葡萄、香蕉的组织培养.doc

葡萄、香蕉的组织培养1香妃葡萄的快繁（1）材料与方法 供试材料于秋季在田间采集,沙藏后于春季在温室内水培,新梢长2 3cm时剪取茎尖和带芽茎段,在流水中冲洗2 3 小时后,用70%酒精浸泡30秒,再用0. 1%升汞处理78分钟,然后用无菌水冲洗34次,每次间隔5分钟左右,以洗净残留的升汞。在无菌条件下将材料接种到培养基中。初代诱导培养用MS做基本培养基。继代增殖和生根培养以1 /2MS为基本培养基。上述培养基中均加0. 5%琼脂。初代培养基中蔗糖为3%,继代培养基中为2%（以白砂糖替代蔗糖）。pH均调至5. 8。温度22 25,光强2000 lx光照12/d。瓶苗根长35cm时进行炼苗移栽。（2）结果 诱导培养：接种1周左右即有芽萌发。40天后在基本培养基中添加1. 0mg/LBA、不加IAA时萌芽数最多,萌芽数达15个，芽长5.1cm。继代增殖和生根：诱导出的芽接入1 /2MS附加IBA0. 2mg/L时,生根率和增殖系数最高 ，1个月后平均生根数47条、平均生根率94%、增殖系数5.2、平均根长3. 5 cm。 移栽：苗根长35cm时,将瓶移至温室,不揭瓶盖，1周后打开瓶口, 3天后用清水洗去根部培养基,将苗移至用0. 1%高锰酸钾消过毒的蛭石中,放入温室,其上再搭一塑料小拱棚,少浇水,天晴时适当搭帘遮荫,棚内相对湿度保持在85%左右,其间每隔10天左右浇1 次营养液,并逐渐揭帘揭棚,增加光照和通风。1个月后,当苗长出新根时,移至草炭沙土= 112的花盆内。室外气候适宜时进行大田移栽,移栽成活率达70%以上。2美人指葡萄组培（1）材料与方法 试材品种为美人指葡萄,9 月中旬至10 月初采取美人指葡萄带有冬芽的夏芽副梢,剪取距顶端35 节的茎段,采后立即去掉叶片，用自来水冲洗12 h 再用洗洁精稀释液洗涤枝条46 次，在无菌条件下用70 %酒精浸泡30 s ,用0. 1 %升汞溶液浸泡1618 min ,再用无菌水冲洗56 次,将枝条剪成带1 个冬芽的茎段, 长约12 cm ,接入初始诱导培养基中。当萌发的苗长到12 cm 时,接入增殖生根培养基中进行继代培养,当长到34 cm 时,再次进行继代或移栽。初始诱导、增殖生根基本培养基为B5 。培养基中均加入3 %蔗糖,0. 6 %琼脂,pH 6. 0 。培养条件为光照强度2 500 lx ,16 h /d,温度2527 。试管苗移栽前要练苗。苗高达瓶口,当试管苗根长达34 cm ,有34 枚正常叶片时,连同培养瓶转入日光温室内,开瓶在温室中自然光下炼苗37 d ,当从瓶口伸出油亮的叶片且幼茎呈淡红色时即可出瓶,然后在能调节温度的沙床上炼苗，阴天或傍晚,将培养瓶内的幼苗倒出,洗去根上附着的培养基,栽入沙床后,盖好临时塑料小拱棚。最初3 d ,小拱棚内温度保持的25 2 ,最高不超过30 ,最低不低于20 ,相对湿度保持在90 %95 %。光照为71031 104 lx ,夜间或阴天要人工补充光照,3 d 后,降低棚内湿度到70 %80 % ,光强逐渐增加到4 104 lx。67 d 后完全拆除临时小拱棚。最后进行温室营养钵炼苗,经沙培的合格苗,小心挖出,在空气湿度不低于70 % ,温度不高于2025 ,无直射光下,栽入肥沙腐熟有机肥110. 2 的营养钵中。栽于营养钵中的苗,扣小拱棚的最初几天,温度、湿度、光照的要求和管理同沙培苗。大田苗圃移栽。选疏松肥沃、排灌水方便、距温室较近、日照良好的地块做为苗圃地。按一般营养钵苗进行移栽及管理即可。移栽于苗圃地的幼苗应保证有3 个月的生长期,并及时打顶去副梢,促进枝芽成熟。（2）结果 最佳启动萌芽培养基：B5 + 6-BA 2. 0 mg/ L + IBA 0. 5 mg/ L + 3 %蔗糖+ 0. 6 %琼脂,pH 5. 86. 0 ,3d开始萌芽，平均3芽，10d后芽长1.8cm 最佳增殖生根培养基：B5 + IBA 0. 5 mg/ L + 3 %蔗糖+ 0. 