复方土贝母泡腾片的制备工艺及质量标准研究.pdf

陕西中医学院 硕士学位论文 复方土贝母泡腾片的制备工艺及质量标准研究 姓名 彭洁 申请学位级别 硕士 专业 中药学 指导教师 郭五保 20090401 摘要 土贝母泡腾片为治疗宫颈糜烂的现代中药复方制剂 有土贝母 黄连 蛇床子 血竭网位中药组成 本论文在中医整体观念 辨证施治的理论指导下 根据临床用药 特点和药物有效部位的性质 对药材的提取 分离 纯化以及泡腾片制剂的成型 质 量评价等方面进行了系统研究 制备出了安全 有效 具有良好释药速度 质量稳定 的泡腾片 在土贝母泡腾片有效成分提取研究中 采用单因素和正交试验结合得方法 优选 出土贝母 黄连 蛇床子的提取工艺 并采用大孔树脂纯化土贝母有效成分 制的了 工艺稳定 可行的泡腾片有效成分提取方法 在土贝母泡腾片成型工艺的研究中 以P H 值 发泡量 崩解时间为指标考察了 辅料的种类 用量及配比 确定了最佳处方 在土贝母泡腾片的质量评价研究中 按照 中华人民共和国药典 2 0 0 5 年版一 部I D 片剂 项下的有关规定 对制剂中的土贝母 黄连 血竭进行了薄层色谱鉴别 并且采用高效液相色谱法对制剂中的土贝母苷甲 小檗碱 血竭素进行了含量测定 并制定了相应的限度 同时对土贝母泡腾片进行了外观性状及其它有关片剂的常规检 查 结果表明该制剂质量稳定 可控 通过本文的研究 将药物制成阴道用泡腾片 有望为临床提供副作用小 作用迅 速 携带方便的治疗宫颈糜烂的中药复方制剂 同时也是对复方中药泡腾片的工艺特 点进行有益探索 为中药复方泡腾制剂的研制积累一定的经验和数据 关键词土贝母泡腾片 大孔树脂 含量测定 S t u d yo nC o m p o u n dR e c i p eT u b e i m u E f f e r v e s c e n tT a b l e A b s t r a c t P a n i c u l a t eB o l b o s t e m m ae f f e r v e s c e n tt a b l e t sf o rt h et r e a t m e n to fc e r v i c a le r o s i o no f t h em o d e r nt r a d i t i o n a lC h i n e s em e d i c i n e c o m p o u n dp r e p a r a t i o n t h e r e P a n i c u l a t e B o l b o s t e m m a G o l d e nT h r e a d C o m m o nC n i d i u mF r u i t d r a c o r h o d i nf o u rc o m p o n e n t so f C h i n e s em e d i c i n e I nt h i sp a p e r t h eo v e r a l lc o n c e p ti nC h i n e s em e d i c i n e d i a g n o s i sa n d g i v i n go ft r e a t m e n tu n d e rt h eg u i d a n c eo ft h et h e o r y t h eb a s i so fc l i n i c a lc h a r a c t e r i s t i c s a n dd r u gu s ea n de f f e c t i v ep a r to ft h en a t u r eo ft h ei n g r e d i e n t so ft h ee x t r a c t i o n s e p a r a t i o n p u r i f i c a t i o na n dp r e p a r a t i o no fe f f e r v e s c e n tt a b l e t sm o l d i n g a n do t h e ra s p e c t so fq u a l i t y a s s e s s m e n ts y s t e mr e s e a r c h p r e p a r e das a f ea n de f f e c t i v e w i t hg o o dd e l i v e r ys p e e d q u a l i t ya n ds t a b i l i t yo fe f f e r v e s c e n tt a b l e t s P a n i c u l a t eB o l b o s t e m m ae f f e r v e s c e n tt a b l e t si nt h eE x t r a c t i o no fa c t i v ei n g r e d i e n t s u s i n gs i n g l e f a c t o ra n dac o m b i n a t i o no fo r t h o g o n a lt e s tm e t h o d p r e f e r r e du n e a r t h e d P a n i c u l a t eB o l b o