高效液相色谱分析混合样品中苯和甲苯的含量.docVIP

【实验题目】高效液相色谱分析混合样品中苯和甲苯的含量【实验目的】1、掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法2、了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术【实验原理】高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动是，经过反复多次的吸附解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。【实验仪器和试剂】（1）仪器 LC-20AT液相色谱仪；微量注射器 10L、1L各1支（2）试剂苯标准溶液：2L/mL；甲苯标准溶液：2L/mL；苯、甲苯标准溶液：10L/mL；苯、甲苯混合样品；甲醇（色谱纯）。【实验内容与步骤】1、选择色谱条件：控制流速为1.0mL/min；检测波长254nm；先调配比系数为80%。在设定色谱条件下，用微量注射器注入10L/mL的苯、甲苯标准溶液5L(注射器用甲醇润洗35遍)，观察锋面积和保留时间 ；再改变配比系数，设为85%，再用微量注射器注入10L/mL的苯、甲苯标准溶液5L，对比观察锋面积和保留时间，确定使用85%配比系数为最佳条件。2、苯，甲苯定性分析用微量注射器分别注入2L/mL的苯标准溶液5L，和2L/mL的甲苯标准溶液5L，注射器垂直插入进样口，插到不能插，逆时针转动六通阀，注入液体，再将六通阀转回原位。这是开始记录数据了。观察记录保留时间，确定苯和甲苯的峰。3苯、甲苯定量分析在最佳条件下，用微量注射器分别进样5L 的1L/mL、2L/mL、4L/mL、10L/mL、2L/mL、4L/mL、10L/mL苯和甲苯的标准溶液，注射器垂直插入进样口，插到不能插，逆时针转动六通阀，注入液体，再将六通阀转回原位，这时开始记录数据。再按上述方法测待测样品的峰面积，根据峰面积在工作曲线上查出苯和甲苯待侧液的浓度，并计算试样中苯和甲苯的含量。【实验数据与分析】一、色谱条件优化80%85%二、定性分析苯甲苯样品苯甲苯保留时间3.1803.881三、 定量分析苯、甲苯混合标准溶液浓度分别为：1 ul/ml, 2 ul/ml, 5ul/ml, 10 ul/ml。10 ul/ml1ul/ml苯甲苯浓度峰面积浓度峰面积1 L/mL1642901 L/mL3582562 L/mL3474342 L/mL6646915 L/mL8009395 L/mL148294510 L/mL159664510 L/mL2657726Y = aX + ba = 157926.9b = 16656.24R2 = 0.9997073R = 0.9998536Y = aX + ba = 253945.7b = 148148.8R2 = 0.9977508R = 0.9988748四、 未知样品浓度未知样品苯甲苯浓度4.4 L/mL4.2 L/mL【实验问题与讨论】1、在选择溶剂时，要通过反复实验配比系数来达到最佳条件，首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，