碘显色法测定木枣叶片中的淀粉含量.doc

碘显色法测定烟草中的淀粉含量张峻松 贾春晓 毛多斌 张文叶 李炎强 碘显色法测定木枣叶片中的淀粉含量淀粉是木枣中一类重要的碳水化合物,新鲜木枣通过调制,大部分淀粉经酶解反应降解为还原糖。由于淀粉的分离比较困难,长期以来淀粉被认为是较难测定的木枣组分之一。通常采用酸解或酶解67后测定还原糖的方法定量测定植物中的淀粉,但这两种方法都不易除净植物组织中的还原糖,而且还会有除淀粉外的高分子碳水化合物(如半纤维素)的水解,造成较大的干扰,使结果往往偏高8。淀粉与碘结合呈现蓝色的特性已广泛用于淀粉酶活性的测定9,并已用于食品中淀粉的定量分析10,故借鉴食品中淀粉的分析方法,进行了碘显色法测定木枣中淀粉含量的研究,目的是建立简便、准确测定木枣淀粉的方法。1 材料与方法11材料与仪器(1) 材料：延安大学生命科学学院组培实验室培养的木枣(2) 仪器。720型分光光度计;LA-230S型电子天平(感量01mg)。(3) 试剂。可溶性淀粉(标样)、碘和碘化钾(AR,上海华彭实业有限公司)、蒸馏水。12实验方法121溶液配制(1)碘-碘化钾溶液。称取26g碘和50g碘化钾,放入小烧杯中,加少许蒸馏水溶解,转移至1000mL容量瓶中,用蒸馏水定容,摇匀。(2)淀粉储备液。称取05g可溶性淀粉,置于250mL烧杯中,加入100mL蒸馏水,搅拌下加热至沸,保持5min,冷却至室温后转入250mL容量瓶中,用蒸馏水定容、摇匀。122烟样中淀粉的测定将各种烟样自然风干,先初步粉碎,再用研磨机粉碎,过40目筛,分别装入磨口棕色广口瓶中,待用。准确称取10g烟粉,放入50mL烧杯中,加入20mL蒸馏水,搅拌下加热至沸腾,保持5min,过滤。残渣用热蒸馏水洗涤(5mL3,用碘-碘化钾溶液检测淀粉是否洗净),弃去残渣,合并滤液。滤液再加热至沸腾,保持10 min,冷却至室温,转入50mL容量瓶中,用蒸馏水定容、摇匀。取10mL烟样淀粉样品液,加入05mL碘-碘化钾溶液,以空白(10mL蒸馏水+05mL碘-碘化钾溶液,下同。)为参比,于600nm处测定样品液的吸光度,根据标准曲线计算烟样的淀粉含量。2结果与讨论21最大吸收波长的确定取08mg/mL淀粉标准溶液,加入碘-碘化钾溶液显色后,以空白为参比,测定不同波长下的吸光度。再以吸光度为纵坐标,吸收波长为横坐标绘制吸收曲线,由此测得其最大吸收波长为600nm。22工作曲线准确吸取2mg/mL淀粉标准溶液各0、2、4、6、8、10、12、15mL,分别置于25mL容量瓶中,用蒸馏水定容,摇匀。各取10mL按上述方法测定各淀粉标准溶液的吸光度。以吸光度对淀粉浓度作图,得淀粉工作曲线,其线性回归方程为:Y=00378X+00123,r=09997式中:Y吸光度;X淀粉浓度(mg/25mL);测定线性范围:0125mg/mL。23回收率采用标样加入法测定了淀粉的回收率。结果(表1)表明淀粉的平均回收率超过95%,因此,认为本法的测定结果较准确。24重复性取6组同一烟叶样品,按上述条件进行测定,结果表明:平均测定值为34523mg,标准偏差为03352,变异系数为097%。表明方法的重复性较好,可以用于烟草中淀粉的定量分析。25与酸解、酶解法的比较采用碘显色法、酸解、酶解法分别测定了云南B3F的淀粉含量。结果(表2)显示:(1)与传统的酸解、酶解法相比,碘显色法操作简便,省去了繁琐的前处理步骤,如:酶解法需用有机溶剂洗去烟草表面的脂类物质,并需先测定酶的活性;酸解、酶解法均须排除烟草中可溶性糖的干扰;酸解、酶解法都需要于恒温下水解近2h。(2)碘显色法的测定结果虽然稍低于酸解、酶解法,但差异不显著,相对也较准确,而酸解法和酶解法淀粉回收率大于100%的原因,可能是其他高分子碳水化合物(如半纤维素)水解造成的。因此,碘显色法更适于烟草中淀粉的快速定量分析。26某些烤烟烟叶中的淀粉含量采用上述方法测定了18种不同地区、等级烤烟烟叶中的淀粉含量。结果(表3)表明:在所测定的烟叶中,各地区的烟叶中淀粉含量有较大差异。其中以贵州烟叶的淀粉含量较低,以福建烟叶的淀粉含量较高;从部位来看,淀粉含量按下部、上部、中部次序下降。