s t e m m a G o l d e nT h r e a d C o m m o nC n i d i u mF r u i tt h ee x t r a c t i o np r o c e s s u s i n gm a c r o r e t i c u l a rr e s i nP a n i c u l a t eB o l b o s t e m m ap u r i f i e da c t i v ei n g r e d i e n t s t h es y s t e m t h ep r o c e s si ss t a b l ea n df e a s i b l ew a yt oe x t r a c tt h ea c t i v ei n g r e d i e n t se f f e r v e s c e n tt a b l e t s T u b e i m ue f f e r v e s c e n tt a b l e t si nt h ef o r m i n gp r o c e s so ft h es t u d y t oP Hv a l u e t h e a m o u n to ff o a m t h ec o l l a p s et i m ea sa ni n d e xo ft h et y p e so fm a t e r i a l ss t u d i e d t h ea m o u n t a n dr a t i o t od e t e r m i n et h eb e s tp r e s c r i p t i o n T u b e i m ue f f e r v e s c e n tt a b l e t si nt h eq u a l i t yo fe v a l u a t i o ns t u d i e s i na c c o r d a n c ew i t h t h e P e o p l e sR e p u b l i co fC h i n aP h a r m a c o p o e i a a2 0 0 5v e r s i o no fI Dt a b l e t u n d e rt h e r e l e v a n tp r o v i s i o n so ft h ea g e n t si nP a n i c u l a t eB o l b o s t e m m a G o l d e nT h r e a d at h i nl a y e r d r a c o r h o d i nC h r o m a t o g r a p h ya n du s i n gh i g h p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h yf o r p r e p a r a t i o n o f g l y c o s i d e s P a n i c u l a t eB o l b o s t e m m aAb e r b e r i n e d r a c o r h o d i na d e t e r m i n a t i o na n ds e tt h ec o r r e s p o n d i n gl i m i t a tt h es a m et i m et oc a r r yo u tt u b e i m u e f f e r v e s c e n tt a b l e t st h ea p p e a r a n c ea n do t h e rt r a i t so ft h er o u t i n ee x a m i n a t i o no ft h et a b l e t t h er e s u l t ss h o wt h a tt h eq u a l i t yo ft h ep r e p a r a t i o na n ds t a b i l i t y c o n t r o l l a b i l i t y T h i ss t u d y t h r o u g hd r u gr i s em a d eo ft h ev a g i n ae f f e r v e s c e n tt a b l e t s i se x p e c t e dt o p r o v i d et h ec l i n i c a ls i d ee f f e c t s t h er o l eo fr a p i d e a s yt oc a r r yt h et r e a t m e n to fc e r v i c a l e r o s i o no ft r a d i t i o n a lC h i n e s em e d i c i n ec o m p o u n dp r e p a r a t i o n b u ta l s of o rt h ep r o c e s so f c o m p o u n dC h i n e s em e d i c i n ee f f e r v e s c e n tt a b l e t