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一、选择题（每题1分，共15分）1、 A 2、 B 3、 A 4、 C 5 、B 6 、D 7 、A 8 、A 9、 A 10 、D 11 、C 12、 D 13 、D 14 、D 15、 A 1、下列有关基因的叙述，错误的是【 】A蛋白质是基因表达的唯一产物 B 基因是 DNA 链上具有编码功能的片段C 基因也可以是 RNA D 基因突变不一定导致其表达产物改变结构2、基因工程的单元操作顺序是【 】A 增，转，检，切，接B 切，接，转，增，检C 接，转，增，检，切D 切，接，增，转，检 3、生物工程的上游技术是【 】A 基因工程及分离工程 B 基因工程及发酵工程C 基因工程及酶工程 D 基因工程及细胞工程4、下列各组专业术语中，含义最为接近的是 【 】A 终止子与终止密码子 B 基因表达与基因转译C DNA 退火与 DNA 复性 D 重组子与转化子5、根据酶切活性对盐浓度的要求，限制性核酸内切酶可分成【 】A 2 大类 B 3 大类 C 4 大类 D 5 大类6、T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是【 】A 2 -OH 和 5 P B 2 -OH 和 3 -PC 3 -OH 和 2 P D 5 -OH 和 3 -P7、下列有关连接反应的叙述，错误的是【 】A 连接反应的最佳温度为 37 B 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10%C 连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1mMD 连接酶通常应过量 2-5 倍8、原生质体转化方法不大适用于 【 】A 大肠杆菌 B 枯草杆菌 C 酵母菌 D 链霉菌9、下列各常用载体的装载量排列顺序，正确的是 【 】A Cosmid -DNA Plasmid B -DNA Cosmid PlasmidC Plasmid -DNA Cosmid D Cosmid Plasmid -DNA10、若某质粒带有 lacZ 标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加入 【 】A 半乳糖 B 异丙基巯基 - 半乳糖苷（ IPTG ）C 蔗糖 D 5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚基 - -D- 半乳糖苷（ X-gal ）11、下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是 【 】A 大肠杆菌繁殖迅速 B 枯草杆菌分泌机制健全C 链霉菌遗传稳定 D 酵母菌表达产物具有真核性12、分子杂交的化学原理是形成 【 】A 共价键 B 离子键 C 疏水键 D 氢键13、某一重组 DNA （ 6.2 kb ） 的载体部分有两个 SmaI 酶切位点。用 SmaI 酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的 SmaI 酶切位点共有 【 】A 4 个 B 3 个 C 2 个 D 至少 2 个14、下列设计的探针中，最佳的是 【 】A ACATTAAATTATT B GGGCAC ACCTTGATAAGGT D CGGACTTGACCATC15、cDNA 法获得目的基因的优点是【 】A 成功率高 B 不含内含子 C 操作简便 D 表达产物可以分泌选择题【二】1( d ) 限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是A 修复自身的遗传缺陷B 促进自身的基因重组C 强化自身的核酸代谢D 提高自身的防御能力2( a )生物工程的下游技术是A 基因工程及分离工程B 蛋白质工程及发酵工程C 基因工程及蛋白质工程D分离工程及蛋白质工程3 ( a )基因工程操作常用的酶是:(I 内切酶II 连接酶III 末端转移酶IV聚合酶 A. I + II B. I + III + IV C. II + III + IV D. I +II + IV + III4 ( d )限制性内切核酸酶的星活性是指： A 在非常规条件下，识别和切割序列也不发生变化的活性。 