槐米中芸香1.doc

槐米中芸香苷（芦丁）的提取与鉴定【实验目的】1、学会运用碱溶酸沉法，从槐米中提取、精制芦丁，并进行水解。 2、学会用显色反应及纸色谱法检识黄酮类化合物。 【实验原理】 采用碱溶酸沉法提取，其原理是芸香苷结构中含有酚羟基，具酸性，能溶于碱水，当加入酸溶液后，则芸香苷沉淀析出。芸香苷的精制是利用其可溶于热水，难溶于冷水的性质与杂质分离。 【实验材料】 设备：电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、移液管、纱布、温度计、滴管、抽滤装置、研钵、250 ml圆底烧瓶、冷凝管、水浴锅、pH试纸、新华色谱滤纸、紫外灯、展开筒、试管、试管架。 药品：槐米粗粉、浓盐酸、蒸馏水、0.4%硼砂、石灰乳、2%硫酸、95%乙醇、氢氧化钡、葡萄糖标准品水溶液、鼠李糖标准品水溶液、正丁醇、醋酸、芦丁标准品、槲皮素标准品、氨水、三氯化铝、浓硫酸、萘酚、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、镁粉、苯胺-邻苯二甲酸、醋酸镁 【实验步骤】 1、芸香苷的提取： 称取槐米粗粉20g，置500 ml烧杯中，加入0.4%硼砂沸水溶液200 ml，在搅拌下加石灰乳，调至pH89，加热微沸20分钟（注意保持pH89），并随时补充蒸发掉的水分，趁热用四层纱布滤过。滤渣同样操作再提取一次，合并两次滤液。滤液在6070用浓盐酸调至pH5左右，静置过夜使沉淀完全，抽滤，沉淀用蒸馏水洗23次至中性，抽干，置空气中晾干，得芸香苷粗品。 2、芸香苷的精制： 称一定重量的粗品，按约1200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使其全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。抽滤，置空气中晾干或6070干燥，得精制芸香苷，称重，计算得率。 3、芸香苷的水解： 取芸香苷1g，研细后置于250 ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸溶液100 ml，直火微沸回流约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇（95%乙醇约15 ml）重结晶即得精制槲皮素。 4、鉴定： （1）糖的纸色谱鉴定： 样品：取上述滤去槲皮素的水解母液20ml，搅拌加饱和的氢氧化钡水溶液中和至pH7，滤去沉淀，滤液浓缩至12ml得样品液 对照品：葡萄糖标准品水溶液、鼠李糖标准品水溶液 支持剂：新华色谱滤纸（中速15cm7cm） 展开剂：正丁醇-醋酸-水（415）上层液 显色剂：苯胺-邻苯二甲酸试剂喷雾，105烘10分钟，显棕色或棕红色斑点 （2）芸香苷、槲皮素的纸色谱鉴定： 样品：1）自制芸香苷乙醇液 2）自制槲皮素乙醇液体 对照品：1）芸香苷标准品乙醇液 2）槲皮素标准品乙醇液 支持剂：新华色谱滤纸（中速15cm7cm） 展开剂：1）正丁醇-醋酸-水（415）上层液 2）15%醋酸水溶液 显色剂：1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在紫外灯下观察斑点颜色 2）经氨气熏后再观察 3）喷三氯化铝试剂后再观察 （3）Molish反应： 取芸香苷少许置小试管中，加乙醇0.5 ml，加10%萘酚溶液1 ml振摇使溶解，沿管壁徐徐加入浓硫酸约0.5 ml，静置。观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性。以同法试验槲皮素，比较二者的不同。 （4）酸性实验： 取小试管四支为一组，共二组，第一组每管中加入芸香苷1mg，第二组每试管中加入槲皮素1mg，每组分别加稀氨水、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液和1%氢氧化钠溶液各2ml，振摇后，观察各管溶解情况，溶解的溶液应呈黄色。再加盐酸数滴，黄色应褪去或变浅，并有沉淀或浑浊析出。 （5）镁粉-盐酸反应： 取芸香苷1mg，加乙醇12 ml在水浴上加热溶解，加镁粉约50mg，滴加几滴浓盐酸，溶液由黄色渐变红色者，表示有黄酮类化合物。以同法试验槲皮素。 （6）三氯化铝反应： 取芸香苷1mg，加甲醇12 ml在水浴上加热溶解，加入1%三氯化铝甲醇溶液23滴，呈鲜黄色，以同法试验槲皮素。 （7）醋酸镁反应： 取芸香苷1mg，加甲醇12 ml水浴中加热溶解，加1%醋酸镁甲醇溶液23滴，呈黄色荧光反应。以同法试验槲皮素。 【实验说明】 1、硼砂的作用，芸香苷分子中因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露在空气中能缓缓氧化变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧化分解。硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的。但其价格较高，工业上用较大量的石灰加少量硼砂，同样达到提高质量要求。 2、加入石灰乳，使pH89，既可以达到碱溶解芸香苷的目的，又可以除去槐米中含有的大量多糖黏液质。但pH不能过高，碱处理时间尽短，以减少酚类氧化分解。 3、用浓盐酸调pH45，pH过低会使芸香苷降低得率。 4、提取时也可以不加