su s e f u lt oe x p l o r et h ec h a r a c t e r i s t i c so f C h i n e s em e d i c i n ed e v e l o p e dc o m p o u n de f f e r v e s c e n ta g e n t sa c c u m u l a t e ds o m ee x p e r i e n c e a n dd a t a K e y w o r d s e f f e r v e s c e n t t a b l e t s P a n i c u l a t eB o l b o s t e m m a d e t e r m i n a t i o no f A u t j o r p e n j i e T u t o r g u o w u b a o 陕p 叫一氏 a e I 院学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明 本人郧币 J i f 9J 所 交的学位论文 足个人住拧师的指导卜 独立进行研究工 作所取得的成粜 厄抄袋及编造行为 除义r 已经特别J J I J 以注明引用的内容外 本论 文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果 对本文的研究做出重要贡 献的个人科I 集 小 均L 二舀 艾t 以明确力 r 怀叫j f j 致谢 本人完全意以到本声明的法律 结果并 小人所水 1 的 J 责任 f t 沦史作行签名 彭睦一 1 期 细弘舢 5 f 1 火于学位论文使用授权的声明 陕两i I I X 纠皖仃十义保f i f 使用本人学f t 论文 M 意学院按规定向吲家有关部门机构 送交沦义的复叫f 和f hJ 扳 允许被俞阅f l I f I 列 本人授杖陕两r f 1 医学院可以将本学 位论文l I J 4 洲l 戈部 j j J 嵌r 4 1 1 入有关数掘阼进行榆索 l J 以采J j 影印 缩印或其他复印 手段保 卡1 1 12 I i i 小 讧论文 可以公自j 包括I I J 髓 沦文的伞部或部分内容 保心1 1 1 沦义化 f I f f j 串浈i 心遵守此规定 隆文作者签彩彭洼一 r 俭文晰签幽2 佞H 期 细c 7 年圹月 5 同 期 夙砷年乒月 S H l 复方土贝母泡腾片的制备工艺及质量标准研究 土贝母泡腾片的制备工艺及质量标准研究 引言 宫颈糜烂是妇科临床最常见的一种病变 非生理性宫颈糜烂过去认为与物理 化 学刺激 损伤或细菌及原虫感染有关 与淋菌和沙眼衣原体感染有关 近年来的生物 病因研究 发现宫颈糜烂的发生与单纯疱疹病毒 H S V 和人乳头瘤病毒 H P V 感染密切 相关 与性传播疾病蔓延有关 在全部女性生殖器癌中宫颈癌占半数以上 有关研 究证明单纯疱疹病毒 H S V 和人乳头瘤病毒 H P V 感染是患宫颈癌的首要原因H 1 宫 颈癌的发病率在有宫颈糜烂妇女比无宫颈糜烂者高十倍 因此宫颈癌的发生与宫颈糜 烂密切相关 宫颈癌是全球妇女恶性肿瘤中仅次于乳腺癌的第二个最常见的恶性肿 瘤 在发展中国家妇女中其发病率居第一位 宫颈癌是严重威胁妇女健康的疾病 其 死亡率占妇女恶性肿瘤的第二位 防治宫颈糜烂和H S V H P V 感染 可以从根源上减 少宫颈癌的发生 意义重大 非生理性宫颈糜烂无论何种病因 大多数由女性生殖道感染引发n 刀 女性生殖道 感染是最常见的疾病 据有关统计资料2 0 岁以上的女性有6 0 以上患有不同类型的 生殖道感染 近年来患病率呈逐年上升趋势 卫生条件较差的农村边远地区患病率超 过8 0 宫颈糜烂是慢性宫颈炎的主要表现形式 居于妇科病之首n 3 H 1 当前治疗宫颈糜烂根据不同病因采用抑菌 杀虫和抗病毒制剂 尚有使用一些物 理疗法 如微波 激光等虽有一定疗效n 5 1 6 1 但是难以抑制和灭杀感染的病毒 且有 一定的副反应和禁忌症 现有治疗药物对细菌 真菌感染和杀灭滴虫有较好的疗效 往往采用局部用药即可奏效 而对于衣原体 病毒感染的宫颈糜烂疗效不佳 并且复 发率较高 与哑临床感染有关 中医将寓颈糜烂以及与之有关的生殖道炎症归属于带下病的范畴 系有湿邪影响 冲任 带脉失约 任脉失固所致 病因病机复杂 治法各异 对应于宫颈糜烂和下生 殖道感染多用外治法 依照先破后或破中有立的原则 选用具有破坏炎症组织 有去 腐生肌 收敛消肿 抗炎杀虫的药物 使坏死脱落 再用具有促进上皮新生的药物使 上皮新生覆盖疮面 而达到愈合 有一定的疗效 近年来研制出以洁尔阴为代表的一 陕西中医学院2 0 0 9 届硕士学位论文 系列清热利湿的外用洗剂 栓剂 泡腾片等对生殖道炎症有一定的疗效n L l 8 1 近年来 的研究发现中药土贝母既有较强的抗病毒作用 临床上用于治疗扁平湿疣和由人乳头 瘤病毒 H P V 感染的尖锐湿疣有很好的疗效n 钆州 我院曾用于治疗宫颈糜烂 取得一 定的效果 并发现有促进鳞状上皮细胞修复的作用 糜烂面一次用药即恢复正常 根据上 述国内外对宫颈糜烂和相关女性生殖道感染的研究状况 发现宫颈糜烂的 发生与单纯疱疹病毒 H S V 和人乳头瘤病毒 H P V 感染密切相关 单纯的抑菌杀虫不能 使病毒感染得到抑制和治疗 致使糜烂反复发生 导致宫颈癌心 本研究拟研制一种 