生化分析仪应用秘笈(仪器应用篇2)-7.doc

生化分析仪应用秘笈41如何设定奥林巴斯带样品空白的TBIL/DBIL？答：按以下六步设定实验参数：首先，在Parameter-Common Test Parameter-Test Name编TBIL与DBIL的实验名称称，然后在91号与92号编TBILb与DBILb（总胆红素与直接胆红素的空白实验）其次，在Parameter-Specific Test Parameter中，编辑TBIL与91TBILb的参数（详见试剂盒内的说明书），DBIL与92DBILb的参数。请注意TBIL与91TBILb的参数要完全一样，DBIL与92DBILb的参数要完全一样。Parameter-Inter-Related Tests-Sample Blank中，选Color Test（颜色实验）为TBIL与DBIL，Blank Test空白实验为91TBILb与DBILb。Parameter-Calibration-Calibration Specific中，选TBIL与DBIL为AB定标方式，91TBILb与92DBILb为MB定标方式，Factor为1.0000。设试剂位：TBIL/DBIL为红盖，TBILb/DBILb为白盖，共设定了四个试剂位。User-Calibration中，TBIL与DBIL两点定标，TBILb与DBILb空白定标。42如何在AU400/600/640仪器实验自动重做？答：.Parameter-System-System中：Routine Test Requsition由SequentialRack No; Auto/Standard Repeat:由StanardAuto。在Online参数中： 改成 Batch-None-Batch-None。报警限确定（仅供参考）：见表7。重做规则以及相关实验：Parameter-Repeat Parameter-Repeat Common中设置：Repeat Normal or Mode: # ; ? ; * ; ! ; G ; P ; TDilution or Mode: ; $ ; D ; B ; & ; Z ; F相关试验：ALBTP；DBILTBIL；CKMBCK；TGLDL。表7：各项目建议报警限（仅供参考）国际单位序号项目报警范围序号项目报警范围1ALT2 200017GLU2.0 50.02AST2 200018UA20 10003TP20 12019Ca1.5 104ALB10 8020Phos0.4 10.05A/G0.5 3.021Mg0.4 5.06TBIL3 60022Fe5.0 100.07DBIL2 40023APOA10.2 3.08ALP10 200024APOB0.2 3.09GGT2 100025CHO2.0 25.010LDH30 300026TG0.2 10.011HBDH30 300027HDL0.2 10.012CK10 300028LDL1.0 20.013CKMB2 100029K1.0 10.014AMYL10 350030Na70.0 20015UREA1.0 80.031Cl70.0 140.016CREA20 500032CO2CP5.0 50.043标本的某一项或几项的结果是零或负数，复查后正常，其它标本的结果和质控结果均正常，可能是什么原因？答：最常见的可能是血清表面有气泡。如果是AU2700，也可能是试剂倒的过满（试剂瓶在高速旋转中出现气泡，导致没有吸到试剂），还有一种可能是试剂瓶的位置不正，试剂针碰到了试剂瓶口侧壁而造成没有吸到试剂。44如何检查清洗剂的浓度？答：取稀释好的用于冲洗比色杯与搅拌棒的清洗液测定Na离子，其浓度应在2535mmol/L.45Olympus生化分析仪可以做前带检查吗？答：可以，并且有三种检查方式，详见Parameter-Special-Datacheck Parameter。通常是一些免疫项目，比如：IgG。Olympus的TG试剂就有第一种检查法。我们发现国内的葡萄糖氧化酶法的GLU也有此现象，现已经成功克服。46何时应更换光源灯泡？答：光电校正数据（Photocal Data）：任意波长100的吸光度超过1.7000或低于0.01；0的数据（暗电流）超过-525当出现“Lamp Dark”的报警时（有时出现Lamp Dark是由于冲洗头堵塞）速率法的很多项目尤其是340nm波长的项目出现“”的报警标志；反应曲线出现波浪样的改变（其它的仪器称为非线性）。47样品针稍稍有些堵，那些项目最先受影响（重复性不好）？答：可能有很多表现形式，最为常见的就是低样品量的项目重复性不好，比如：ALB、GLU。