6 %琼脂,pH 5. 86. 0，增殖率5.5，生根率达98 %。香蕉的组织培养1香蕉的组织培养（1）材料方法 台湾引入的香蕉品种。选果梳整齐、果实大小均匀、产量高、无病虫害症状的健康母株的吸芽（注：吸芽苗是从地下球茎上萌发、生长成苗的各类苗的总称，可以分为：褛衣芽，秋后春前发生的吸芽，是传统无性繁殖春植最好的种苗；红笋，春暖后露出地面的吸芽，因其色泽嫩红而得名，是3月至5月定植的常用种苗；隔山飞，收获后植株球茎上长出的吸芽；大叶芽，收获后的隔年旧球茎上抽出的吸芽，通常不宜用作种苗，。挖取吸芽时，宜稍靠近母株，在早春与秋季干旱季节采芽。从蕉园采取的吸芽用自来水冲洗干净，用不锈钢解剖刀切去吸芽的根和顶端，剥去外层，切成高3cm的圆柱体，在超净工作台上，用75%的酒精消毒2 min，再用0.1%的高汞消毒1520 min。消毒液应浸没圆柱体，并经常翻动圆柱体，以便充分灭菌。消毒后，立即用无菌水漂洗5 次，冲净消毒液。 初代培养：用解剖刀剥除外层叶鞘，留34cm 的基座，将基座十字形切成4 块，每块带有12 个芽原基，接入诱导培养基中进行初代培养，基本培养基MS+糖30g/L+琼脂6.0g/L，pH 调至5.8。继代培养：在继代繁殖中，为减弱顶端优势，促进基盘腋芽生长，转接时将丛生苗的大部分假茎叶切除，并将基部切成含有2-4 个芽的芽丛，转接到继代培养基中，基本培养基MS+糖30g/l+琼脂6.0g/L，pH 调至5.8，温度2528，光照1 0002 000lx，12 h/d，30 d后统计增殖率。壮苗生根培养：培养基为MS，经过3040 天的壮苗培养，然后转入生根培养基中，即MS +NAA0.1mg/l+糖25.0g/l +琼脂6.0g/L，培养2030 天即可转入营养杯或苗床进行炼苗。（2）结果 MS+6-BA4.0mgL+NAA0.2mg/L+糖30g/L+琼脂6.0g/L是最佳诱导培养基 MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.1-mg/L或MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.2mg/L都是适宜的增殖培养基，30 d后，增殖4-7倍，继代培养不应超过10 次，继代次数过多，常出现畸形苗和组培苗发生变异。2红蕉组培快繁 选用生势强健,挂果整齐,产量高的母株,挖取其刚露出地面的吸芽作为诱导外植体材料。剥除吸芽外面的叶鞘,用水冲洗干净,在无菌条件下用75 %酒精消毒30 s,再用0.17 %氯化汞消毒1520min,然后用无菌水冲洗7 8 次, 逐层剥去外层的叶鞘, 最后切成1cm 0.5cm 0.5cm大小的茎尖块,放在改良的MS + 6-BA4-6mg/L+ NAA 0.2mg/L + 3 %糖+ 卡拉胶3.8g/L的诱导培养基中,于2830 培养室中培养40-50d即可出芽。丛芽的继代增殖：用改良的MS + 6-BA 3-4mg/L+ 卡拉胶3.8g/L 的培养基进行继代增殖,在2830 、光照2 000lx 培养2025 天,即可继代增殖1 次,并可获得22.3 倍的增殖率。培养过程中光照应充分,每天光照时间不少于10 h,如无光照或光照不足,其假茎和叶柄的颜色会退淡、转绿,甚至变成白色,影响增殖率。一般继代培养不要超过12 代。 生根培养：经一段时间继代增殖,当芽长至有3-4 片叶、高约3cm 时,可转入改良的1/2 MS + IBA1mg/L+ AC（活性炭） 0.1 % + 3 %糖+卡拉胶3.8g/L的生根培养基中,在28-30 、光照2500lx 条件下培养25-30 天即可出瓶假植。 组培假植：假植苗采用拱形薄膜大棚栽培,大棚四周覆盖防虫网,里层为薄膜,外层为遮阳网,基质用肥土即可。种植前应先将基质淋透水,将苗根平展移栽,压实,浇足定根水。假植苗对水分要求较高,种植后10 天内每天浇水一次。之后采用干湿交替控制基质水分,高温、干燥时应开门通风,喷水降温、增湿。