实验1 培养基母液的配制.doc

实验1 培养基母液的配制实验目的二、实验用具o5二尝二二揣二二二：蕊；乳誓1004、50n尢、25毗)、细口瓶(1阗0址)。药勺、小玻璃棒。三、实验药品按培养基配方准备四、培养基母液的配制(一)大量元素母液的配制 无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的尸苎，把各种化合物扩大10倍，用感量为001g的扭力天平，分别用50mL苎杯称量，用重蒸馏水溶解。以佃配方为例(表1)。溶解时在每只烧杯中加A30-40n正重蒸馏水，置于酒精灯上，加热使其溶解(注意温度不可过高，甲70、)。溶解后，在10叩证量筒中，混合定容于1阗0n厶重蒸馏水中。苎混苎定容时，必须最后加入氯化钙，因为氯化钙与磷酸二氢钾，形成磷酸三苎：磷酸钙之类不溶于水的沉淀。将配好的混合液，倒人细口瓶中，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1咖n止培养基取此液1mn尢。，(二)微量元素母液的配制 无机盐中微量元素母液，按照培养基配方用的1m倍，用感量为00叩1g的电光分析天平，分别用50毗烧杯称量，用苎苎苎水溶解，以肥配方为例(表2)。溶解时，在每只烧杯中加入重蒸痴汞A毫升(切勿加多)。在酒精灯上缓缓加热以增加溶解速度。待全部溶解后，混合定容于100mL容量瓶中保存于冰箱中，配制培养基时，每配制1 000毗培养基取此液1mLoKN-hN03Ca022H20Mg,)47H20KH：P03化合物名称MnS044H20ZnS047H20CuS045H203B03Na2M0042HzOCOCl26H20定容于1 000mL重蒸馏水中，最后加入Caf：122H20每升培养取此液100吐 (三)铁盐母液的配制 铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁，只需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，又比较稳定，不易发生沉淀。这种母液的配制方法是：用感量为001g扭力天平称取5；57g硫酸亚铁(FeS047U20)和745g乙二胺四乙酸二钠(Na：EDTA)，分别用蒸馏水溶解。定容于1 000mL蒸馏水中，常温保存。配制培养基时，每配制1 000血叔此液5mL。 (四)激素及其他有机物母液的配制 激素类、维生素类及用量较小的有机物类，为了使用方便和准确，也应配制成母液。母液的浓度，根据培养基配方的需要量灵活确定。经常使用的母液浓度为02-2吨mL，但也有例外。如肌醇用量较大，可配制成1020吨mL的母液浓度。这类物质的称量，必须用感量为00001 g的电光分析天平。咖 5m 栅 I船 1m9 6 4 3 1 溶解各种有机化合物所用的溶剂不同，必须注意。例如配制生长素类，如2,4-D、萘乙酸、吲哚乙酸等，应先用少量12mL95酒精溶解，然后用重蒸馏水定容；配制细胞分裂素时，先用少量的mHCl或mNaOH溶解，然后再用重蒸馏水定容；配制叶酸时，应先用少量稀氨水溶解，然后再用重蒸馏水定容。 配制母液必须用重蒸馏水，配制后存放于冰箱中，可保存几个月。当发现母液中出现沉淀或霉团时，则不能继续使用。烟酸甘氨酸肌醇24-D1 nagmL2 nagmL20 nagmL1 mgmL1 nagmL05 mgmL20 gL8 gL58KT 05 nagmL ， 表3 按MS配方需要量和母液浓度计算各种母液吸取量并填入下表名称rvtsiE-二：笔1 000mL二二之，二二二，*gcff素微量元素铁盐维生素B1维生素B6烟酸甘氨酸llti$2,4-D盯蔗糖琼脂04 nagL05 mgL0S mgL2 mgL100 mgL05 mgL1 mgL20 gL8 gL10倍液100倍液5 mLL1 mgmL1 mgmL1 mgmL2mgmL20mgmL1 ragmi,05 mS吐KN03(硝酸钾)Ca(N03)24H20(硝酸钙)KCl(氯化钠)MgS047H20(硫酸镁)NaaS04(硫酸钠)NaH2P0421420(磷酸二氢钠)MnS044H20(硫酸锰)Na2M0042H20(钼酸钠)CuS045U20(硫酸铜)Pe(C6U507)3H20(柠檬酸铁)烟酸甘氨酸盐酸吡哆素(维生素B6)盐酸硫铵素(维生素B1)泛酸钙蔗糖NH4N03(硝酸铵)KN03(硝酸钾)KH2P04(磷酸二氢钾)MgS047H20(硫酸镁)CaCl2(氯化钙)xFeS047H20(硫酸亚铁)xNq皿U(乙二胺四乙酸牛内)MnS044H20(硫酸锰)ZnS049H20(硫酸锌)HaB03(硼酸)(碘化钾)Na2M0042H20(钼酸钠)CuS045H20(硫酸铜)CoC小6H20(氯化钴)甘氨酸盐酸硫胺素(维生素B1)盐酸吡哆素(维生素B6)烟酸肌肌醇蔗糖琼脂005005 10125750250250252000002500250025 2 04 05 05 1003000010000如何配制培养基母液?培养基母液的配制一般用蒸馏水，用于茎尖分生组织培养用的培养基母液，特别是一些激素和有机物母液，在有条件的单位最好用重蒸馏水或无离子水配制。下面以MS培养基为例，详细介绍各种母液的制备。大量元素：大量元素用量相对较大，可以以每种试剂单独配制成母液，配制时以100倍的用量分别称出并分别进行溶解定容，制备培养基时每升培养基取每种母液10毫升，MS培养基大量元素母液配制(见表6)。表6 MS基本培养基大量元素母液配制MS培养基母液配制母液代号试剂培养基含量（毫克/升）母液含量（克）蒸馏水定容（毫升）每升培养基用母液量（毫升）KKNO31900190100010NH4NH4NO31650 165MgMgSO4370 37P KH2PO4 17017CaCaCl22H20 44044微量元素：微量元素因用量少，首先将各种试剂单独配制成母液，然后以100倍的用量混合定容制成微量元素母液，配制培养基时每升培养基取母液10毫升，MS培养基微量元素母液配制(见表7)。表7 MS基本培养基微量元素母液配制MS培养基母液配制母液代号试剂培养基含量（毫克/升）母液浓度（毫克/毫升）母液用量（毫升）蒸馏水定容（毫升）每升培养基用母液量（毫升）B MnSO44H2O223010022.3100010ZnSO47H2O860100 86H3BO362010620KI831083NaMoO42H2O251025CuSO45H20251 25CoCl26H2025 1 25铁盐：铁盐母液的配制(见表8)，两种试剂分别称量并分别加热溶解，待两种试剂均溶解后混合，混合后的溶液继续加热使其充分整合，冷却后定容备用，每升培养基用铁盐母液5毫升。 表8 MS基本培养基铁盐母液配制 MS培养基母液配制母液 代号试剂培养基含量（毫克/升）母液称量（克）蒸馏水定容（毫升）每升培养基用母液量（毫升）FeNa2-EDTA37305005FeSO47H20 2.780有机物：有机物质常以100倍的用量分别称量分别溶解，然后混合定容，配制培养基时每升培养