相反一些样品量较大的项目如ALT、AST、GGT受的影响较小，这也可以从定标追踪中发现（Calibration Trace）中发现：此项目标准液的吸光度比正常情况下变低，因数值增大。48如何判断水的质量？答：此方法不一定科学，仅供参考：取一只一次性的塑料试管，加一毫升左右的镁（二甲苯胺兰法）试剂，然后加一两滴水，5分钟后观察有无变成红色，如变成红色表明所用的水中含有离子。49水有问题哪些项目最先受影响？答：以下项目对水最为敏感：钙（Ca）、镁（Mg）、铁（Iron/Fe）。如果其它项目都好，只有以上这些项目不好，应分析水的质量，判断方法详见第53问。50清洗剂出问题，那些项目受影响？答：按通常经验，C反应蛋白（CRP）、抗链O（ASO）和铁蛋白这类乳胶增强比浊法的实验最为敏感。51冲洗水的温度有问题（通常是偏低），什么项目受影响？答：LDH结果明显偏低，其它一些受影响的酶是ALP、ALT、AMY等等。52按厂家要求，多长时间应更换蠕动泵管？答：按厂家要求是每三个月更换，因为三个月后该蠕动泵管变长。53搅拌棒有问题，结果有什么规律？什么项目最容易受影响？答：搅拌棒有问题每三个结果出现一个有问题的数据，最敏感的项目为铁（Iron/Fe）与不饱合铁（UIBC）。54经常发现某一种试剂用的特别快，比如早上检查有100个TP试剂，做四、五十个肝功后仪器就报警没有试剂了，可能是什么原因？答：在P-Y-A中，最下面是LIH Reagent Test Name：您一定是选定的此项目，它的意义是，LIH的测定与此项目共用一瓶试剂，但这个地方的误选，仪器不会了生错误而吸此项目的试剂，在另外一个画面P-Y-C（Round）中，LIH Measure：中默认是“Selected”，被不小心改成了“ALL”，也就是说您让仪器每个标本都做LIH（血清信息），用的是您所选定的试剂。55新换了一个试剂，有反应曲线、因数是正确的、方法学、读点、波长均无问题，结果是“0”，为什么？答：在参数中Correction Factor A常规下是：1.0000，不小心被改为了0。56新换了一个厂家的肌酐试剂，重新定标后，结果均为1500多，是何种原因？ 答：在参数中Correction Factor B常规下是：0.0000，不小心被改为了1500。57新设定一个计算实验后，仪器不能正常工作，在退出时显示“LIH Reagent Test No.Calculated Test No. Miss Match”,是何原因？答：在P-Y-A中，最下面是LIH Reagent Test Name：您一定是选定的此项目，这个地方的默认为96：LIH。58新设定一个计算实验后，仪器不能正常工作，在退出时显示“Total Sample:Item”,是何原因？答：在P-I中，SV（标本量）+DIL VOL（吐水量）+R1（试剂I）+DIL VOL（吐水量）+R2（试剂II）+DIL VOL（吐水量）；在AU400/600/640应在150-550微升之间，在AU2700/5400应在120-440微升之间。59新设定一个计算实验后，仪器不能正常工作，在退出时显示“R1+Dilution Volume:Item”,是何原因？答：在P-I中，R1（试剂I）+DIL VOL（吐水量）在AU400/600/640应小于300微升，AU2700/5400应小于250微升。60新设定一个计算实验后，仪器不能正常工作，在退出时显示“Number of Muti:Item”,是何原因？答：在P-Q-I的质控参数编辑中，一个项目只能有两个“Muti”，表示用这两个项目画二维质控图（Twin Plot），多了或者少了仪器都不能正常工作。61血清磷的测定有时偏高1 倍以上，复查结果正常，为什么？答：交叉污染，例如仪器试剂针加完含磷酸盐的试剂（BG），再加磷试剂，当冲洗不完全时造成污染。解决方法：A.调整试验顺序，把磷项目放在前面，先测定即可避免污染。B.利用仪器本身提供的抗交叉污染程序，通过增加冲洗次数可避免污染 。有一家医院有这样的现象，最后经检查发现是冲洗头吸废液的管漏气造成的，更换后正常。62室内质控失控后怎么办？答：失控情况处理操作者在测定质控时，如发现质控数据违背了控制规则，应填写失控报告单，上交专业室主管（组长），由专业室主管（组长）做出是否发出与测定质控品相关的那批患者标本检验报告的决定。失控原因分析失控信号的出现受多种因素的影响，这些因素包括操作上的失误、试剂、校准物、质控品的失效，仪器维护不良以及采用的质控规则、控制限范围、一次测定的质控标本数等等。失控信号一旦出现就意味着与测定质控品相关的那批病人标本报告可能作废。