治疗宫颈糜烂和生殖道尖锐湿疣 具有较强的抗病毒作用 预防和治疗单纯疱疹病毒 H S V 和人乳头瘤病毒 H P V 感染 促进鳞状上皮细胞修复 同时抑制真菌 细菌 衣 原体 支原体感染和杀灭滴虫 改善疮面环境的药物 拟研制的复方土贝母泡腾片由中药土贝母 血竭 黄连 和蛇床子四位药组成 组方是参考了中医妇科药经典方和现代中医治疗宫颈糜烂方剂的基础上 根据中药的 现代研究和对宫颈糜烂现代研究认识以及我院过去曾用过的土贝母栓剂的临床疗效 以及我们在1 0 3 5 工程中对土贝母的研究和技术经验 选用以中药土贝母为主的方剂 从防治并举的角度出发 通过预防和治疗单纯疱疹病毒 H S V 和人乳头瘤病毒 H P V 为主的生飧道感染 达到治疗宫颈糜烂的目地 从而减少宫颈癌的发生 该方用土贝母做君药 近代研究发现土贝母有抗病毒作用 多年来用于治疗扁平 湿疣和尖锐湿疣等由病毒感染的皮肤病 性病 临床上用于治疗宫颈糜烂有效晗引 同 时发现土贝母有抗癌以及癌前病变活性 H P V 等的感染是非生理性宫颈糜烂的主要原 因 临床上常见弧临床感染 并无明显症状 宫颈糜烂发生时已有癌前病变的可能 因此选用土贝母作为方剂的君药取其既有抗病毒作用又有可能逆转癌前病变 从而不 仅治疗宫颈糜烂于本 尚可预防癌变的发生 血竭为臣药 有活血化瘀的作用 用于 去腐生肌 临床用于治疗富颈糜烂有效 黄连中含有多种抗茵有效成分 国内外报道 甚多 体外实验证明 黄连和小檗碱的抗菌作用基本一致 在诸多常用中药晕黄连有 较宽的抗菌谱 对多数细菌和真菌都有较强的抗菌作用 另外黄连还有治疗沙眼衣原 体 轮状病毒和单纯疱疹病毒 H S V 的报道 1 蛇床子临床上一直是用于治疗阴道滴 虫的首选药物之一汜4 l 具有杀灭滴虫和抑制真菌的作用 同时还有止痒的功效 以上 四位中药组方 重在抗病毒 辅以去腐生肌和抑制生殖道感染 达到标本兼治的目的 2 复方土贝母泡腾片的制备工艺及质量标准研究 第一部分方中药物相关文献研究综述 土贝母 本品为葫芦科植物土贝母B o b o s t e m m ap a n i c u l t u m M a x i m F r a n q u e r 的干燥块 茎 秋季采挖 洗净 掰丌 煮至无白心 取出 晒干 此品能散结 消肿 解毒妇引 土贝母中已分离出皂苷 帑醇 脂肪酸等多种化学成分 皂苷类为土贝母中的主要活性成分 含量较大 孔凡华等从土贝母的经氯仿脱脂 后的酒精浸出液中 用正丁醇萃取的方法得到总皂苷 总皂苷经反复层析得到5 个化 合物 土贝母皂苷甲 I 土贝母皂苷乙 I I 土贝母皂苷丙 I I I 土贝母皂苷丁 土贝母皂苷戊虽已分离出来 但其结构一直未见报道防刎 甾醇及其苷类 1 其中包括谷甾醇 p 一谷甾醇棕榈酸酯 7 2 厶2 5 一豆甾三烯一3 一 醇 7 盥脚豆蹒三烯醇一3 O 一十九烷酸酯 L 2 5 豆甾三烯醇 3 0 一O 一吡喃葡萄糖 苷与 L 衢豆甾三烯醇一3 0 1 3 一D 6 一棕榈酰基 吡喃葡萄糖苷等 生物碱类化合物 刘文庸等从土贝母中分离出三个生物碱 分别为吡咯基 a 甲 基甲酮 4 一 2 架线基一5 一甲氧基甲基一吡咯 I 基 丁酸甲酯 2 一 2 一甲酰基 5 甲氧 甲基一毗咯 1 基 3 苯基一丙酸甲酯口引 杂环化合物 何风兴等从土贝母的乙醇提取物的氯仿层中得到一个具升华性的白 色裂片状结晶 鉴定为麦芽酚 有机酸类 从土贝母脂溶性部分得到一不规则片状结晶 鉴定为棕榈酸m 1 糖类 主要为麦芽糖和蔗糖 土贝母的药理作用主要为抗肿瘤 抗病毒 其中土贝母苷甲对多种肿瘤细胞具有 抑制作用 但对各种不同的肿瘤细胞敏感度有差异如胃癌 H c G 宫颈癌 H e l a 结肠癌 C O L O 胰腺癌 P A N C 一1 神经母细胞癌 G O T O D B A 对稳定 性结果影响的重要性为B C D A 由方差分析 表 可知 因素C 对显色吸收度的影 响有显著性意义 而因素B 对显色稳定性的影响有显著性差异 结合两因素 本实验 选取A B C D 即4 香草醛一冰醋酸 0 6 m l 高氯酸 显色温度6 5 显色时间2 5 m i n 为土贝母总皂苷的显色条件 1 1 1 6 线性关系的考察 精密量取土贝母苷甲对照品溶液 1 0 4 5 2 m g m 1 0 2 m l 0 4 m l 0 6 m l 0 8 m l 1 O m l 1 2 m l 1 4 m l 分别置于l O m l 具塞试管中 7 5 C 水浴烘干 向其中加入4 香草醛 冰醋酸0 2 m l 再加高氯酸0 6 m l 于6 5 水浴显色2 5 m i n 流水冷却至室温 后加入4 m l 冰醋酸稀释 摇匀 以不加对照品但处理方法相同的试剂为空白 照分光 光度法 中国药典 2 0 0 5 年版一部附录V A 1 5 分钟后 在分光光度计4 6 9 n m 处测 定其吸光度 结果见表5 以吸光度A 为纵坐标 土贝母苷甲含量C 为横坐标 绘制标准曲线 图1 计 算回归方程 Y I 7 7 1 9 X 0 0 1 6 9 相关系数 r O 9 9 9 9 结果表明土贝母苷甲在0 2 0 9 0 4 m g 1 4 6 3 2 8 m g 的范围内线性关系良好 8 复方土贝母泡腾片的制备工艺及质量标准研究 表格5 土贝母总皂苷标准曲线测定结果 图表1 土贝母苷甲紫外吸收标准曲线 1 L1 7 标准品精密度实验 精密吸取土贝母苷甲对照品溶液 