的范围也明显缩小 1 1 但引入临 床研究目前还存在许多问题 黄芩苷是具有抗炎作用的中药黄芩的有效成分 近年发现黄芩苷可抑制感染性脑水肿大鼠脑组织的 TN F I L 1 的过度产生 减轻脑组织水肿 据推测 作用机制可能与抑制N F B的异常活化有关 1 2 我们利用MC AO大鼠 观察黄芩苷对TN F I L 1 的表达 脑组织含水量及脑组织超微结构的影响 研 究黄芩苷对再灌注损伤的脑组织保护作用 本实验 结果表明 缺血再灌注后大鼠脑组织TN F I L 1 的表达与脑组织含水量比假手术组明显升高 黄芩苷 治疗后大鼠脑组织TN F I L 1 表达明显下降 再 灌注3 6 2 4h治疗组明显低于对应时间点的缺血再 灌注组 具有显著性差异 P 0 0 1 大鼠脑组织含 水量明显下降 再灌注3 6h治疗组与对应时间点缺 血再灌注组比较 也有显著性差异 P 0 0 5和P 0 0 1 超微结构观察亦显示 黄芩苷治疗后大鼠脑 组织神经细胞肿胀 溶解与凋亡明显减轻 提示黄芩 苷可抑制缺血再灌注大鼠脑组织TN F I L 1 的表 达 减轻脑组织炎症损伤和脑细胞迟发性死亡程度的 作用 其作用机制是否与抑制N F B的异常活化及 I C AM 1表达上调有关有待做进一步研究 下转第2 2 7页 322 3期 蒋文慧 马爱群 董安平 等 骨髓间质干细胞的分离培养与鉴定 长增殖分化的因子 易引起细胞过早出现老化 应 用P e r c o l l分离液 密度 1 0 7 3g m L 分离骨髓间充 质干细胞数量较F i c o l l分离液 密度 1 0 7 7g m L 分离的细胞数量多 0用胰蛋白酶消化传代时 可先 用P B S洗涤2次 以除去残留的血清 提高消化效 能 还应严格掌握胰蛋白酶的浓度和消化时间 以 2 5m L L胰 蛋 白 酶 消 化2 3 m i n为 宜 1骨 髓 MS C s生长时群体依赖性强 所以传代时应注意细胞 种植密度 一般当细胞汇合后以1 2的比例传代 才 能保证传代后的细胞增殖较快 3 2 骨髓间充质干细胞的形态观察和鉴定 间质干 细胞来源于中胚层 具有很强的自我复制和多向分化 潜能 从细胞形态看 MS C s呈均一的成纤维细胞形 态 贴壁生长为梭型 三角形 各代之间的形态也较均 一 我们培养的MS C s贴附能力很强 细胞呈梭形 似成纤维样细胞 原代细胞呈集落生长 传代培养时 表现出了高度的扩增能力 骨髓MS C s的表面标志具有非专一性的特征 它 表达了间质细胞 内皮细胞和表皮细胞的表面标志 它对表面抗原S B 1 0 S H 2 S H 3 S H 4 C D 2 9 C D 4 4 C D 7 1 C D 9 0 C E 1 0 5 C D 1 0 6 C D 1 2 0 a 和 C D 1 2 4等均呈阳性反应 而对造血干细胞的标志抗 原C D 1 4 C D 3 4 C D 4 5均呈阴性反应 1 0 但是到目 前为止 还没有筛选到MS C s特异的分子标记 我们 采用免疫细胞化学检查发现培养的细胞表达C D 9 0 而不表达C D 3 4 这说明培养的细胞是不同于造血干 细胞另一大类干细胞 流氏细胞检测显示C D 9 0高 表达 并随传代次数的增加表达效率增高 提示传代 可有效纯化细胞 透射电镜下观察细胞内含有丰富 的粗面内质网和线粒体 核大 染色质丰富 说明体外 培养的骨髓MS C s功能活跃 本实验获得了体外培 养扩增MS C s的简单 稳定 高效的方法 这将为骨 髓MS C s的进一步研究和应用提供良好的实验基础 参考文献 1 B l a uHM B r a z e l t o nT R W e i m a n nJ M T h ee v o l v i ngc o n c ept o fa s t e mc e l l e n t i tyo r f u n c t i o n J C e l l 2 0 0 1 1 0 5 6 8 2 9 8 4 1 2 J i a ngYH J a h a gi r d aB N R e i n h a r d tR L e t a l P l u r ipo t e n cyo f m e s e n c hym a l s t e m c e l l sd e r i v e df r o m a d u l tm a r r o w J N a t u r e 2 0 0 2 4 1 8 4 4 1 4 9 3 W a ge r sA J W e i s s m a nI L P l a s t i c i tyo fa d u l ts t e m c e l l J C e l l 2 0 0 4 1 1 6 3 6 3 9 6 4 8 4 K r a u s eD S T h e i s eND C o l l e t