此时，首先要尽量查明导致失控的原因，然后再随机挑选出一定比例（例如5%或10%）的患者标本进行重新测定，最后根据既定标准判断先前测定结果是否可接受，对失控做出恰当的判断。对判断为真失控的情况，应该在重做质控结果在控以后，对相应的所有失控患者标本进行重新测定。如失控信号被判断为假失控时，常规测定报告可以按原先测定结果发出，不必重做。当得到失控信号时，可以采用如下步骤去寻找原因：立即重测定同一质控品。此步是主要用以查明人为误差，每一步都认真仔细的操作，以查明失控的原因；另外，这一步还可以查出偶然误差，如是偶然误差，则重测的结果应在允许范围内（在控）。如果重测结果仍不在允许范围，则可以进行下一步操作。新开一瓶质控品，重测失控项目。如果新开的质控血清结果正常，那么原来那瓶质控血清可能过期或在室温放置时间过长而变质，或者被污染。如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。新开另一批质控品，重测失控项目。如果结果在控，说明前一批血清可能都有问题，检查它们的有效期和贮存环境，以查明问题所在。如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。进行仪器维护，重测失控项目。检查仪器状态，查明光源是否需要更换，比色杯是否需要清洗或更换？对仪器进行清洗等维护。另外还要检查试剂，此时可更换试剂以查明原因。如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。重新校准，重测失控项目。用新的校准液校准仪器，排除校准液的原因。请专家帮助。如果前五步都未能得到在控结果，那可能是仪器或试剂的原因，只有和仪器或试剂厂家联系请求他们的技术支援了。63临床生化分析之外的质控控制需要注意些什么？答：提到生化质量控制大家自然想到室内质控和室间质评这两个概念，室内质控是用质控品与临床样品一起测定，观察质控品的分析误差，建立一个较精密和敏感的控制程序，可及时发现因技术操作、试剂和仪器性能改变等引起的误差，使各项分析误差控制在允许范围之内，室间质评则是通过对统一发放的质控品进行测定评价实验室测定结果的准确度和可比性。近年来，自动生化分析仪的普遍应用，大大提高了临床生化分析的精密度，使分析的批内和批间变异明显下降，由于方法学的改进和标准品质量的提高，测定的准确度往往不是来自分析过程本身，而是来自分析过程之外，对之应该引起重视。下面就平时在工作中对临床生化分析过程之外的各环节进行质量控制的做法作一介绍。答：1 采血器械的标准化 长期以来我国临床生化采血没有统一的器械，有些单位使用经反复洗涤的玻璃试管，有些单位使用一次性塑料试管，使用中存在不少问题，如试管洗涤不净造成溶血或残存物质对测定的干扰；软质塑料试管采血，血液自然凝固析出血清时间延长影响测定等。近年来，许多单位逐步开始使用真空采血系统。由于真空采血系统带有安全管盖，并使用标准针头和硅化的真空管，可极大减少医务人员从采血、标本处理到血样测定全过程血样污染引起交叉感染的危险性，同时可在很大程度上减少体外溶血的发生和因此造成的检验结果的误差，使患者免受重新采血的痛苦，被美国全国临床实验室标准委员会（NCCLS）真空采血系统，其成本逐步下降，推广使用一次性真空采血系统采集临床生化标本是今后的方向。用普通无抗凝试管抽血，血清中不含外加化学物质，测定结果能较客观地反映血液中的物质水平，其缺点是，抽血后血液从凝固到血块收缩、血清析出测定需数十分钟，不适合急诊测定，而且血液离体后如果不能马上分离血细胞，容易造成血清中被检成份的改变，如葡萄糖酵解、酶活性降低、细胞中钾离子外溢等。有些单位使用为单项或部分检验项目测定设计的抗凝管，如草酸钾-氟化钠抗凝管，特别适用于葡萄糖常规和急诊的测定，但它对其它检验项目测定有明显的影响，此类抗凝管不能满足目前临床生化检验自动化要求一份血样作多项分析的需要。另外，品种繁多的抗凝管也给不熟悉检验工作的护理人员抽血带来不便，容易造成采血错误。真空分离胶采血管是一种较为理想的采血装置，利用促凝剂，约在15min左右使血液快速凝固，离心后呈现三层：血清-分离胶-血细胞，由于分离胶在中间把血清与血细胞阻隔，这样可以使血清成份稳定。我院目前采用一种通用型生化测定真空采血系统，利用抗凝剂和血液保护剂结合真空管技术制成，经初步的评价试验证明其对大部分生化测定结果无影响，对葡萄糖及酶类有保护作用，实现临床生化测定血样单一真空管采集，减少了护理人员采血的不便，适用于常规和急诊生化测定，也是一种较为理想的采血器械。 2 重视对护理人员标本采集和送检工作的指导 大部分生化测定标本采集是由临床护理人员完成的，而由于他们对检验科工作缺乏了解，容易发生血液采集、送检不符合要求，影响检验结果的准确性。