十七 常用培养基配方.doc

十七 常用培养基配方17.1 营养琼脂培养基成分 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g氯化钠 5g琼脂 1520g蒸馏水 1000mL制法：将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2ML，校正PH7.27.4，加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装在三角锥瓶中，在121下高压灭菌15分钟。 17.2 乳糖胆盐发酵管培养基（单料） 成分蛋白胨 20g猪胆盐 5g乳糖 10g0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL 蒸馏水 1000ml PH7.4 制法将蛋白胨，胆盐及乳糖溶于水中，校正PH值，加入指示剂分装，每支管10ml，并放入一个小倒管（产气管），在115下高压灭菌15分钟。注：双料乳糖胆盐发酵管培养基除蒸馏水外，其他成分加倍。17.3 乳糖发酵管培养基（单料）成分蛋白胨 20g乳糖 10g0.04%溴甲酚紫水溶液 25ml 蒸馏水 1000mlPH7.4制法将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正PH，加入指示剂分装，每支管3ml，并放入一个小倒管（产生气），在115下高压灭菌15分钟。注：双料乳糖发酵管培养基除蒸馏水外，其他成分加倍。17.4 伊红美琼脂（EMB）培养基成分蛋白胨 10g乳糖 10g磷酸氢二钾 2g琼脂 2g2%伊红溶液 20ml0.65%美兰溶液 10 ml蒸馏水 1000mlPH7.1制法将蛋白胨，磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH，分装于三角锥瓶内，在121下高压灭菌15分钟后备用。临用时加入乳糖并加热熔化琼脂，冷却至5060，加入伊红和美蓝溶液摇匀，浇注平板。17.5 远藤氏培养基配方：蛋白栋 10.0g乳糖 10.0g磷酸氯二钾 3.5g亚硫酸氢钠 2.5g碱性品红 0.4g琼脂 10.0g蒸馏水 100ml制备：配料放入蒸馏水中，搅拌15分钟，使其溶解，分装到三角瓶或试管，121灭菌20分钟， 冷却后贮于暗处，最佳温度为48以保持浅粉红色。17.6 UBA培养基酵母浸膏 6.1g蛋白胨 15g番茄汁（244ml） 12.2g葡萄糖 16gK2HPO4 0.31gKH2PO4 03.1gMgSO7H2O 0.12gNaCl 0.006gFeSO47H2O 0.006gMnSO4H2O 0.006g琼脂12g蒸馏水 750ml啤酒 250g将上述配料加入水中，加热至沸，搅拌至完全溶解，趁热加入未脱气的啤酒，轻轻搅拌混合，用HCI或NaOH调pH为6.0+0.1，分装于三角瓶中，121蒸汽灭菌20min。待冷却后，放置在36培养24h小时备用。17.7 乳酸杆菌培养基UBA+ABP抑制剂溶液（UBA见前）ABP抑制剂溶液配料放线菌酮 0.1g溴甲酚绿 0.15g无离子水 80ml2-苯乙醇 20ml配制把溴甲酚绿放入50毫升水中，煮沸至完全溶解，把放线菌酮溶于30毫升水中，将两种溶液混合，分装于带螺旋盖的瓶中，每瓶20毫升，在121蒸汽灭菌10分钟，冷却后，每个瓶内加5毫升2-苯乙醇，并拧紧瓶盖。该溶液会分成两层，使用前须用力摇匀。17.8 KOT培养基配方胰朊酶蛋白胨 5.0g麦汁浸出生 2.5g酵母浸出物 2.5g肝浓缩物 1.0g麦芽糖 5.0g葡萄糖 5.0gL-苹果酸 0.5g吐温-80 1mlK2HPO4 0.5gMgSO47H2O 0.125gMnSO45H2O 0.025g盐酸半光氨酸 0.5g胞苷 0.2g胸苷 0.2g啤酒 800ml放线菌酮 100mlNaN3 50mg琼脂 20g蒸馏水至 100mlPH25.417.9 日本KL-2B培养基配方：胰蛋胨 20.0g麦汁浸生物 10.0g酵母浸出生 5.0g麦芽糖 10.0gK2HPO4 3.0g MgSO47H2O 1.0gMnSO45H2O 0.25g柠檬酸 2.75g吐温-80 100mgNaN3 50mg琼脂 20g蒸馏水至 1000mlPH5.217.10 MRS麦芽糖琼脂培养基没有一种单独的方法能够检测所有的乳酸细菌，这些细菌对各种糖的利用能力是有差别的，许多菌株能在好氧条件下在琼脂培养基上生长，而另一些菌株则更容易在厌氧条件下生长。