07姜炭尿液31.doc

青岛腾龙公司重水10支0.5ml=40元重水含TSP25g=240元核磁管100支=1200元华鑫叠氮化钠100g=49元精密pH试纸1包=3元省中医院生理盐水1瓶=4.5元肝素钠10支=114.8元尿液图谱分析如下图所示，四组大鼠尿液的1H-NMR谱图，空白组和模型组的波峰有明显的区别，灌药干姜和姜炭之后，体内的成分变化更为显著，部分内源性成分在灌药之后出现了成分峰值的升高，具体鉴定出来的有显著性内源性变化的物质有如下这些：甲酸，色氨酸，马尿酸，蔗糖，乳酸，肌酸，丙三醇，甘氨酸 ，牛磺酸，氮氧三甲胺，谷氨酸，柠檬酸，糖蛋白，丙氨酸，亮氨酸等，这些物质的化学位移以及相对应峰的积分情况如下表所示：物质化学位移空白组积分模型组积分姜炭组积分n积分脂蛋白0.880.7789910.0490.4079440.2010.4437990.0693亮氨酸0.96dd0.8770050.0540.2757260.2470.2402110.0595缬氨酸1.040.4060420.0130.1942860.1100.1703740.0557脂质体1.240.6040230.0270.4592150.0830.5043280.06312丙氨酸1.480.6104810.0230.2878760.1350.314730.07318精胺1.80m0.5245580.0130.3871790.0970.8807490.14726乙酸1.92s0.5813510.0180.471150.1150.7405410.11629糖蛋白2.041.445980.0880.9834830.1601.083230.11932乙酰乙酸2.24s3.43s0.7509480.0220.4376290.0610.7452730.08437丙酮酸2.37s0.6300430.0100.4243630.1220.6650530.09140琥珀酸2.44s0.6644490.0120.4553980.0851.041810.17742谷氨酸2.48m0.3811410.0190.2959490.0931.000220.27643柠檬酸2.57d0.4304550.0160.3256440.1080.683280.18545,492.72d0.5504440.0130.5161580.0550.4455010.07549氮氧三甲胺3.29s0.734980.0081.118040.1450.7826160.36263苏氨酸3.41d，1.667550.0981.838610.5760.5630950.25466肌糖3.970.9052230.0281.014870.2800.840490.16680牛磺酸3.45t0.7515340.0091.070870.2060.7413390.12967甘氨酸3.53s0.6959230.0341.355470.3222.395660.47169丙三醇3.57，3.651.143140.0592.003350.1981.851820.47270,721.676520.0993.588060.5983.977410.28172葡萄糖3.89dd1.191590.0473.530850.4762.380380.44978肌酸4.05s,3.05s2.502570.1691.21930.6381.310790.29182,573.65960.2790.7543091.0031.063710.66257乳酸1.32d,4.13q0.8221290.0420.3849610.1400.425320.06914,840.5534660.0270.564240.1140.8890010.27784蔗糖4.17d，5.38d0.4840990.0330.2928050.1880.9900550.13685,1150.4771230.0221.847050.5610.5706380.369115氨基马尿酸7.67d0.0538490.0340.1162430.02780.1205370.057172马尿酸7.83dd,7.71tt，7.55,3.97d0.1346630.0230.1776170.0270.1430150.062176,173，1690.1095520.0290.07448130.0310.3568410.0411730.1208850.0320.2314930.0350.2310880.055169络氨酸7.19m0.2315310.0250.5352610.0360.5862120.183160色氨酸7.28，7.34，7.47,7.710.2314610.0260.3623750.1040.2568410.055162,164,167，1760.5562920.0130.4390850.0540.2512080.0651640.208790.0330.1666650.0260.2644180.046167根据上表所示，造模过后，大鼠尿液的内源性物质发生一些变化，其中成分含量升高的有：络氨酸，马尿酸，氨基马尿酸，葡萄糖，丙三醇，甘氨酸，牛磺酸，肌糖，苏氨酸，氮氧三甲胺。下降的有：色氨酸，乳酸，肌酸，柠檬酸，谷氨酸，丙酮酸，乙酰乙酸，脂质体，缬氨酸，亮氨酸，脂蛋白，琥珀酸，丙氨酸，精胺，乙酸。给姜炭之后，色氨酸，马尿酸，牛磺酸，肌糖，氮氧三甲胺，丙酮酸，乙酸乙酸等和空白组大鼠尿液的物质含量相近。造模过后，甘氨酸，牛磺酸的增加，使胆汁酸合成增加。葡萄糖的增加使糖异生或糖酵解过程增加。琥珀酸，丙酮酸等含量的下降，使柠檬酸循环受阻。给药之后，部分内源性物质的含量与空白组相近，说明给药过后有一定的治疗效果，这更好的研究姜炭止血的物质基础。代谢途径物质代谢途径物质代谢途径精胺亚精胺和精胺合成乳酸糖异生，丙酮酸代谢乙酸脂肪酸合成，丙酮酸代谢络氨酸络氨酸代谢乙酰乙酸脂肪酸合成，络氨酸代谢葡萄糖糖异生，糖酵解，乳糖降解与合成丙酮酸柠檬酸循环，糖异生蔗糖半乳糖代谢，淀粉和蔗糖代谢甘氨酸胆汁酸合成丙氨酸丙氨酸循环琥珀酸柠檬酸循环牛磺酸胆汁酸合成图1为空白组和模型组大鼠尿液的Score图，选择PLS模式进行分析。在SIMCA-P软件中，模型验证参数为R2、Q2。其中R2是所解释的模型差异，Q2是所预测模型差异。通常情况下，R2、Q2如果高于0.5即认为该模型稳定可靠。本研究中空白和模型组分析时，R2X=0.669，R2Y=0.987，Q2=0.932；研究四组大鼠尿液分析时，R2X=0.896，R2Y=0.98，Q2=0.964.说明用PLS模式分析法建立的模型具有较高稳定性，且预测能力达到93.2%，用PLS法进行模式识别效果良好。图1，空白组和模型组无交叉重叠部分，且各个样品均为超出95%区域（图中椭圆形区域），说明造模成功。 图1 空白组和模型组的Score图：空白组，7-12模型组 图2 四组大鼠尿液的Score图：空白组，模型组，干姜组，姜炭组图2为四组大鼠尿液的Score图。图中黑色方框为空白组，红色圆点为模型组，蓝色星点为干姜组，绿色圆点为姜炭组，可以从图中看出，干姜组部分还重叠在模型组中，而姜炭组和模型组完全区分开，说明姜炭对大鼠虚寒型出血是有一定的治疗作用的。图3 四组大鼠尿液的Loading图，方框内的为VIP1的成分：上图为PLS-DA处理得到的Loading图，下图为OPLS-DA处理得到的Loading图图4是四组大鼠尿液的Loading图，图中红色方框圈住的为选取VIP1成分，上图为PLD直接处理得到的结果图，下图是经过OPLS处理后得出的Loading图。经分析，这些成分为虚寒型出血证在大鼠体内变化较显著的成分，定义为此模型的生物标志物。 图4 四组大鼠尿液的 VIP1图：上图为VIP1所对应的VIP