1 0 4 5 2 m g m 1 0 5 m l 供试品溶液0 3 5 m l 于l O m l 具塞试管中 7 5 C 水浴烘干 向其中加入4 香草醛一冰醋酸0 2 m l 再加高氯酸0 6 m l 于6 5 C 水浴显色2 5 m i n 流水冷却至室温后加入4 m 冰醋酸稀释 摇匀 以相应的试 剂为空白 放置1 5 m i n 后在4 6 9 n m 处重复检测6 次 结果见表6 表格6 精密度试验结果表 结果表明 仪器精密度良好 9 陕西中医学院2 0 0 9 届硕士学位论文 1 1 1 8 稳定性试验 精密吸取土贝母苷甲对照品溶液 1 0 4 5 2 m g m 1 0 5 m l 供试品溶液0 3 5 m i 于 l O m l 具塞试管中 7 5 C 水浴烘干 向其中加入4 香草醛一冰醋酸0 2 m l 再加高氯酸 0 6 m l 于6 5 C 水浴显色2 5 m i n 流水冷却至室温后加入4 m l 冰醋酸稀释 摇匀 以 相应的试剂为空白 放置1 5 m i n 后在4 6 9 n m 处于l 小时内检测 结果表7 表格7 稳定性试验结果 结果表明 显色在l 小时内稳定 1 1 1 9 药材总皂苷含量测定 取本品粉末 过四号筛 约0 3 9 精密称定 置具塞锥形瓶中 精密加入7 0 乙醇5 0 m l 称定重量 超声处理3 0 分钟 再称定重量 用7 0 乙醇补足减失的重量 摇匀 滤过 精密量取续滤液2 5 m l 水浴蒸至无醇味 加水l O m l 移置分液漏斗中 用水饱和的讵丁醇提取4 次 2 0 m l 2 0 m l l O m l l O m l 合并正丁醇液 蒸干 残 渣加甲醇溶解 转移至5 m l 量瓶中 加甲醇至刻度 摇匀 精密吸取供试品溶液0 3 5 m i 于l O m l 具塞试管中 7 5 C 水浴烘干 向其中加入 4 香草醛一冰醋酸0 2 m l 再加高氯酸0 6 m l 于6 5 水浴显色2 5 m in 流水冷却至室 温后加入4 m l 冰醋酸稀释 摇匀 以相应试剂为空白 放置1 5 m i n 分光光度计4 6 9 n m 处测量吸收度 结果见表8 表格8 药材总皂苷含量测定结果 上述显色供试品溶液在1 9 0 7 0 0 n m 的波长范围内扫描图 见图2 2 2 3 1 1 2 土9 1 母苷甲含量测定 1 1 2 1 仪器与试剂 W a t e r s 2 6 9 0 高效液相色谱仪 W a t e r s 9 9 6 二极管阵列检测器 T G L 1 6 G 离心机 上 1 0 复方土贝母泡腾片的制备工艺及质量标准研究 海安亭科学仪器厂 H 6 6 0 2 5 T 超声清洗机 无锡超声电子设备厂 F W l 3 5 型倾斜式 高速万能粉碎机 天津市泰斯特仪器有限公司 M i l l e n n i u m 3 2 色谱工作站 B P 2 1 1 D 十万分之一天平 德国赛多利斯公司 土贝母苷甲对照品 由中国药品生物制品鉴 定所提供 供含量测定用 批号 1 11 5 3 6 2 0 0 3 0 4 甲醇为色谱纯 水为纯化水 其 余试剂均为分析纯 1 1 2 2 色谱条件 流动相甲醇 水 6 5 3 5 检测波长 2 1 4 r i m 流速l m l m i n 温度2 5 1 1 2 3 对照品溶液的制备 取减压干燥至恒重的土贝母苷甲对照品8 2 6 m g 精密称定 置l O m l 量瓶中 以 甲醇溶解并稀释至刻度 摇匀 即得 每I m l 中含土贝母苷甲0 8 2 6 m g 1 1 2 4 供试品溶液的制备 取本品粉末 过四号筛 约0 3 9 精密称定 置具塞锥形瓶中 精密加入7 0 9 6 乙醇5 0 m l 称定重量 超声处理3 0 分钟 再称定重量 用7 0 乙醇补足减失的重量 摇匀 滤过 精密量取续滤液2 5 m l 水浴蒸至无醇味 加水l O m l 移置分液漏斗中 用水饱和的正丁醇提取4 次 2 0 m l 2 0 m l l O m l l O m l 合并正丁醇液 蒸干 残 渣加甲醇溶解 转移至5 m l 量瓶中 加甲醇至刻度 摇匀 即得 1 1 2 5 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各l O 肛1 注入液相色谱仪 测定 测量 结果见表9 表格9 土贝母药材含量测定结果 名称称量值g峰面积含量 m g 含量 样10 3 0 6 59 4 5 2 8 67 2 62 3 7 样20 3 0 9 69 4 9 3 9 37 3 12 3 6 均值2 3 6 5 1 1 2 6 结论 药材含量符合药典规定 1 2 蛇床子药材的研究 陕西中医学院2 0 0 9 届硕士学位论文 1 2 1 仪器与试剂 W a t e r s 2 6 9 0 高效液相色谱仪 W a t e r s 9 9 6 二极管阵列检测器 T G L 1 6 G 离心机 上 海安亭科学仪器厂 H 6 6 0 2 5 T 超声清洗机 无锡超声电子设备厂 F W l 3 5 型倾斜式 高速万能粉碎机 天津市泰斯特仪器有限公司 M i l l e n n i u m 3 2 色谱工作站 D K 9 8 I I 型电热恒温水浴锅 天津市泰斯特仪器有限公司 B P 2 11 D 型十万分之一天平 德 国赛多利斯公司 蛇床子素对照品 由中国药品生物制品鉴定所提供 供含量测定 