细胞核增殖相关抗原Ki67在子宫内膜病变中的表达.doc

细胞核增殖相关抗原 Ki67 在子宫内膜病变中的表达 *马晓欣 李晓晗 李 娜 张淑兰 陆景明中国医科大学附属第二医院妇产科 (沈阳市 110004)摘 要 目的: 研究 Ki67 抗原在子宫内膜病变中表达的规律及其在子宫内膜癌的发生和预后评估的临床价值。方法: 用免疫组化(SP) 法检测子宫内膜增殖症及非典型增生各 30 例, 子宫内膜癌 90 例; 对照组 30 例, 其中包括增生期及分泌期子宫内膜各 15 例, 观察 Ki67 抗原在不同内膜病变及正常内膜中的阳性表达率。结果: Ki67 抗原在分泌期内膜中几乎没有表达, 在增生期内膜中有弱表达; 在增殖症及非典型增生中有表达, 但与对照组比较, 无统计学意义(P0.05) , 且两者之间比较, 亦无统计学意义(P0.05) ; 在子宫内膜癌组织中表达明显增高, 显著高于良性病变组和对照组(P0.05). Compared with control groups respectively, there was no significance too (P0.05). In endometrial carcinoma, the expression increased obviously,which is higher than benign diseases and control group prominently (P0.01). The positive rate of Ki67 antigen increased with the increasing of clinical phase and grade of cellular differentiation. Conclusion: Ki67 antigen is related to the incidence of endometrial carcinoma. The over expression of Ki67 indicates a poor prognosis of pa-tients with endometrial carcinoma.Key words Endometrial disease Ki67 Nuclear proliferation- associated antigen细胞的增殖与肿瘤的发生、浸润、种植与转移过程相关。评价细胞的增殖状态对研究肿瘤的生物学行为, 判断其危险性具有重要意义。Ki67 是一种与增殖细胞相关的核抗原, 是目前应用最广泛的增殖细胞标志之一, 在乳腺癌、鼻咽癌、膀胱癌等常见, 但在子宫内膜癌报道较少。本文采用免疫组化法检测Ki67 抗原在正常宫内膜, 宫内膜增殖症, 非典型增生及子宫内膜癌中的表达, 探讨其在子宫内膜癌发生、发展中的作用及其作为子宫内膜癌的预后指标的价值。1 材料与方法1.1 材料和试剂所有标本均取自中国医科大学附属二院妇科1990 年 8 月2003 年 8 月经宫腔镜检查、诊刮及开腹手术子宫切除的子宫内膜组织, 入选病例已除外肝肾疾病, 前 2 周未用激素治疗。实验组: 子宫内膜增殖症 30 例, 非典型增生内膜 30 例, 子宫内膜癌90 例。子宫内膜癌组年龄 3476 岁, 中位年龄 62岁。期 46 例, 期 21 例, 期 20 例, 期 3 例; 按组织学类型分, 子宫内膜样腺癌为 86 例, 腺鳞癌 3例, 浆液性乳头状腺癌 1 例; 有淋巴结转移 17 例, 无淋巴转移 73 例; 高、中、低分化(G1, G2, G3) 各 30 例。对照组: 增生期和分泌期宫内膜各 15 例。所有标本经 10%甲醛常规固定, 石蜡包埋。所有诊断均经病理证实。试剂: 单克隆抗体 Ki67 及 SP 试剂盒均由广州中山公司提供。1.2 方法免疫组化采用 SP 法, 取石蜡标本, 4m 连续切片后, 先经病理确认, 再常规脱蜡到水, 3%双氧水温孵育 10min、水洗, 热修复(0.01M pH7.4 EDTA) 后降至室温水洗, 0.05M PBS 浸泡 2min, 10%正常血清封闭, 滴加一抗 Ki67 工作液1:50, 4孵育过夜后升至室温, 0.05M PBS 洗 3 次, 每次 5min, 滴加二抗(生物素标记) 在 37孵育 35min, 0.05M PBS 洗 3 次, 每次 5min, 二氨基联苯胺(DAB) 显色 5min, 自来水充分水洗, 苏木素对比染色 10min, 水洗返兰 30min, 脱水后封片。以 PBS 代替一抗作阴性对照, 已知阳性组织片作阳性对照。1.3 判断标准Ki67 阳性应为核境界清晰的棕色、棕褐色颗粒, 每张切片随机计数 510 个高倍视野 1 000 个细胞中阳性细胞所占百分比。5%为- , 6%25%为+(图 1), 26%50%为+(图 2), 51%为+(图 3)。1.4 统计学方法采用 SPSS 统计软件包进行 2检验。P非典型增生增殖症正常增殖期内膜正常分泌期内膜。见表 1。*2.2 Ki67 抗原表达与子宫内膜癌的关系子宫内膜癌中 Ki67 阳性率与子宫内膜癌的病理组织分化程度、临床分期、淋巴结转移密切相关(P0.01)。