VC(抗坏血酸)的检测.doc

VC（抗坏血酸）的检测仪器与试剂1、 仪器高相液相色谱仪（带紫外检测器）， 色谱数据工作站，色谱柱: XDB-C18 (4.6X250mm)，500uL平头微量注射器，0.45um的混合滤膜（水相滤膜）,超声波清洗器，流动相过滤器，真空泵，1000ml容量瓶1个，50ml容量瓶1个，25ml容量瓶1个，10ml容量瓶5个，1ml、5ml移液管各1支2、 试剂蒸馏水草酸：分析纯维生素C（抗坏血酸）对照品：中国药品生物制品检定所实验步骤准备工作1、 流动相的预处理 取1g草酸溶于1000ml容量瓶中，用0.45um的混合滤膜（水相滤膜）过滤后，装入流动相储液器中，用超声波清洗器脱气20-30分钟。2、样品前处理方法：准确称取样品50mg于50ml容量瓶中,加0.1草酸溶液溶解并定容至刻度,0.45m滤膜(混合滤膜或是水相滤膜）过滤，弃去初滤液，待测。3、标准样品制备：准确称取VC标准品75mg于25ml容量瓶中，加0.1草酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml于10ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，上机测定0.45m滤膜过滤，弃去初滤液，待测。高相液相色谱仪的开机1、 按仪器说明书依次打开高压输液泵、紫外检测器、智能型接口的电源2、 打开色谱工作站，建立一个运行方法，运行时间设为30min，设置检测波长：254nm，流速：1.0ml/min，柱温：25色谱条件 检测波长：254nm 流速：1.0ml/min 色谱柱:C18 4.6mm250mm,5m 流动相：0.1%草酸溶液 柱温：25 进样量：50L测定：取标准品溶液和样品溶液各50L注入高效液相色谱仪进行检测，以其标准溶液峰的保留时间为依据进行定性，以其峰面积计算被测试样中维生素C的含量。结果分析计算按下式计算 式中： X被测样品中维生素C含量（g/100g） A样被测样品的峰面积 m标对照品的质量（g） C标对照品的含量（%） V样样品稀释总体积（mL） A标对照品的峰面积 m样样品的质量（g） V标对照品稀释总体积(mL)结果表示：计算结果表示到小数点后两位。精密度 在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。结束工作1、 关机 所有样品检测结束后，让流动相继续流动20-30分钟，以免色谱柱上残留样品中的强吸附杂质2、 关闭色谱数据工作站3、 关闭接口、监测器电源4、 清理台面，填写仪器使用记录注意事项1、 个实验室的仪器设备不可能完全一样，操作时一定要参照仪器的操作规程2、 用平头微量注射器吸液时，防止气泡吸入的方法是：将擦干净并用样品洗过的注射器插入样品液面以下，反复提拉数次，驱除气泡，然后缓慢提升针芯至所的需刻度。3、 色谱柱的个体差异很大，性能也会有很大差异，因此，色谱条件（主要指流动相的配比）应根据所用色谱柱的实际情况做适当的调整。4、 如果仪器长期停用，完成试验后还需卸下色谱柱，并将色谱柱的两头的螺帽套紧。然后先用水再用异丙醇冲洗泵，确保泵头内灌满异丙醇。接着从系统中拆下泵的输出管，套上管套。最后将溶剂入口过滤器从溶剂储液器中取出并放入干净袋中，妥善保存。备：高效液相色谱仪操作步骤：1) 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜.2) 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3) 打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。4) 进入hplc控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。5) 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。6) 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。7) 设计走样方法。点击file，选取se-lect users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。8) 进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。9) 关机时，先关计算机，再关液相色谱。10) 填写登记本，由负责人签字。注意事项：11) 流动相均需色谱纯度，水用2