这些差异可能是由于不同的烟叶所含的淀粉酶的量和其活性有关,这是一个值得深入研究的问题。27某些商品卷烟中的淀粉含量采用上述方法测定了国内外15种商品卷烟中的淀粉含量。结果(表4)表明:在所测定的卷烟中,国内外混合型卷烟的淀粉含量基本一致;国产烤烟型卷烟的淀粉含量较高,约是进口卷烟的16倍,这可能与其卷烟配方或原料的调制方法有关。3结论建立了采用碘显色法测定烟叶淀粉含量的方法,并采用该方法测定了18种烤烟烟叶和15种市售卷烟中的淀粉含量。结果表明:方法的回收率为968%,CV=097%,适于烟草中淀粉的定量分析。就所测定的烟叶样品而言,不同地区的烤烟烟叶中淀粉含量有较大差异;且下部叶的淀粉含量上部叶中部叶。就所测定的卷烟样品而言,国内外混合型卷烟的淀粉含量基本一致;国产烤烟型卷烟淀粉含量较高,约是进口卷烟的16倍。表1回收率 编号 含量(mg/g) 添加量/(mg) 测定量/(mg/g) 回收率/(%) 平均回收率/(%)1 35013 40106 74036 9732 34519 40106 73061 9613 25557 40106 64660 9754 27671 20503 47272 956 9685 19963 20503 41443 9776 46736 20503 66521 965表2碘显色法与酸解、酶解方法比较方法 测定结果 回收率(%) 变异系数(%) 分析时间(min) 优缺点碘显色法 34519 973 0971 30 方法简便酸水解法 36859 1076 487 180 前处理繁琐酶水解法 35356 1027 362 200 前处理繁琐表3一些烤烟烟叶中的淀粉含量(%)烟样 淀粉含量 烟样 淀粉含量 烟样 淀粉含量云南B3F 369 广东B2F 317 福建B2F 493云南C2F 361 广东C1F 215 福建C3F 471云南X2F 473 广东X2L 329 福建X3L 539贵州B3L 272 山东B3F 288 河南B1L 379贵州C1L 251 山东C3L 208 河南C1L 371贵州X3L 332 山东X3L 389 河南B2F 406表4某些商品卷烟烟丝中淀粉的含量(%)卷烟样品 淀粉含量 卷烟样品 淀粉含量进口混合型A 163 进口烤烟型D 202进口混合型B 175 进口烤烟型E 216进口混合型C 169 国产烤烟型F 313国产混合型A 178 国产烤烟型G 339国产混合型B 165 国产烤烟型H 329国产混合型C 171 国产烤烟型I 331国产混合型D 162 国产烤烟型J 338国产混合型E 159参考文献1Weeks WChemistry of tobacco constituents influences flavor andaromaJRecAdvTobSci,1985,11:175-2002Severson R FCuticular constituents of tobacco factors affectingtheir production and their role in insect and disease resistance andsomke qualityJ. RecAdvTobSci, 1985,11:105-1743Goins GD, The chemistry and quality of cured leavesJTobSci, 1996,40:10-187Matsushima S; Arakwa NDetermination of starch in tobacco leafby sugar analyzer methodJCORESTA, 1985, (4):278Mohapatra SCComparison of methods for starch extraction andestimationJCORESTA,1988, (3):719大连轻工业学院食品分析M.北京:中国轻工业出版社1995157-19510徐昌杰,陈文峻,陈昆松,等淀粉含量测定法-碘显色法J生物技术,1998,8(2):41-43关键词:淀粉;碘显色法;烤