o rM I e t a l M u l t i o r ga n m u l t i l i n e agee ngr a f t m e n tbyas i ngl eb o n em a r r o w d e r i v e ds t e mc e l l J C e l l 2 0 0 1 1 0 5 5 3 6 7 3 7 7 5 S t r a u e rB K o m o w s k iR S t e mc e l l t h e r ap yi npe r s pe c t i v e J C i r c u l a t i o n 2 0 0 3 1 0 7 7 9 2 9 9 3 4 6 H o r w i t zEM S t e mc e l lpl a s t i c i t y an e wi m ageo f t h eb o n em a r r o ws t e mc e l l J C u r rOpi nP e d i a t r 2 0 0 3 1 5 1 3 2 3 7 7 Wo o d b u r yD R eyn o l d sK B l a c kI B A d u l tb o n em a r r o ws t r o m a l s t e mc e l l se xpr e s sge r m l i n e e c t o d e r m a l e n d o d e r m a l a n d m e s o d e r m a lge n e spr i o rt on e u r oge n e s i s J JN e u r o s c iR e s 2 0 0 2 6 9 6 9 0 8 9 1 7 8 蒋文慧 马爱群 干细胞循环及其潜在应用前景 J 中华医学杂 志 2 0 0 3 8 3 2 1 1 9 2 3 1 9 2 5 9 K i t a n oY R a d uA S h a b b a nA e ta l S e l e c t i o n e n r i c h m e n t a n dc u l t u r ee xpa n s i o no fm u r i n em e s e n c hym a lpr oge n i t o rc e l l s byr e t r o v i r a l t r a n s d u c t i o no f cyc l i nga d h e r e n tb o n em a r r o wc e l l s J E xpH e m a t o l 2 0 0 0 2 8 1 2 1 4 6 0 1 4 6 9 1 0 Wu l fGG J a c k s o nKA G o o d e l lMA S o m a t i c s t e mc e l lpl a s t i c i ty c u r r e n te v i d e n c ea n de m e rgi ngc o n c ept s J E xpH e m a t o l 2 0 0 1 2 9 1 2 1 3 6 1 1 3 7 0 编辑 韩维栋 上接第2 2 3页 参考文献 1 E n r i qu eZ L W e i n s t e i nP R C a r l s o nS e t a l R e v e r s i b l em i d d l e c e r e b r a la r t e ryo c c l u s i o n w i t h o u t c r a n i e t o myi n r a t s J S t r o k e 1 9 8 9 2 0 1 8 4 9 1 2 信照亮 杨庆余 局灶缺血再灌注鼠脑模型的研究 J 陕西医学 杂志 1 9 9 4 2 3 9 5 7 0 5 7 3 3 徐元 包士尧 脑缺血后炎症反应及其干预对策 J 国外医学 脑血管疾病分册 2 0 0 2 1 0 6 4 4 2 4 4 5 4 J e a n WC S pe l l m a nS R N u s s b a u mF S e ta l R epe r f u s i o ni nju ry a f t e r f o c a l c e r e b r a l i s c h e m i a t h e r o l eo f i n f l a mm a t i o na n d t h e t h e r ape u t i ch o r i z o n J N e u r o s u rge ry 1 9 9 8 4 3 6 1 3 8 2 1 3 8 7 5 F e u e r s t e i nG W a ngXK B a r o n eF C e ta l Cyt