B 活性大大提高 C 切割速度大大加快 D识别序列与原来的完全不同5( d )下列五个 DNA 片段中含有回文结构的是A. GAAACTGCTTTGAC B. GAAACTGGAAACTGC. GAAACTGGTCAAAG D. GAAACTGCAGTTTC6 ( c )关于cDNA的不正确的提法是： A同mRNA互补的单链RNA B同mRNA互补的含有内含子的DNA C以mRNA为模板合成的双链RNA D以上都不正确7 ( a )下列有关连接反应的叙述，错误的是A. 连接反应的最佳温度为 37 B. 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10%C. 连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1mMD. 连接酶通常应过量 2-5 倍8 ( c ) T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是A. 2 -OH 和 5 PB. 2 -OH 和 3 -PC. 3 -OH 和 5 PD. 5 -OH 和 3 -P9 ( d )载体的功能是A. 外源基因进入受体的搭载工具B. 不能为外源基因提供整合能力C. 不能提供复制能力D. 不能为外源基因提供表达能力10 ( c ) 黏性末端连接法，不仅操作方便，而且A产生新切点 B易于回收外源片段 C载体不易环化 D影响外源基因的表达11 ( c )下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大? A质粒 B黏粒 C酵母人工染色体(YAC) D噬菌体12 ( b )考斯质粒（cosmid）是一种 A. 容量最大一种载体B. 由 -DNA 的 cos 区与一质粒重组而成的载体C.是一种单链DNA环状载体D. 不能在受体细胞内复制，但可以表达13 ( d )某一重组 DNA 的载体部分有两个 BamHI 酶切位点。用 BamHI酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的 BamHI 酶切位点共有 A.4 个B. 3 个C. 1 个D. 2 个14( c)下列哪一种酶作用时需要引物? A限制酶 B末端转移酶 C反转录酶 D DNA连接酶15用下列方法进行重组体的筛选，只有( c )说明外源基因进行了表达。 (a)Southem印迹杂交 (b)Northem印迹杂交 (c)Western印迹 (d)原位菌落杂交二、名词解释1、限制修饰系统：限制修饰系统是大多数细菌体内存在的类似动物免疫系统的同限制性内切酶和甲基化酶组成的保护系统。即通限制性内切酶破坏噬菌体的DNA而导致噬菌体的寄主范围受到限制，同时通过甲基化酶的作用，将细菌自身的DNA甲基化，使DNA得以修饰，从而免遭自身限制性酶的破坏。2、质粒不亲和性：在没有选择压力的情况下，两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中稳定地共存的现象。3、cDNA文库：是指某生物某一发育时期所转录形成的cDNA片段与某种载体连接而成的克隆的集合。4、RACE：是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以mRNA为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到3，或5，端之间未知序列的方法。5、基因文库：通过克隆方法保存在适当宿主中的某种生物，组织，器官或细胞类型的所有DNA片段而构成的克隆集合体。6、RT-PCR:先用逆转录酶作用于mRNA，以寡聚dT为引物合成cDNA第一链，然后用已知一对引物，扩增嵌合分子，这种方法称为逆转录PCR7、载体：指基因工程中携带外源基因进入受体细胞的运载工具，它的本质是DNA复制子。