用 批号 0 8 2 2 2 0 0 2 0 4 甲醇为色谱纯 水为双蒸水 其余试剂均为分析纯 1 2 2 色谱条件 流动相乙腈 水 6 5 3 5 检测波长 3 2 2 n m 流速l m l m i n 温度2 5 1 2 3 对照品溶液的制备 精密称取蛇床子素对照品适量 加无水乙醇制成浓度为0 0 7 5 5 2 m g m 1 的溶液 1 2 4 供试品溶液的制备 取本品粉术 过三号筛 约0 1 9 精密称定 置具塞锥形瓶中 精密加入无水 乙醇2 5 m i 密塞 成定重量 放置2 小时 超声处理3 0 分钟 功率3 0 0 W 频率5 0 k l l z 放冷 在称定重量 用无水乙醇补足减失的重量 精密量取上清液5 m l 置l O m l 的 量瓶中 加无水乙醇稀释至刻度 摇匀 即得 1 2 5 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各I O P l 注入液相色谱仪 测定 结果 见表1 0 表格1 0 蛇床子药材含量测定结果 1 2 6 结论 药材含量符合药典规定 1 3 黄连药材的研究 1 2 复方土贝母泡腾片的制备工艺及质量标准研究 1 3 1 仪器与试剂 W a t e r s 2 6 9 0 高效液相色谱仪 W a t e r s 9 9 6 二极管阵列检测器 T G L 一1 6 G 离心机 上 海安亭科学仪器厂 H 6 6 0 2 5 T 超声清洗机 无锡超声电子设备厂 F W l 3 5 型倾斜式 高速万能粉碎机 天津市泰斯特仪器有限公司 M i l l e n n i u m 3 2 色谱工作站D K 9 8 I I 型电热恒温水浴锅 天津市泰斯特仪器有限公司 B P 2 11 D 型十万分之一天平 德 国赛多利斯公司 盐酸小檗碱对照品 由中国药品生物制品鉴定所提供 供含量测 定用 批号 7 1 3 9 0 0 3 甲醇为色谱纯 水为双蒸水 其余试剂均为分析纯 1 3 2 色谱条件 流动相乙腈 0 0 5 m o l 1 磷酸二氢钠 磷酸调P H 至3 7 0 3 0 检测波长 3 5 0 r m 流速l m l m i n 温度2 5 1 3 3 对照品溶液的制备 精密称小檗碱对照品5 8 3 m g 置5 0 m l 容量瓶中 加甲醇溶液使溶解并稀释至刻 度 摇匀即得 浓度为0 1 1 6 6 m g m 1 1 3 4 供试品溶液的制备 取黄连粉末约O 1 9 精密称定 向其中加入甲醇l O O m l 称重 超声4 0 m i n 冷 却后补重 过滤 取续滤液离心 备用 1 3 5 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1 0 1 注入液相色谱仪 测定 结果 见表1 1 表格 黄连药材含量测定结果 名称称墙值g峰面积含革 m g 含量 样1 0 1 1 1 02 8 2 0 0 2 35 5 1 74 9 7 样2 0 1 1 7 2 12 9 6 7 2 9 15 8 1 44 9 6 1 3 6 结论 药材含量符合药典规定 1 4 血竭 1 4 1 仪器 j 试剂 W a t e r s 2 6 9 0 高效液相色谱仪 W a t e r s 9 9 6 二极管阵列检测器 T G L 1 6 G 离心机 上 陕西中医学院2 0 0 9 届硕士学位论丈 海安亭科学仪器厂 H 6 6 0 2 5 T 超声清洗机 无锡超声电子设备厂 F W l 3 5 型倾斜式 高速万能粉碎机 天津市泰斯特仪器有限公司 M i l l e n n i u m 3 2 色谱工作站 D K 9 8 I I 型电热恒温水浴锅 天津市泰斯特仪器有限公司 B P 2 11 D 型十万分之一天平 德 国赛多利斯公司 血竭素高氯酸盐对照品 由中国药品生物制品鉴定所提供 供含 量测定用 批号 l1 0 8 1 1 2 0 0 7 0 4 甲醇为色涪纯 水为双蒸水 其余试剂均为分析 纯 1 4 2 色谱条件 流动相乙腈 0 0 5 m o l L 磷酸二氢钠 5 0 5 0 检测波长4 4 0 n m 1 4 3 对照品溶液的制各 精密称取血竭素高氯酸盐对照品8 8 7 m g 置5 0 m l 棕色量瓶中 加3 磷酸甲醇溶 液使溶解并稀释至刻度 摇匀 精密量取2 m l 置l O m l 棕色量瓶中 加甲醇至刻度 摇匀 即得 浓度为0 0 3 5 4 8 m g m 1 血竭素重量 血竭素高氯酸盐重量 1 3 7 7 1 4 4 供试品溶液的制备 取本品适量 研细 精密称取0 0 5 0 1 5 9 置具塞试管中 精密加入3 磷酸甲 醇溶液l O m l 密塞 振摇3 分钟 滤过 精密量取续滤液I m l 置5 m l 棕色量瓶中 加甲醇至刻度 摇匀 即得 1 4 5 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各l O g l 注入液相色谱仪 测定 结果 见表1 2 表格12 血竭药材含量测定结果 1 4 6 结论 药材含量符合药典规定 2 提取 纯化工艺的研究 剂型的选择 本方是根据临床经验方制成 临床效果显著 但由卡原洗剂携带不便 并且使用 剂量不准确 作用部位不确切 不便于保存等不利因素 特将其制成中药泡腾片来提 1 4 复方土贝母泡腾片的制备工艺及质量标准研究 高原制剂疗效 