荧光二氯荧光素1.doc

荧光光谱分析法实验一、荧光分光光度计用于定性测定一、实验原理：不同的荧光物质吸收的激发光和发射的荧光波长是不同的，同一荧光物质所发出的荧光强度与其浓度之间呈正比。因此可利用激发波长及发射波长对物质定性测定，利用荧光强度进行定量测定。二、实验步骤样品池激发单色器光源1 仪器结构：发射单色器检测器记录仪2 实验设备与实验药品日立850型荧光分光光度计 0.05M硫酸 硫酸奎宁 3 仪器基本操作CPUXe lampMain稳压器（1）开机：（2）基本参数调整EntershiftInstru paramater 光标选择 基本参数有：bandpass（带通）、Scan Speed（扫描速度）、response（响应时间）、PM Gain（增益）、EM Filter（发射单色器）、Recording（记录方式）（3）记录仪定幅调整EntershiftREC SCALE 定辐参数：Ordinate（纵坐标）、Abscissa（横坐标）、Zero shift（零点位置）。(4) 激发光谱扫描Ex一侧Go to 200 Pre-Scan 到达800nm后 Pre-Scan Reture Start/Stop 到达800nm后 Start/Stop(5)发射光谱扫描Em一侧Go to 200 Pre-Scan 到达800nm后 Pre-Scan Reture Start/Stop 到达800nm后 Start/Stop(6) 差减扫描（扣背景扫描）DATA PROCESS SUDTRACTION BACKGROUND ENTER 按EM或EX一侧的START/STOP 扫描完成后再按START/STOP停止 SHIFT SUBTRACTION ENTER 按EM或EX一侧的START/STOP开始差减扫描，自动停止。（7）关机CPU Main 关电源 实验二 分子荧光光谱法测定二氯荧光素一、实验目的1了解分子的电子结构、振动结构和转动结构2. 掌握荧光光谱分析法的基本原理,学会利用工作曲线进行荧光定量分析的方法。二、实验原理 二氯荧光素的化学式为C20H10C12O5,可以用荧光光度法定量测定。对于稀溶液，在实验条件相同的情况下，同一物质的荧光强度与其浓度成正比。本实验用工作曲线法分析试样中的二氯荧光素含量。具体方法是：配制一系列不同含量的标准溶液，测其荧光强度，然后以浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标绘制工作曲线。在与标准溶液相同的条件下测未知试样的荧光强度，从工作曲线上即可查出试样中荧光物质的浓度。三、仪器和试剂1.仪器（1）M-850荧光光度计（2）1.00cm石英测定池（3）25ml 容量瓶8个（4）移液管：2.0ml 1支 5.00ml 1支 10.00ml 1支（5）刻度管：10ml 1支2. 试剂二氯荧光素标准溶液 储备标准液(25g/ml): 称取0.0125g 二氯荧光素（A.R），用0.01molL1 NaOH 溶液溶解后移入500ml容量瓶中并用0.10 molL1 NaOH稀释至刻度。四、实验步骤1. 二氯荧光素系列标准溶液及未知试样溶液的配制： 取5个50ml容量瓶，分别加入上述二氯荧光素溶液配置成0.00，1.00，2.00，4.00，6.00g/ml 2 .启动荧光光度计3. 发射光谱和激发光谱的绘制 在熟悉荧光分析仪的性能和操作方法的基础上，根据本实验所用的标准溶液及未知式样溶液的实际情况，测取发射光谱和激发光谱并找出最大发射波长和最大激发波长。4. 荧光强度的测量 根据绘制的发射光谱和激发