山莨菪碱对创伤性肺损伤防治作用的实验研究.doc

山莨菪碱对创伤性肺损伤防治作用的实验研究山莨菪碱对创伤性肺损伤防治作用的实验研究更新日期：2010-07-03 梁继河朱云喜李琦罗新林 【摘要】目的探讨山莨菪碱(654-2)对创伤性急性肺损伤(ALI)的防止作用及其可能的机制。方法观察654-2对创伤性ALI兔血浆和支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子(TNF-)和白介素8(IL-8)含量的影响,同时进行组织病理学的光镜和电镜检查,并用原位杂交法检测肺和其他脏器组织中TNF-和IL-8的mRNA表达。结果致伤前、后给予654-2,可使创伤性ALI兔血浆及BALF中的TNF-、IL-8明显减少、肺组织损伤程度减轻;TNF- mRNA和 IL-8 mRNA的基因表达主要定位在内脏组织中的M、PMN和血管内皮细胞(VEC)内,表达数量明显减少。结论654-2可降低血浆及BALF中TNF-、IL-8的含量,使TNF mRNA和IL-8 mRNA的基因表达下调,从而减轻或在一定程度上防止创伤性ALI的发生和发展。 【关键词】创伤急性肺损伤山莨菪碱肿瘤坏死因子-白介素-8基因表达 Experimental Study of Preventive and Therapeutic Effects of Anisodamine on Traumatic Acute Lung InjuryLIANG Ji-he, ZHU Yun-xi, LI Qi, et al. Dept. of Cardiothoracic Surgery, Xijing Hospital, Fourth Military Medical University, Xian 710032 【Abstract】AimTo investigate the preventive and therapeutic effects of anisodamine (654-2) on traumatic acute lung injury and their mechanism. Methods654-2 was used in the prophylaxis and treatment of the rabbits with traumatic acute lung injury. The changes of the contents of tumor necrosis factor- (TNF-) and interleukin-8 (IL-8) in plasma and bronchoalveolar lavage fluid (BALF) were observed. Meanwhile, the pathologic changes were examined with optical microscope and TV microscope respectively. In situ hybridization test was used to detect the gene expression and cell localization of TNF- and IL-8. Results654-2 could decrease the contents of TNF- and IL-8 in plasma and BALF and alleviate the pulmonary tissue injury. Gene expression of TNF- mRNA and IL-8 mRNA was primarily located in M, PMN, VEC of organ tissues, and was significantly decreased in their cell quantity. Conclusion654-2 possesses protective effects on traumatic lung injury through the decrease of TNF- and IL-8 and downregulation of their gene expression. 【Key words】TraumaAcute lung injuryAnisodamineTumor necrosis factor-Interleukin-8Gene expression 急性肺损伤(ALI)已成为严重创伤、大面积烧伤和严重感染等病人死亡的主要原因1。自1967年Ashbaugh等首次描述该病的临床特征以来,确切的发病机制至今尚未完全阐明,临床上缺乏有效的防治措施。近年来,临床和动物实验均证实山莨菪碱(654-2)对ALI具有良好的保护作用2,但对其作用机制了解甚少。笔者采用胸部撞击加静脉注射小剂量内毒素的方法3造成创伤性ALI模型,采用酶联免疫方法检测兔血浆及支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子(TNF-)、白介素8(IL-8)含量改变,并用原位杂交法检测肺和其他脏器组织中TNF和IL-8 mRNA表达及细胞定位,观察静脉注射654-2对其含量的影响和对兔创伤性ALI的保护作用,力图从细胞因子水平探讨创伤性ALI的发病机制以及654-2对创伤性ALI的防治作用。 材料与方法 1.动物分组及处理:健康大耳白兔(本校动物中心提供)32只,雌雄不限(戊巴比妥钠25mg/kg静脉麻醉),随机分为4组,每组8只:(1)创伤性ALI模型(M)组,兔仰卧固定于撞击台上,以冲击速度5.71m/s、力75.8N/cm,冲撞能量约204J使胸壁压缩40%,约3cm。兔非冲撞击侧胸壁被硬板支撑,兔体只可挤压,不能移位。随后静脉注射大肠杆菌内毒素50g/kg。(2)654-2预防(P)组:先静脉注射654-2 2mg/kg,然后按M组方法处理。(3)654-2治疗(T)组:按M组制成创伤性ALI后,即刻给予654-2 2mg/kg静脉注射。0.5小时后以1mg.kg1.h1静脉滴注维持。(4)正常对照组(C)组:静脉注射等渗盐水0.2ml/kg。2.检测指标:(1)各组均于撞击前、后0.5,1.5,2,4,6,12,24小时经颈动脉采血行血气分析。(2)与上述同一时相点采血检测血浆中TNF-、IL-8含量;24小时活杀兔取右肺灌洗,检测BALF中TNF-和IL-8含量。用酶联免疫方法测定(TNF-和IL-8试剂盒均由我校免疫教研室提供)。(3)病理学检查:于撞击后24小时活杀兔,取左上肺作常规光镜和电镜检查。(4)用原位杂交法检测肺、肝、肾、心组织细胞中TNF-和IL-8的mRNA表达,标记基因探针能够特异性地与细胞浆中相应的mRNA杂交呈现银颗粒聚集,其密度大于背底3倍以上的细胞才确认为阳性细胞。 3.统计学处理:各参数以s表示,用我校统计教研室统计软件在微机上行单因素分析、t检验,P值代表差异显著性。 结果 1.呼吸变化:M组兔创伤后呼吸频率逐渐加快、呼吸困难、窘迫,有4只兔出现明显发绀,撞击后24小时濒于死亡;动脉血氧分压(PaO2)进行性下降,于实验后24小时为最低值(8.640.62)kPa。P组和T组撞击后呼吸均快且幅度加深,无发绀,PaO2逐渐下降,24小时后最低值P组为(9.630.84)kPa,T组为(9.240.76)kPa。M组与P组、T组差异均显著(P0.05),M组与C组差异非常显著(P0.01),C组与T组差异显著(P0.05)。 2.肺湿/干比值:M组为5.840.28,P组5.120.20,T组5.242.11,C组4.620.21。M组与C组差异非常显著(P0.01),P组、T组与C组差异均显著(P0.05)。说明M组为重度肺水肿,P组和T组均为中性肺水肿。 3.病理学检查:M组肺体积增大变实,表面有大小不等散在红色斑片,切面呈红色实样变。光镜下:肺间质及肺泡腔水肿、渗出、出血、粒细胞浸润,肺泡腔内透明膜形成;电镜下:肺泡型细胞微绒毛脱落、板层体空化、线粒体肿大、肺间质内粒细胞浸润。P组与T组病变相似,但较M组略轻, 均可见病变以双侧下叶重