下面列出的培养基，能检测出许多种的乳酸细菌。但是，这些培养基不是绝对的，使用者可根据自己的经验进行修正后采用。原理：液体样品培养在含有合适的不同种类琼脂培养基的培养皿中，计算活菌落数。麦芽糖 5.0g蛋白胨 10.0g牛肉浸膏粉 8.0g酵母浸出物 4.0g葡萄糖 20.0g吐温-80 1.0mlK2HPO4 2.0g醋酸钠 5.0g柠檬酸铵 2.0gMnSO45H2O 0.2gMgSO47H2O 0.05g琼脂 15g在蒸馏水中溶解，并定容至1L。用1.0NHCl或0.1NNaOH调至4.7。蒸汽灭菌121，20分钟。17.11 Ra-Ray培养基NBB培养基是德国进行啤酒有害菌检查常用培养基，正如大家所知德国在有害菌研究领域处于领先地位，所以很多文献中提到使用NBB培养基有必要讲清楚。NBB培养基是Prof.Back专门为检查啤酒有害菌而开发的。NBB培养基分三种，NBB-A（琼脂型）、NBB-B（试液型）、NBB-C（浓缩型），最近又推出NBB-Am，是在NBB-A的基础上开发的。NBB培养基是专利产品，由德国Doher公司制造销售。NBB-A适用于刷洗水、啤酒为样品的细菌检查。NBB-B适用于酵母（回收酵、培养酵母）的细菌检查。NBB-C适用于有酵母的混浊啤酒（发酵液、未过滤啤酒）。培养温度：25-28培养时间：严重污染样品，1天可以检出。污染轻微或生长缓慢的菌5天左右。培养条件：厌氧二氧化碳充气下。注：虽然NBB有很高的检出率，但由于样品过滤或残有空气都可能使Pectinatus菌、Megashaera菌不能检出。17.12 LMDA培养基 番茄汁固形物蛋白胨 2%泛酸钙 0.2%酵母浸膏 1%葡萄糖 1%碳酸钙 0.5%柠檬酸 0.11%磷酸氢二钾 0.05%磷酸二氢钾 0.05%硫酸镁 0.02%硫酸锰 0.001%氯化钠 0.001%硫酸铁 0.001%溴甲酚红绿 0.0022%吐温-80 0.05%放线菌酮 0.0007%琼脂 1.5%配制加水溶解，分装三角瓶，121蒸汽灭菌10分钟，冷却后，避光保存。17.13 日本Pectinatus属菌检出培养基 配方：蛋白胨 10.0g麦芽浸出物 8.0g酵母浸出物 4.0gK2HPO4 2.0gNaCl 5.0gMgSO47H2O 0.2gMnSO45H2O 0.05g吐温-80 1mlL-Cystine-HClCMonnhydrate 0.5gResazurin钠盐 1mgErythromycin 5mg琼脂 20g蒸馏水至 1000mlPH6.017.14 麦汁液体培养基取原麦汁（头滤麦汁），用单层滤纸过滤后，冷却至40以下。过滤后的原麦汁8001000ml中加一个蛋清，（加蛋清之前，往蛋清里加少许蒸馏水或麦汁充分搅匀，产沫为止，然后加入麦汁里）混匀。加热煮沸（最好间接加热）2030分钟，然后冷却至70左右后用双层滤纸过滤。把过滤后的麦汁冷却至20后，测糖度，然后稀释至糖度为12P。调整PH值为5.45.7，然后分装（试管加6ml，小三角锥瓶加50ml，中三解瓶加200ml），用牛皮纸包扎。在高压灭菌锅里110压力下，灭菌20分钟。17.15 麦汁固体培养基步骤同上调整PH值为5.45.7后，加1.52.0%的琼脂粉，加热（最好间接加热）溶化琼脂，分装，包扎。在高压灭菌锅里110下，灭菌20分钟，冷却至60左右后，摆斜面或倒平板。17.16 WLN琼脂培养基酵母浸膏 4.0g干酷素酮 5.0g葡萄糖 50.0g磷酸二氢钾 0.55g氯化钾 0.425 g氯化钙 0.124g氯化铁 0.0025g 硫酸镁 0.125g硫酸锰 0.0025g琼脂 20.0g溴甲酚绿 0.022g蒸馏水 1.0L上述组分除琼脂外溶解于蒸馏水中，调整溶液PH为5.5，加琼脂，很好混合，加热，使琼脂溶解，高压斧121蒸汽灭菌不少于15min，冷却至4045，分装于无菌培养皿中。17.17 YPD培养基配方：酵母浸出物 10g蛋白胨 20g葡萄糖 20g琼脂 20g蒸馏水 1000ml溶解后121灭菌15分钟，冷却，制成平皿固体培养基。17.18 TTC琼脂培养基溶液A：三苯基四唑氯2.0g磷酸缓冲液100.0ml（磷酸缓冲液浓度为0.134mol/L，PH7.2）（无水NaH2PO41.26g，无水Na2HPO41.16g加水溶解至100ml）