8、S-D序列：在大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上，含有一个转译起始密码子及同16S核糖体RNA 3，末端碱基互补的序列，该序列最初由Shine 、Dalgarno发现，故后来命名为ShineDalgarno 序列，简称S-D序列。9、穿梭质粒载体：指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记，因而可在两种不同宿主细胞中存活和复制的质粒载体。10、MCS：指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片段。11、基因工程：是利用重组技术，在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，对各种生物的核酸（基因）进行改造和重新组合，然后导入微生物或真核细胞内进行无性繁殖，使重组基因在细胞内表达，产生出人类需要的基因产物，或者改造、创造新的生物类型。12、限制性内切酶的Star活性：限制性内切酶的识别和酶切活性一般在一定的温度、离子强度、pH等条件下才表现最佳切割能力和位点的专一性。如果改变反应条件就会影响酶的专一性和切割效率，称为星号（*）活性。13、T-DNA：是农杆菌侵染植物细胞时，从Ti质粒上切割下来转移到植物细胞的一段DNA。该DNA片段上的基因与肿瘤的形成有关。14、受体细胞 ：又称为宿主细胞或寄主细胞等，从试验技术上讲是能摄取外源DNA并使其稳定维持的细胞；从试验目的讲是有应用价值和理论研究价值的细胞15、克隆基因的表达：克隆基因的表达为人工修饰的外源基因导入宿主细胞中，在其中进行转录、翻译，产生有生物活性的蛋白质的过程。16、Cosmid vector:黏粒载体：含有cos位点的质粒载体。17、Probe:探针：指被标记物质标记了的核酸。18、Insert inactivation:插入失活，基因工程载体上的某些选择标记基因常常含某种或某几种限制性内切酶的单一酶切位点，在该位点用相应的限制性内切酶处理，并将外源DNA片段插入该位点，则插入的外源DNA片段将破坏原有基因的读码框，往往导致原有的选择标记基因无法翻译表达，或即使翻译表达，形成的也是丧失了原有生物活性的蛋白质，这一现象称为插入失活。3、-互补(Alpha complementation) ： 噬菌体载体的基因间隔区插入E.coli的一段调节基因及lac Z的N端146个氨基酸残基编码基因，其编码产物为 半乳糖苷酶的片段。突变型lac - E.coli 可表达该酶的W片段（酶的C端）。单独存在的及W片段均无半乳糖苷酶活性，只有宿主细胞与克隆载体同时共表达两片段时，宿主细胞内才有半乳糖苷酶活性，使特异性作用物变为蓝色化合物，这就是所谓的 - 互补。 8、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase)： 能去除DNA/RNA 5端的磷酸根的一种酶。制备载体时，用碱性磷酸酶处理后，可防止载体自身连接，提高重组效率。 10、自显影(Autoradiography)： 通过暴露于X-射线膜，用于观察和定量检测具有放射性活度的分子的技术。11、噬菌体（Phage）： 是感染细菌的病毒。12、印迹（Blot）： 将存在于凝胶中的生物大分子转移于固定化介质上并加以检验分析的技术。 13、蓝白斑筛选（Blue/White Cloning）： 当宿主菌受到噬菌体的感染后，两者通过 -互补作用，可以产生有活性的-半乳糖苷酶，在诱导剂IPTG和人工底物X-gal存在时，产生蓝色噬菌斑。如果噬菌体载体上插入了外源DNA片段，破坏了lac基因的结构，不能与宿主菌中的-半乳糖苷酶互补，在IPTG 和 X-gal存在时，则产生白色菌落。由于这种颜色标志，重组克隆和非重组克隆的区分一目了然，这种筛选方法称为蓝白斑筛选。 14、平端、钝端(Blunt Ends)： 酶沿对称轴切断DNA，产生的为平端或钝端。 17、趋化性（Chemotaxis）： 细胞对特异性的化学因子的反应，在该反应中，细胞要么被吸附要么被抑制。18、克隆（Clone）： 所谓克隆就是来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。 