见表2。*图 1 免疫组化 Ki67 染色阳性(+) , 标记在细胞核内免疫组化 SP 法200图 2 免疫组化 Ki67 染色阳性(+) , 标记在细胞核内免疫组化 SP 法200图 3 免疫组化 Ki67 染色阳性(+) , 标记在细胞核内免疫组化 SP 法2003 讨论肿瘤的生长是一个复杂而有序的多阶段生物学过程。Ki67 被认为是癌变人群高危个体的生物学标志物之一1。Ki67 即细胞核相关抗原, 是增殖性细胞核的标记物, 仅分布于细胞核内, 它出现在除 G0期和 G1期所有细胞周期中的特异性非组化蛋白, 与细胞的合成代谢有关2。它表达于增殖细胞中, 在静止细胞中很少表达, 它在子宫内膜病变的发生发展中起到重要的作用。肿瘤增殖活性 Ki67 的检测对于判断肿瘤的恶性程度, 预见其生物学行为有重要的意义。ertens3报道, 由于卵巢激素的周期性变化, 使子宫内膜亦出现周期性变化, Ki67 在增生期内膜中有表达, 而在分泌期内膜表达则显著减少。在卵巢肿瘤中 Ki67 与卵巢肿瘤良恶性, 组织学分级及预后有关4。还有人认为 Ki67 在卵巢肿瘤组织中随组织学分级、临床分期的升高而增加, 与卵巢癌组织大小呈正相关, 与淋巴结转移无关5。而在胰腺癌中 Ki67 标记指数与组织分级, 临床分期, 淋巴转移密切相关6。近年来,Ki67 主要用于观察恶性肿瘤的生长, 在良性听神经肿瘤中也有该指标的表达, 且与其生长指数成正相关, 与病程成负相关7。本研究采用免疫组化法对正常宫内膜(分泌期及增生期), 子宫内膜增殖症, 非典型增生, 子宫内膜癌 Ki67 抗原的表达进行检测, 其结果显示: Ki67 抗原在正常子宫内膜、子宫内膜增殖症、非典型增生阳性表达率依次呈逐步升高趋势,两组比较无统计学意义。而在内膜癌组织中, Ki67抗原表达明显增高, 显著高于良性病变组和对照组且有统计学意义, 这与 Morsi 等学者有相同的实验结论8。表明在子宫内膜癌发生之前并无 Ki67 抗原广泛表达, 因此 Ki67 可作为鉴别肿瘤良、恶性的辅助指标。同时本实验还显示: 随子宫内膜癌的临床分期的增加、淋巴结转移的有无, Ki67 阳性表达率呈上升趋势; 且肿瘤细胞分化级别越差, 其恶性度越高,Ki67 增殖活性越强, 说明 Ki67 抗原可作为评价子宫内膜癌增殖、分化状态的重要指标, 有助于判断肿瘤的侵袭力。由此可见, Ki67 在子宫内膜癌发生、发展的过程中起到了重要的作用。它不仅能客观反映内膜癌的增殖活性, 并能估计癌细胞发生浸润、转移的潜能。因此认为 Ki67 为子宫内膜癌发生发展, 预后及诊断的良好指标之一。对于早期预测子宫内膜癌的复发、恶化及治疗的选择有重要的临床意义。参考文献1 Liu SC, Sauter ER, Clapper ML, et al. Markers of cell prolifera-tion in normal epithelia and dysplastic leukoplakias of oral cavity J. Cancer Epidemiol Biom Prevention, 1998, 7(7):5976032 Gerdes J, Li L, Schlueter C, et al. Immunobiochemical and molecular biologic characterization of the cell proliferation- associ-ated nuclear antigen that is defined by monoclonal antibody Ki67 J. Am J Pathol, 1991, 138(4): 8678733 Mertens HJ, Heineman MJ, Evers JL, et al. The expression of apoptosis- related proteins Bcl- 2 and Ki67 in endometrium of ovulatory menstrual cyclesJ. Gynecol Obstet Invest, 2002, 53(4):2242304 陈震宇,赵丽焉.细胞核增殖相关抗原 Ki67 和 bcl- 2、bax 与恶性卵巢上皮性肿瘤临床病理及预后的关系 J. 实用妇产科杂志,2004,20(1):25285 李培淑,李爱华,董瑞英,等.Ki67、Fas 系统在卵巢肿瘤组织中的表达及临床意义J.山东大学学报,2002, 40(2):1521536 刘江伟,李开宗,窦科峰.胰腺癌组织中 cox- 2、Ki67 的表达及其临床意义J.肝胆外科杂志,2003,11(1):67687 张玉海,鲍文公,付海霞,等.GGF 与 Ki67 表达与听神经瘤细胞增殖相关性的探讨J.中国肿瘤临床,2004,31(8):4524568 Morsi HM, Leers MP, Jager W, et al. The patterns of expression of an apopto