下面是较常见的临床采血、运送不当影响测定结果的因素。2.1 采血体位和采血时间不当 有人比较过立位与卧位采血17个项目的检验结果，发现其中12个项目立位高于卧位，尤以TP、A1b、ALP、ALT增高为明显，因此要求临床统一卧位采血。血液脂浊可散射光线，对吸光度产生正向干扰，导致某些项目测定结果偏高。另一方面，在pH10以上的环境中，乳糜中的甘油三酯会逐步皂化而使血清变清，使许多比色法测定（如Ca、Cr、ALP、TP等）结果产生负误差。高蛋白饮食可使血清BUN、P、UA和血氨浓度增高。饮酒后采血可使乳酸、尿酸等增加。因此，要求除特殊检验项目或急诊外，一律早晨空腹采血。此外，严禁在输液的手臂上采血或在输液时采血，以免影响钾、钠、葡萄糖等项目的测定结果。2.2 标本采集不当造成溶血 溶血是临床生化检验中最常见的一种干扰和影响因素，其干扰机理有三种，一得血细胞高浓度组分逸出，使测定结果增高，如钾、镁、LDH、醛缩酶等；二是Hb对分光光度测定中吸光度的干扰，溶血能引起可见光谱的短波长处（300nm-500nm）测定吸光度明显增高，如溶血引起重氮单试剂法胆红素测定结果明显升高。三是细胞成分对化学反应的干扰，如Hb可竞争性地抑制胆红素与重氮试剂的偶氮反应，使J-G法胆红素测定结果偏低。溶血多由于采血步骤不规范，技术不熟练而导致，如抽血不顺利，抽血不下针头直接注入试管等。严重溶血标本原则上不能使用，应通知临床重新采血送检或者在报告单上注明溶血字样，提醒医生注意。血液放置时间过长 血液长时间放置会使葡萄糖、碳酸氢根测定结果降低，部分酶活性下降，AST、LDH活性、血钾增高，故标本采集后应尽快送检。针对上述常见的错误，我们采取为临床护理人员制定标准采集、送检操作规程；定期为护理人员讲授采血基本知识；遇到问题及时与护理人员沟通分析原因等措施，为提高生化标本质量起到很好的作用。3 标本处理的质量控制 检验科收到临床标本后，应尽快低速离心分离血浆/血清进行测定。45水浴10min，再3000r/min离心5min，即可使血清LDH、K+显著升高。自动生化分析仪的应用，使随即生化测定成为可能，但对因特别情况不能马上分析测定的标本，应分离血浆/血清，加塞4下保存。对血液标本外观的观察是判断标本质量最直观的方法，血浆/血清标本异常外观有脂浊、溶血一样，是引起测定误差的常见因素，胆红素的颜色对反应结果为黄色和红色化合物的比色分析有正向干扰，此可用样品空白或动力学法和双试剂消除。另外，胆红素不稳定，在碱性环境或强光线照射下，转变成胆绿素、胆褐色素而褪色，如用碱性苦味酸法测定肌酐时，黄疸标本经常会出现测定结果为负值，此时上述方法无法去除干扰。另外胆红素还有还原性，对Trinder反应有负干扰，如氧化酶法测定葡萄糖、胆固醇、甘油三酯、尿酸等。消除此类干扰有待方法改进。其它外观，如血细胞部分小于30%，且能排除贫血或血清颜色过浅，应考虑是否在输液的一侧抽血。服用某些药物（如土霉素、四环素、核黄素等）会使血液呈黄色。发现上述异常外观，应及时排查原因，分析可能对测定和结果的影响，必要时重新采集标本。许多自动生化分析仪可用原始管进行分析测定，其优点是可避免标本分离转移时搞错和防止交叉污染影响测定结果，但在放置标本时要认真核对编号，防止位置错误。另外，在用血清测定时要仔细观察血清层是否有纤维蛋白凝块以及血清层高度，血凝块和血清层过少（小于5mm）吸入血细胞会引起加样不足，有些仪器对之不报警，会导致测定结果错误。4 分析后的质量控制4.1 认真审核测定结果 生化分析的自动化，一方面减少了填写检验报告的误差，另一方面增加了对测定结果进行审核的要求，许多自动生化分析仪提供的中文报告软件具有对测定结果的审核功能，认真仔细地对每个测定结果进行分析和审核是发出正确检验报告的重要环节。审核结果主要是对异常结果的分析取舍，假性结果、酶类多项增高个别降低接近零值，往往提示酶活力过高导致酶反应底物耗尽，应检查反应进程曲线加以判断；葡萄糖、碳酸氢根过低，同时钾离子过高，往往是标本未经分离放置时间过长所致；LDH、AST、总蛋白升高，ALT或高不明显，GG、胆红素下降，往往提示标本严重溶血；过低值、负值的肌酐、尿酸结果往往提示黄疸血清标本；多项分析结果过低，往往提示标本稀释或由于标本中有纤维蛋白凝块、吸样针部分堵塞加样不足所致。对上述异常结果，要认真分析复查，必要时与临床取得联系，重新采血送检。另外，对于经常检查的病员要充分利用计算机的储存和查询功能，对比前后的测试结果，对某些急诊检验项目，如血钾、血糖、血钙等，遇到特别异常结果要与临床医师及时取得联系，以便对