20、密码子（Codon）： mRNA上有一段编码区，在这一区段内，每3个核苷酸组成一个密码子，密码多肽链上的一个氨基酸。 21、感受态细胞（Competent cells）： 大肠杆菌悬浮在Cacl2溶液中，并置于低温（0-50）环境下一段时间，钙离子使细胞膜的结构发生变化，通透性增加，从而具有摄取外源DNA的能力，这种细胞称为感受态细胞。 26、DNase： 将DNA降解为更小的DNA片段或脱氧核糖核酸的酶。 27、电泳（Electrophoresis）： 通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术，称为电泳。 29、末端标记（End labeling） 在DNA或RNA的5-或3-加上标记性群体（放射性或非放射性）。较典型的有用激酶标记5-末端，或用DNA聚合酶或末端转移酶标记3-末端。 30、增强子（Enhancer）： 增强子是一段DNA序列，其中含有多个能被反式作用因子识别与结合的顺式作用元件。 31、酶（Enzymes） ： 酶是由活细胞合成的，对其特异底物起高效催化作用的蛋白质，是机体内催化各种代谢反应最主要的催化剂。 32、真核细胞（Eukaryote）： 单细胞或多细胞生物，具有复杂的细胞结构，可通过内部的细胞结构，多染色体和单个核而鉴定。 33、外显子（Exon）： 被内含子隔开的编码序列为外显子。 34、外切酶（Exonuclease）： 外切酶能辩认错配的碱基并加以切除，外切酶还有方向性。 35、表达载体（Expression Vector）： 表达载体是用来在受体细胞中表达（转录和翻译）外源基因的载体。 36、足迹法（Footprinting）： 用来检测DNA或RNA与蛋白结合的特定区域的化学或酶过程。足迹法主要用来检测受蛋白保护以免被剪切的碱基，参考方法检测碱基被修饰后会降低对蛋白的结合。37、凝胶阻滞分析（Gel shift Assay）： 该方法用来研究DNA与特异性蛋白的相互作用，通常是放射性标记的DNA片段与纯化蛋白，或提取物中的蛋白混合物相结合，然后在非变性凝胶中分析该产物。与游离DNA相比，蛋白：DNA复合物的迁移率将降低，因此，与游离DNA相对应，人们将观察到带中的“阻滞”。 38、基因表达（Gene Expression）： 就是基因转疗和翻译的过程。 39、基因组（Genome）： 一个生物体的全部基因序列称为基因组。 40、基因型(Genotype)： DNA存在于细胞核和线粒体内，携带遗传信息，决定细胞和个体的基因型。 41、生长因子(Growth Factors)： 生长因子是具有刺激细胞生长作用的细胞因子。 42、热灭活（Heat-Inactivation）： 为了获得更长的延伸时间，通过加热到某一较高的温度（通常是60-70 ）来破坏酶活性，并不是所有的酶都能热灭活。 43、辅助噬菌体(Helper Phage)： 能感染细菌细胞并辅助产生的噬菌体载体的单链DNA复制的病毒颗粒，也在细菌细胞内。 44、宿主菌(Host cell)： 放置克隆载体的细菌细胞。载体在宿主细胞内复制。 45、辣根过氧化物酶(HRP)： 该酶可催化底物脱去过氧化物。该特征用于比色和化学发光检测试剂。 46、白介素(Interleukins)： 指由白细胞或其他细胞产生的，同时在白细胞或其他细胞之间发挥作用的细胞因子。 47、内含子(Intron)： 真核生物的结构基因，是由若干个编码区和非编码区互相隔开但又边疆镶嵌而成，其中的非编码序列即为内含子。 48、体外(In vitro)： 不在活细胞中进行反应或实验，通常用与细胞内发现的类似条件进行。 49、体内(In vivo)： 在活的生物或细胞内进行的反应或实验。 50、同裂酶、同切点酶(Isoschizomers)： 来源不同的酶，但能识别和切割同一位点，这些酶称为同切点酶。 51、激酶（kinase）： 是指能够将-磷酸基团从磷酸供体分子上转移至底物蛋白的氨基酸受体上的一大类酶。 52、（大肠杆菌DNA聚合酶I的）Kenow片段（Klenow fragment）： 用特异的蛋白酶可以把DNA-pol I水解为两个片段，从G螺旋区直至R螺旋区及C末端，共604个氨基酸残基，称为klenow片段，具有DNA聚合酶活性及3-5核酶外切酶活性。 