工艺路线设计依据 本方由土贝母 蛇床子 黄连 血竭4 昧药组成 其中土贝母的有效部位为土 贝母总皂苷 前期采用回流提取 爆沸现象较严重 且不易控制 因此此处采用其 他方法提取 蛇床子的有效部位为总香豆素 黄连的有效部位为总生物碱类 采用 共提发有利于成分的溶出 参考相关报道采用不同浓度乙醇回流提取 血竭由于本 身为提取物 因此不再提取 直接粉碎入药制剂 工艺路线的设计如图2 图表2 泡腾片制备工艺流程图 2 1 土贝母的提取工艺的研究 2 1 1 仪器与试剂 U V 2 6 5 F W 紫外分光光度计 日本岛津公司 B P 2 1 1 D 型十万分之一分析天平 德 国赛多利斯公司 W a t e r s 2 6 9 0 高效液相色谱仪 W a t e r s 9 9 6 二极管阵列检测器 T G L 1 6 G 离心机 七海安亭科学仪器厂 H 6 6 0 2 5 T 超声清洗机 无锡超声电子设备厂 F W l 3 5 型倾斜式高速万能粉碎机 天津市泰斯特仪器有限公司 M i l l e n n i u m 3 2 色谱 工作站 D 2 一lB c 型真空干燥箱 天津市泰斯特仪器有限公司 S I l B I l l 型循环水式多 用真空泵 郑州长城科工贸有限公司 C S l O lI 型电热鼓风干燥箱 重庆试验设备厂 1 5 陕西中医学院2 0 0 9 届硕士学位论文 R E 5 2 A 型旋转蒸发器 上海亚莱生化仪器厂 D K 9 8 一I I 型电热恒温水浴锅 天津市 泰斯特仪器有限公司 土贝母苷甲对照品 由中国药品生物制品鉴定所提供 供含 量测定用 批号 1 1 1 5 3 6 2 0 0 3 0 4 土贝母苷甲对照品 自制9 8 5 甲醇为色谱 纯 水为纯化水 其余试剂均为分析纯 2 1 2 对照品溶液的制各 土贝母总皂苷测量对照品溶液的制各 取减压干燥至恒重的土贝母苷甲对照品 自制9 8 5 2 6 1 3 m g 精密称定 置 2 5 m l 量瓶中 以甲醇溶解并稀释至刻度 摇匀 即得 每l m l 中含土贝母苷甲 1 0 4 5 2 m g 土贝母苷甲含量测定对照品溶液的配置 取减压干燥至恒重的土贝母苷甲对照品8 2 6 m g 精密称定 置l O m l 量瓶中 以 甲醇溶解并稀释至刻度 摇匀 即得 每l m l 中含土贝母苷甲0 8 2 6 m g 2 1 3 供试品溶液的制各 精密吸取一定量提取液 水浴蒸至无醇味 加水l O m l 移置分液漏斗中 用水 饱和的正丁醇提取4 次 2 0 m l 2 0 m l l O m l l O m l 合并正丁醇液 蒸干 残渣加 甲醇溶解 转移至5 m l 量瓶中 加甲醇至刻度 摇匀 即得 2 1 4 总皂苷分光光度含量测定方法 精密吸取一定量供试品溶液于l O m l 具塞试管中 7 5 水浴烘干 向其中加入4 香草醛一冰醋酸0 2 m l 再加高氯酸0 6 m l 于6 5 水浴显色2 5 m i n 流水冷却至室温 后加入4 m l 冰醋酸稀释 摇匀 以相应试剂为空白 放置1 5 m i n 在分光光度计4 6 9 n m 处测量吸收度 并计算含量 2 1 5 土贝母苷甲含量测定方法 取供一定量供试品溶液 离心后与标准品溶液分别注入液相色谱仪 流动相为甲 醇一水 6 5 3 5 流速l m l m i n 温度2 5 C 在2 1 4 n m 处测定峰面积 计算含量 2 1 6 提取方法的选择 本实验以土贝母苷甲和 贝母总皂苷为考察指标 分别比较冷浸法 温浸法 超 声法 渗漉法对药材提取效果的影响 具体实验如下 冷浸法 称取土贝母粉未 过4 0 目筛 约5 0 9 于1 0 0 0 m l 锥形瓶中 加8 倍龟 7 0 乙醇 浸泡l 小时1 5 分 其中每1 5 m i n 震摇 次 过滤 定容至5 0 0 m l 温浸法 称取土贝母粉末 过4 0 目筛 约5 0 9 于1 0 0 0 m l 锥形瓶中 加8 倍量 1 6 复方土贝母泡腾片的制备工艺及质量标准研究 7 0 乙醇 浸泡1 5 分钟 再置水浴6 0 中浸泡l 小时 其中每1 5 m i n 震摇一次 过 滤 定容至5 0 0 m l 超声法 称取土贝母粉末 过4 0 目筛 约5 0 9 于1 0 0 0 m l 锥形瓶中 加8 倍量 7 0 乙醇 浸泡1 5 m i n 再超声1 小时 过滤 定容至5 0 0 m l 渗漉法 称取土贝母粉术 过4 0 目筛 约5 0 9 于1 0 0 0 m l 锥形瓶中 加8 倍量 7 0 乙醇 浸泡1 5 m i n 以7 m l m i n 的速度渗漉 过滤 定容至5 0 0 m l 精密吸取一定量的各溶液 按照供试品溶液制备项下的方法处理 测量其中土贝 母总皂苷和土贝母苷甲含量 结果如表1 3 表格13 不同提取方法提取结果 由以上结果可知 渗漉提取法对总皂苷和土贝母苷甲的提取效果优于其他方法 因此本实验采用渗漉法进行提取 2 1 7 正交实验优选渗漉提取条件 参考相关文献 本实验采用乙醇渗漉法提取 为了进一步优化提取条件 使得有 效成分能够更大限度的被提出 特采用正交实验进行条件筛选 对提取中乙醇浓度 A 溶剂加入量 B 渗漉流速 C 颗粒粒度 D 为考察因素 以土贝母苷甲含 量 r a g 土贝母总皂苷含量 m g 干膏得率 g 为考察指标 设计三个水平 应 用L 9 3 4 正交表安排试验 其因素水平见表1 4 