细胞遗传学实验.doc

实验五 细胞凝集反应（2学时 验证性实验）一、实验目的1、观察血细胞的凝集现象；2、掌握凝集素促使细胞凝集的原理。二、实验原理细胞质膜是由蛋白质不同程度镶嵌在脂双层中所形成的动态流动结构，蛋白质和脂类分子又与寡糖链结合为糖蛋白和糖脂分子，糖蛋白和糖脂分子伸至细胞表面的分枝状寡糖链在质膜表面形成细胞外被（又称为糖萼）。许多研究结果表明：细胞间的分子识别、细胞的生长和分化、免疫反应和肿瘤发生等均与细胞外被（分枝状寡糖链）有关。凝集素能与细胞外被的糖分子相连接、在细胞间形成“桥”，从而达到细胞凝集的效果。凝集素（1ectin）是一类含糖的（少数凝集素例外）并能与糖进行专一性结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素促使细胞凝集主要是由于它能与细胞外被的糖分子相连接、在细胞间形成“桥”的结果，且加入与凝集素互补的糖分子可以抑制细胞间的凝集反应。三、实验材料及用品n 实验材料：1土豆块茎。2.2的红细胞：以无菌方法抽取兔子静脉血液（加抗凝剂），用生理盐水洗5次，每次2000 r/min，离心5 min，最后按沉淀压积的红细胞体积用生理盐水配成2红细胞悬液n 器材：显微镜、托盘天平、载玻片若干、滴管2支、离心管2支。n 试剂：PBS缓冲液：称取NaCl 7.2g、NazHP04 1.48g、KH2P04 0.43g、加蒸馏水，定容至l000 mL，调pH值到7.2。四、实验步骤称取土豆去皮块茎2g加10 mL PBS缓冲液，浸泡2h（浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素）载玻片上滴一滴土豆凝集素再滴一滴2红细胞液，充分混匀静置20 min低倍显微镜下观察血球凝集现象以PBS液加2血细胞悬液作为对照实验五、实验作业1绘制简图，表示血细胞的凝集过程；2图示血细胞凝集的原理。实验六 细胞膜的通透性观察（2学时 验证性实验）一、实验目的1.了解细胞膜对物质通透性的一般规律。2.了解溶血现象及其发生机制。二、实验原理细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一种半透膜，可选择性控制物质进出细胞。各种物质出入细胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象就是渗透。渗透作用是细胞膜的主要功能之一。将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。将红细胞放在某些等渗盐溶液中，由于红细胞膜对各种溶质的通透性不同，膜两侧的渗透压平衡会发生改变，也会发生溶血现象。因此，发生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。本实验选用红细胞作为细胞膜透性的实验材料，将其放入不同的介质溶液中，观察红细胞的变化。三、实验材料及用品n 材料：鸡血细胞n 器材：普通显微镜、普通离心机、扭力天平、10ml 试管、10ml 刻度离心管、试管架，2ml 注射器（无需针头）或5ml 移液管、洗耳球、滴管、载玻片、擦镜纸、记号笔等。n 试剂：1Alsever 溶液葡萄糖 2.05g柠檬酸钠(Na9C6H5O7.2H2O) 0.89g柠檬酸（C6H 6O7.H2O） 0.05g氯化钠 0.42g蒸馏水 100ml调PH 至7.2，过滤灭菌或高压灭菌10min，置4冰箱保存。2. 0.128 mol/L NaCl 溶液。3 0.05 mol/L NaCl 溶液。4 0.4 mol/L NaCl 溶液。3. 0.128 mol/L NH4Cl 溶液。4. 0.128 mol/L NH4AC 溶液。5. 0.128 mol/L NaNO3溶液。7. 0.32 mol/L 葡萄糖。8. 0.32 mol/L 甘油。9. 0.32 mol/L 乙醇。10. 0.32 mol/L 丙酮。11. 蒸馏水。四、实验步骤：1从集市买一只活鸡现杀取血5ml（防止污染），放入盛有20ml Alsevers 液瓶中，混匀后置冰箱保存备用（2 周内使用）。2. 使用前，取用Alsevers 液保存的新鲜鸡血5ml ， 加入8ml 的0.128 mol/L 的NaCl 溶液，小心混匀，1000 r/min 离心5min，如此3 次洗涤，最后配成30%的鸡红细胞（CRBC）悬液。3. 取11 支试管，按附表中所示测试溶液，分别取样各3ml，作出标记后，各管均加入红细胞悬液2 滴，混匀后静置于温室中，观察各支试管中发生溶血的时间及其变化。五、观察结果1. 试管内液体分两层：上层浅黄色透明，下层红色不透明为不溶血（），镜检红细胞完好呈双凹盘状。2. 如果试管内液体混浊，上层带红色者，称不完全溶血（或），镜检有部分红细胞呈碎片。3. 如果试管内液体变红而透明者，称完全溶血（），镜检发现细胞全部呈碎片。六、实验作业表各种溶液的溶血现象观察结果编号 测试溶液 是否溶血 时间 分析原因1 0.128 mol/L NaCl2 0.05 mol/L NaCl3 0.4 mol/L NaCl4 0.128 mol/L NaNO35 0.128 mol/L NH4Cl6 0.128 mol/L NH4AC7 0.32 mol/L 甘油8