53、标记（Labeling）： 核酶或蛋白质被连接上具有放射性活性或非放射性活性标准物的过程。 54、文库（Library）： 将所有的重组DNA分子都引入宿主细胞并进行扩增，得到分子克隆的混合体，这样一个混合体称为基因文库。 55、接头，衔接物（Linker）： 所谓接头是指含有某些限制酶切点的核苷酸片段。 62、突变（mutantion）： 是指一个或多个脱氧核糖核苷酸的构成，复制或表型功能的异常变化。也称为DNA损伤。 63、无义密码子（nonsense codon）： 代表氨基酸链的终止的密码子。 64、无义突变（nonsense mutantion）： 由于碱基的取代，使原来可翻译某种氨基酸的密码子变成了终止密码子，这被称为无义突变。 65、无义抑制基因（nonsense suppressor）： mRNA转录期间，一个突变的tRNA插入了氨基酸的终止密码子，因此该tRNA“抑制”了多肽链的终止，允许加入特异性的氨基酸。 66、核酸酶（muclease）： 核酸酶是指所有可以水解核酸的酶，在细胞内催化核酸和降解，以维持核酸（尤其是RNA）的水平与细胞功能相适应。 67、寡核苷酸（oligonucleotide）： 一段短的（通常50核苷酸）单链DNA或RNA分子。 68、开放阅读框（ORF）： mRNA的从5至3方向，若有AUG开始，可以称为一个开放读码框架。 69、包装（packaging）： 将DNA装入保护性蛋白外壳的过程。该蛋白外壳要求能吸附和感染细菌。 70、聚核酶链式反应（PCR）： PCR的基本工作原理是以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5末端和3末端相互补的寡核酸苷片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。 71、肽（peptide）： 由 许多氨基酸相互结合而成为肽链。 72、噬菌粒（phagemid）： 是一种双链质粒，含噬菌体来源的复制，在细菌的细胞中出现有辅助噬菌体的情况下，可被诱导成单链DNA噬菌粒同时具有噬菌体和质粒的特征，可以像噬菌体或质粒一样复制。 73、表现型（phenotype）： 生物通过表达的基因来决定它的生理特征。 74、磷酸酶（phosphatase）： 具有催化已经磷酸化的蛋白质分子发生去磷酸化反应的一类酶分子。 75、质粒（plasmid）： 所谓质粒是存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子，小的2-3kb，大的可达数百kb。 76、点突变（point mutation）： 化学诱变剂引起的碱基在DNA链上的置换。 77、引物（Primer ）： 引物是由引物酶催化合成的短链RNA分子。 78、引物延伸（Primer Extension）： 为了检测某一特定信息的长度及大小，而反转录某一mRNA的方法。 79、原核细胞（Prokaryote）： 一种单细胞生物，不含复杂的细胞结构，原核生物含单一染色体，没有细胞核。 80、启动子（promoter）： RNA聚合酶结合并起动转录的特异DNA序列。 81、蛋白酶（protease）： 能降解别的蛋白质的一种酶。蛋白酶具有共同的（非特异性）的活性，或它们可识别和剪切特异性的肽序列。 82、蛋白（protein）： 由一个或多个多肽链构成的大分子，多肽链是由氨基酸按一定的顺序通过肽键而连构成的。 83、受体（receptor）： 受体是细胞膜上或细胞内能特异识别生物活性分子并与之结合，进而引起生物学效应的特殊蛋白质，个别是糖脂。 84、重组（recombinant）： 在接合、转化、转导或转座过程中，不同DNA分子间发生的共价连接称重组。 85、报告基因（reporter Gene）： 编码某种蛋白的基因，该蛋白的出现或活性很容易被检测出，当它在细胞内非正常表达及合成时。 91、核糖体RNA（rRNA）： 与蛋白质共同组成蛋白质合成的场所核蛋白体。 92、核糖体（ribosome）： rRNA与核蛋白体蛋白共同构成核蛋白体或称为核糖体。 