正交试验方案及结果见表1 5 方 差分析见表1 6 1 7 1 8 表格1 4 土贝母提取因素水平表 1 7 陕西中医学院2 0 0 9 届硕士学位论文 F 表格1 5 土贝母提取正交设计表及结果 A B C D 误差 9 2 5 0 6 6 7 1 6 0 5 6 0 0 0 1 2 0 8 0 6 6 7 1 7 2 6 6 7 1 7 2 6 7 2 2 2 2 2 5 3 5 7 5 9 2 9 8 8 6 9 9 6 5 1 0 0 0 1 9 0 0 0 1 9 0 0 0 1 9 0 0 0 1 9 0 0 0 F o 2 2 1 9 0 0 F o O l 2 2 9 9 0 0 1 8 复方土贝母泡腾片的制备工艺及质量标准研究 表格1 8 土贝母浸膏方差分析表 F o 2 2 1 9 0 0 F o o l 2 2 9 9 0 0 交试验结果分析 由直观分析 表 可知 各因素对土贝母苷甲提取实验结果影响的重要性为 B C A D 对土贝母总皂苷提取结果影响的重要性为A C B D 对干膏收量结果影响 的重要性为A C B D 由方差分析 表 可知 因素A B C 对苷甲的影响都有显著 性意义 而因素A 对总皂苷提取的影响有显著性差异 而因素A 对干膏收量的影响有 显著性差异 结合三因素对苷甲和总皂苷的提取应尽可能大 而收得的干膏量应尽可 能小 因此本实验选取A B C D 即过2 0 目筛土贝母粉木加7 倍量7 0 乙醇 以3 m l m i n 流速渗漉为最佳提取条件条件 2 1 8 士贝母渗漉曲线 按照上述正交实验的结果 称取l O O g 过2 0 目筛土贝母粉末 加1 5 0 0 97 0 乙醇 以 3 m l m i n 流速渗漉 每6 0 m l 于l O O m l 锥形瓶中收集一次 吸取一定量按照供试品溶 液的制备方法制备 测量其中土贝母苷甲和总皂苷含量 结果见表1 9 2 0 图3 4 6 0 0 5 0 0 4 0 0 凹 r 3 0 0 蚓 缸2 0 0 1 0 0 O l234567891 0l l1 2j 31 41 51 6 取样点 图表3 土贝母苷甲渗漉曲线图 1 9 陕西中医学院2 0 0 9 届硕士学位论丈 表格1 9 土贝母苷甲渗漉曲线表 3 0 0 0 2 5 0 0 2 0 0 0 C 1 5 0 0 棚 如1 0 0 0 5 0 0 0 123456 7 891 0 1 11 2 1 31 4 1 51 6 取样点 图表4 土贝母总皂苷渗漉曲线图 表格2 0 土贝母总皂苷渗漉曲线表 结果表明 土贝母苷甲 土贝母总皂苷均在7 倍量溶剂时可提取完全 2 1 9 验证试验 为了考察正交试验筛选出的最佳提取工艺的重现性 特进行验证试验 称取药材 复方土贝母泡腾片的制备工艺及质量标准研究 l O O g 共3 份 按最佳工艺进行实验 测定土贝母苷甲和总皂苷含量 结果见表2 1 表格2 1 土贝母提取方法验证试验 验证试验结果与正交试验结果基本吻合 说明正交实验筛选出的提取工艺条件合 理 可行 重现性好 2 2 黄连 蛇床子的提取工艺条件优选 2 2 1 仪器与试剂 B P 2 11 D 十万分之一分析天平 德国赛多利斯公司 W a t e r s 2 6 9 0 高效液相色谱仪 W a t e r s 9 9 6 二极管阵列检测器 T G L 16 G 离心机 上海安亭科学仪器厂 H 6 6 0 2 5 T 超 声清洗机 无锡超声电子设备厂 F w l 3 5 型倾斜式高速万能粉碎机 天津市泰斯特 仪器有限公司 M i l l e n n i u m 3 2 色谱工作站 D 2 1 B C 型真空干燥箱 天津市泰斯特仪 器有限公司 S H B I I I 型循环水式多用真空泵 郑州长城科工贸有限公司 C S I O I I 型电热鼓风干燥箱 重庆试验设备厂 R E 一5 2 A 型旋转蒸发器 上海亚莱生化仪器厂 D K 9 8 I I 型电热恒温水浴锅 天津市泰斯特仪器有限公司 小檗碱对照品对照品 由 中国药品生物制品鉴定所提供 供含量测定用 批号 7 1 3 9 0 0 3 蛇床子素对照品 对照品 由中国药品生物制品鉴定所提供 供含量测定用 批号 0 8 2 2 2 0 0 2 0 4 甲 醇为色谱纯 水为纯化水 其余试剂均为分析纯 2 2 2 对照品溶液的制各 小檗碱对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品5 8 3 m g 置5 0 r a l 容量瓶中 加甲醇溶液使溶解并稀 释至刻度 摇匀即得 浓度为0 1 1 6 6 m g m 1 蛇床子素对照品溶液的制备 精密称取蛇床子素对照品适鼍 加无水乙醇制成浓度为0 0 7 5 5 2 m g m l 的溶液 2 2 3 供试品溶液的制备 测小檗碱供试品 精密吸取已定容好的提取液适鼍于l O m I 容量瓶中 加甲醇至刻度 摇匀 离心 备用 2 1 陕西中医学院2 0 0 9 届硕士学位论文 测蛇床子素供试品 精密吸取已定容好的提取液适量于l O m l 容量瓶中 加无水乙醇至刻度 摇匀 离心 备用 2 2 4 小檗碱含量测定方法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各l O g l 注入液相色谱仪 以乙腈 0 0 5 m o l 1 磷酸二氢钠