假植苗生长后期要适当控制水分。假植苗生长前期苗势较弱,对肥料要求不高,故可采用薄肥勤施、叶面追肥等,如喷施0.2 %磷酸二氢钾等,同时注意定期防病治虫,如每隔10-15 天喷施氧乐果1000倍液或百菌清1 000 倍液一次。小苗长至5-7 片新叶、假茎高20cm 时,即可出圃定植。出圃前掀开薄膜和遮阳网炼苗15-20 天,有利于大田种植成活。3龙溪米蕉组培（1）材料与方法 取田间无病虫害母株的吸芽苗, 用自来水冲洗干净, 切取1cm3 大小的茎尖, 先用70% 酒精浸泡30s, 再用0. 1% 升汞消毒10 15m in, 取出用无菌水冲洗5 6 次, 再切取0. 4 0. 6cm3大小的茎尖, 纵剖成二等份, 接入诱导培养基, 在弱光条件下, 291培养30d, 然后转入增殖培养基。以1/2M S 为基本培养基, 根据不同培养目的添加不同的激素成分(6 - BA、NAA ) , 蔗糖浓度为30g/L , 琼脂6g/L , pH5. 8。（2）结果 6- BA 浓度对不定芽诱导：6- BA 对外植体萌动起决定性作用，以6- BA 3mg/L的浓度较为理想，萌动时间30d，出芽率80。 不同激素配比对增殖率的影响：一定浓度范围内6- BA 和增殖率呈正相关。NAA 对芽的增殖没有促进作用,以6- BA 4 5mg/L 的浓度增殖率高,达2.38倍 生根培养与假植：增殖培养30d 左右, 芽高约3cm , 转入1/2M S+ NAA 0. 5mg/L + 活性炭0. 5 g/L 的生根培养基,温度271培养10 15d 就能长出2 3 条根,20d 左右将苗移至光照强度2000lx、自然光线充足的炼苗棚炼苗15 20d, 即可移入大棚营养袋假植。假植基质用去表层后的红土+ 10% 草木灰。假植时洗去培养基, 用千分之一的高锰酸钾浸根, 种完后浇透定根水, 大棚内保持适宜的温度和湿度, 成活率达95% 以上。4香蕉花序组培（1）材料方法 取台湾8号香蕉花序顶端8cm，在超净工作台用75酒精3min，用无菌水洗2次，去一端花端和苞叶，再用75酒精2min，用无菌水洗3次，两端各去4mm，余下部分纵切4块再横切成4mm4mm小块接入培养基，温度253，弱光培养，生根用光培养。（2）结果 芽诱导：将花轴小块接入MSBA4mg/LIBA0.5mg/L白沙糖4卡拉胶0.4，pH5.8-6.0，13d萌动,40d出芽。 污染率、出芽率与增殖倍数：出芽后第一次继代，污染率9%，出芽率80%。在一个继代周期内平均增殖1.83倍 生根培养：将7-10cm以上的芽转接至MSIBA0.2-1.0mg/L（或1/2MS大量元素IBA0.2-1.0mg/L）白沙糖4卡拉胶0.4，pH5.8-6.0，253，3周，均可生根成苗，平均达到6.1条根、3.2片叶/苗。 生根培养3周后就可炼苗2-3d移植于营养土中。室温度士 , 两种外植体接种至芽光培养, 把培养基上培养时, 采用光培养, 经巧一天便长成健壮的完整植株5 讨论香蕉属于芭蕉科(Musaceae) 芭蕉属(Musa) , 是世界第二大宗水果, 全世界有一百多个国家生产香蕉, 世界年产量约9.5亿吨, 世界交易额约43 亿美元。香蕉主产国有巴西、厄瓜多尔、印度、哥斯达黎加、洪都拉斯、菲律宾、墨西哥、韩国、委内瑞拉、巴拿马、哥伦比亚以及中国等。我国香蕉的主产区为广东、广西、海南、福建和云南等省或自治区。香蕉栽培品种多为三倍体, 具不育性和单性结实能力, 无性繁殖潜力大。自1960 年Cox 等首先开始长梗蕉的胚培养以来至20 世纪90 年代, 国内外有大量有关香蕉茎尖培养、花序轴培养用于快速繁殖以及脱毒苗生产的报道, 并大量用于实际生产。现在已能从香蕉的茎尖、花序轴切片、花序顶端分生组织、花丝、子房、幼胚、胚性愈伤组织、悬浮培养细胞、原生质体、转化细胞等的培养获得再生植株。