94、RNA酶（RNase）： 将RNA降解成更小的RNA片段或核糖核苷酸的一类酶。 95、第二信使（second messenger）： 通常将Ca2+、DAG、IP3、Cer、cAMP、cGMP等这类在细胞内传递信息的小分子化合物称为第二信使。 96、测序（sequencing）： 检测DNA、RNA或蛋白分子的特定顺序的过程。 97、信号转导（Signal Transdution）： 细胞间的信息传递是跨膜的信号转导。信号转导包括以下步骤：特定的细胞释放信息物质 信息物质经扩散或血循环到达靶细胞与靶细胞的受体特异性结合受体对信号进行转换并启动靶细胞内信使系统靶细胞产生生物学效应。 98、星号活性（Star activity）： 限制性酶活性的一种修饰，该修饰可导致DNA在不与酶匹配的识别的位置进行剪切。 99、粘端（sticky Ends）： 有些酶能使识别序列相对两链之间的数个碱基对分开，形成5末端突出或3末端突出，这些突出端为粘性末端。 100、底物（substrate）： 化学或酶过程的靶目标。 101、模板（tamplate）： 指 解开成单链的DNA母链。 102、熔点温度（Tm）： DNA在热变性过程中紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称为融解温度（Tm）。 三、简答题（共25分，每题5分）1、什么是包涵体？重组蛋白在胞内表达时，常常以不溶性蛋白聚集成的晶状物形式存在，这种晶状体即包涵体。包涵体的形成是外源蛋白的高效表达时的普遍现象，这是由于肽链折叠过程中部分折叠的中间态发生了错误聚合，而不是形成成熟的天然态或完全解链的蛋白。2、什么是-互补筛选？质粒载体具有-半乳糖苷酶基因（lacZ），当外源DNA插入到它的lacZ，可造成表达后的-半乳糖苷酶失活，利用这一点就可以通过大肠杆菌转化子菌落在添加有X-gal-IPTG培养基中的颜色变化鉴别出重组子和非重组子。有些大肠杆菌上带有lacZ基因的部分编码序列，质粒载体中含有别一部分编码序列，当质粒转入载体后，可形成具有酶活性的蛋白质。这种lacZ基因上缺失了一部分编码序列的突变体与带有这一部分编码序列的突变体之间实现互补的现象叫互补。3、限制性核酸内切酶的活性受哪些因素影响？酶的纯度。DNA样品的纯度。DNA的甲基化程度。酶切反应的温度与时间。DNA分子的构型。限制性核酸内切酶的反应缓冲液。4、核酸操作的基本技术有哪些？核酸提取与纯化核酸的检测与保存核酸的凝胶电泳核酸分子杂交5、基因工程诞生的理论基础是什么？是现代分子生物学领域理论上的三大发现和技术上的三大发明。理论上的三大发现：证实了DNA是遗传物质揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定技术上的三大发明：限制核酸内切酶的发现与DNA切割DNA连接酶的发现与DNA片段的连接基因工程载体的研究与应用6、理想质粒载体的必备条件？ 具有较小的分子质量和较高的拷贝数。具有若干限制性核酸内切酶的单一酶切位点。具有两种以上的选择标记基因。缺失mob基因。插入外源基因的重组质粒较易导入宿主细胞并自制和表达。7、影响核酸保存的关键因素是什么？怎样保存核酸制品？ 关键因素：保存液的酸碱度保存温度 保存方法：一般保存可用浓盐液，NaCL-柠檬酸缓冲液或0.1mol/L醋酸缓冲液。对DNA来说，在pH411的范围分子的碱基较稳定，超出此范围DNA 易变性或降解，低温、稀碱下保存DNA及低温下保存RNA均较稳定。固态核酸通常在0以上低温干燥保存即可。8、合成cDNA第二链的主要策略有哪些？自身引导合成法置换合成法PCR合成法快速扩增cDNA末端法双链cDNA末端的处理cDNA与载体的连接四、问答题（每题10分，共40分）1如何有效地提高外源基因的表达效率？