葡萄糖注射液无菌检查的方法验证.doc

葡萄糖注射液无菌检查的方法验证1、样品：葡萄糖注射液，规格：500ml：25g(批号：101001)： 2、方法：按照中国药典2010年版二部无菌检查中薄膜过滤方法验证。3、仪器及用具：TXQ-LS-30SII小型真空灭菌柜（山东新华），JT2010集菌仪(杭州泰林有限公司)，APY220型全封闭无菌试验过滤培养器（杭州泰林有限公司）。4、培养基无菌检查用硫乙醇酸盐流体培养基，批号： ；改良马丁培养基，批号： ；营养琼脂培养基，批号： ；玫瑰红钠琼脂培养基，批号： （均由北京三药科技开发公司生产）。5、验证试验用菌种（第三代）：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）CMCC(B) 26 003；铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）CMCC(B) 10104；枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CMCC(B) 63 501；生孢梭菌（Clostidium sporogenes）CMCC(B) 64 941；白色念株菌（Candida albicans）CMCC(F) 98 001；黑曲霉（Aspergillus niger）CMCC(F) 98 003；菌种均由中国生物制品检定所提供。6、菌液制备：取经35培养1824小时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌与枯草芽孢杆菌的营养琼脂培养物1ml，加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5约为50100cfu/ml菌悬液备用。取经35培养1824小时的生孢梭菌硫乙醇酸盐流体培养物1ml，加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-6约为50100cfu/ml菌悬液备用。取经35培养1824小时的白色念株菌改良马丁液体培养物1ml，加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5约为50100cfu/ml菌悬液备用。取经25培养一周的黑曲霉改良马丁斜面培养物，加0.9%无菌氯化钠溶液10ml，将孢子洗脱，然后，吸出孢子悬液，用垫有脱脂棉的漏斗（湿热灭菌）过滤，除去菌丝，收集菌液至另一无菌试管内作为菌原液，取此菌原液0.1ml加入到0.9%无菌氯化钠溶液至9.9ml中，稀释至10-5约为50100cfu/ml孢子悬液备用，同时进行菌液计数。各菌液计数结果见表1。表1细菌和真菌计数结果（菌数为2个平皿的平均数cfu/ml）菌种金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌白色念株菌黑曲霉稀释级10-510-510-510-610-510-5计数7580698082647、验证试验：7.1薄膜过滤法：取规格为每支装10ml的供试品2支，加至100ml0.9%无菌氯化钠溶液中，混匀，按薄膜过滤法全量过滤，在约50ml的0.9%无菌氯化钠溶液中加入少许100cfu试验菌，同法过滤，将100ml相应的培养基加至封闭式薄膜滤器中，作为一株菌的供试品管。同法制备其它5株菌所用的供试品管，按规定的温度培养35天，每天观察并记录结果。规格为每支装2ml的样品除取用量为5支外，其他操作同上。7.2菌液对照：另取封闭式薄膜过滤器，不过滤供试品，其它操作同上（同法加入等量的试验菌），作为菌液对照管。6种试验菌分别同法操作，按规定的温度培养35天，每天观察并记录结果。7.3阴性对照：两个滤器内过滤0.9%无菌氯化钠溶液各200ml，然后分别加入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基各100ml，不加对照菌液，分别培养。7.4培养：硫乙醇酸盐流体培养基置35培养；改良马丁培养基于25培养。8、验证试验结果：供试品管及菌液对照管见表2，阴性对照管在规定时间内没有菌长出。表2 香丹注射液无菌检查验证试验结果培养时间菌种 菌数供试品管菌液对照管1 2 3 4 5（天）1 2 3 4 5（天）金黄色葡萄球菌75+ + + + + + + + +铜绿假单胞菌80+ + + + + + + + +枯草芽孢杆菌69+ + + + + + + + +生孢梭菌80+ + + + + + + + +白色念株菌82- + + + +- + + + +黑曲霉64- + + + +- + + + +9、结论：根据上述验证结果，本品香丹注射液对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念株菌、黑曲霉无抑菌作用，其无菌检查应按照中国药典2005年版一部无菌检查法（附录XIII B）中的薄膜过滤法进行，不需冲洗，以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌。10、无菌检查法：取本品