香蕉组培快繁与传统吸芽繁殖相比,其优点是:能够迅速推广优良品种;繁殖系数高,周期短,不受季节限制,如一个优良单株单繁的无性系一年内可繁殖10万株苗以上;组培苗生长迅速,整齐,收获期一致,一般产量比传统繁殖增产15 %30 % ,有的高达50 % ,有利于集约化经营和商品化生产。 （1）外植体选择：当前快速繁殖中应用最普遍的是吸芽,花序的应用也已引起关注并进行了成功的探索。吸芽产生再生植株是通过芽的直接增殖进行增殖。以花序为外植体产生再生植株的在巨大的潜力和优势。首先花序作为外植体取材方便、易消毒、花序代替吸芽可有效降低污染率、易成苗、繁殖速度快和田间变异小。但当前实践中存在着体细胞胚的发生和分化不够理想等问题，尚有待于进一步探讨。 （2）外植体的灭菌材料先用自来水冲洗, 75% 酒精擦洗1 遍(数秒) , 再用0. 1% 的升汞溶液或或1%次氯酸钠溶液(加数滴吐温效果更好) 灭菌5m in。在超净工作台上用无菌水冲洗数次, 除去残留的消毒剂。 （3）用吸芽为外植体的培养基、培养条件及诱导：培养基。最常用的基本培养基为M S 培养基; 蔗糖一般为2% 或3% , 琼脂0. 7%-0. 8%。pH 5. 8。诱导及增殖的培养基常用的生长调节剂浓度和组合为: BA 1-5mg/L 或KT 0. 5- 1mg/L 单独使用; BA 或KT 与适量的NAA (0. 05- 1mg/L) 或IBA (0.5- 2mg/L ) 配合使用; 在前两种组合中添加适量的Ad (aden ine, 腺素) (4- 150mg/L )。在一般情况下单独使用BA 或KT 即可进行芽的分化和增殖, 并且随浓度升高而增殖系数增大, 但增殖系数与芽的质量往往成反比, 因而应选取合适的浓度水平(因品种而异不同的品种要求的激素种类及比例不同,因此对于不同品种的芽体增殖所要求最佳激素种类及浓度有必要进行试验)。添加少量的NAA 或IBA 有促进生长、提高芽的分化率的作用。但香蕉的生根对NAA 很敏感, 加入NAA很容易促进生根而影响增殖率。Ad 有利于培育壮苗；培养条件。培养温度多控制在25, 适当提高温度有利于香蕉试管苗的生长。一般光照时间为16h, 但也可用12h 光照或连续光照。光强一般为1000lx；芽的诱导。接种到培养基中7- 10d, 其体积增大1- 2 倍, 并开始转绿。再培养10 多d, 基部侧面产生一些微小白色突起, 随后突起逐渐增大形成芽。将这些芽切取下来(最好切除芽上部及周围苞叶以促进增殖) , 转接于增殖培养基(可用诱导培养基或略加改动) , 经15- 25d 后每个芽又可形成3- 10 个1. 5- 3cm 长的新芽。在芽长至2- 5cm (约25- 35d) 高时转移至生根培养基。在继代早期, 一般弱光培养以利芽分化, 而在中后期则增加光照强度以壮苗；长根成苗。将无根芽切下转至M S 加NAA 0. 1- 1mg/L (或配合IBA 0. 1- 0. 5 mg/L 或单独使用IBA 0. 5- 2mg/L ) 的生根培养基上培养。基本培养基可减半(如1/2M S)，生根阶段必须每天要有30005000 lx连续光照1216 小时。约2- 4周后, 即生根发育成完整植株。NAA 对香蕉生根有明显促进作用；移栽。当小植株长至2- 4 片叶时, 即可经炼苗后移栽于苗床，在一周内注意保湿遮荫, 成活后移至营养钵进一步壮苗。当苗高20- 30cm 时即可出圃移至大田。在此阶段还可浇施营养液(如White 大量元素) 以促进幼苗的生长。6花序轴切片培养 花序轴是常用的外植体, 花序轴培养的繁殖系数高于茎尖培养, 但其试管苗的变异性较大。取材: 取末端未结实的花序轴段10- 15cm 长, 经常规消毒后横切成2- 3mm 厚的薄片(也可再纵切成数片)。 接种和培养: 将花序轴接种于合适培养基诱导。一般基本培养基使用MS。蔗糖2- 3%，琼脂0. 7- 0. 8%，pH5. 8。在附加BA 2mg/L 、IAA 2mg/L 和CH200mg/L（水解酪蛋白） 的情况下, 在26-