提高启动子强度 缩短启动子同克隆基因间距离 高效的翻译起始序列 高效的转录终止区 提高质粒拷贝数及稳定性 用以下方法提高翻译水平：调整SD序列与AUG间的距离用点突变的方法改变某些碱基增加mRNA的稳定性的 减轻细胞的代谢负荷：诱导表达表达载体的诱导复制 提高表达蛋白的稳定性，防止其降解：克隆一段原核序列，表达融合蛋白采用某种突变菌株表达分泌蛋白质2试述载体构建一般方法A 目的基因分析（1）ORF 分析（2）酶切位点分析B 载体选择与分析（1）多克隆位点分析（2）抗性标记分析（3）启动子与其他筛选标记分析C 连接体系与连接时间确定3 试述5RACE技术原理和方法PCR用于扩增代表mRNA转录物某一单位点与其3或5末端之间区域的部分cDNA称为快速扩增cDNA末端技术（RACE）。如果已知mRNA的一片段链内短序列，据此或设计基因特异引物，用原先存在的poly(A)尾（3末端）或附加的同聚尾（5末端）互补的序列做末端引物，就可以获得从未知末端直到已知区域的部分cDNA序列。为获得5末端部分cDNA克隆需用基因特异引物，产物第一链产物，可用末端脱氧核苷酸转移酶及dATP加poly(A)尾。通过QT引物和反转录使用的上游基因特异引物生成第二链cDNA。4 大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点是什么？优点：大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，基础生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚，对其基因表达调控的分子机理也比较了解，而且历经二十年的基因工程实践，大肠杆菌已发展成为一种安全的基因工程实验体系，有多种适用的寄主菌株和载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。缺点：在通常情况下，细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启动子；许多真核基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰，如正确的折叠和组装，而细菌中通常并没有这样的修饰机制，从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白；外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别，并被当做“异已分子”降解掉。5 PCR技术主要应用于哪些领域？核酸基础研究序列分析检测基因表达从cDNA文库中放大特定序列研究已知片段邻近基因或未知DNA片段进化分析医学应用分析生物学证据性别控制转基因检测。6 细菌的限制与修饰系统有什么意义？大肠杆菌K12限制与修饰系统的遗传分析揭示的4种表型是什么？ 宿主控制的限制与修饰现象广泛存在于原核细菌中，它有两方面的作用，一是保护自身DNA不受限制；二是破坏入侵外源DNA使之降解。细菌正是利用限制与修饰系统来区分自身DNA与外源DNA的。外源DNA可以通过多种方式进入某一生物体内，但是它必须被修饰成受体细胞的限制内切酶无法辩认的结构形式，才能在寄主细胞内得以生存，否则会很快被破坏。因此，在基因工程中，常采用缺少限制作用的菌株作为受体，以保证基因操作的顺利完成。大肠杆菌K12限制与修饰系统的遗传分析揭示，它有以下4种表型：1.rk+mk+ 野生型rk-mk+ 限制缺陷型 rk-mk- 限制和修饰缺陷型 rk+mk- 修饰缺陷型 2.rk+mk+ 野生型 rk-mk+ 限制缺陷型 rk-mk- 限制和修饰缺陷型 rk+mk- 修饰缺陷型 不知道哪一个是正确的7.在序列5-CGAACATATGGAGT-3中含有一个6bp的类限制性内切核酸酶的识别序列，该序列可能是什么? 并说明其原因？（6分）答： 回文序列是（3分）：5-CATATG-3（3分），8.一个理想的载体应具备那些条件？（8分）（1）能自我复制并能带动插入的外源基因一起复制（1分）；（2）具有合适的限制性内切酶位点。在载体上单一的限制性内切酶位点越多越好，这样可以将不同限制性内切酶切割后的外源DN A片段方便地插入载体（2分）；（3）具有合适的筛选标记。如抗药性基因等（1分）；（4）在细胞内拷贝数要多。这样才能使外源基因得以扩增（1分）；（5）载体的相对分子质量要小。这样可以容纳较大的外源DNA插入片段。载体的相对分子质量太大将影响重组体或载体本身的转化效率（