耐锑菌株在修复洞庭湖复合污染土壤中的应用研1.doc

耐锑菌株在修复洞庭湖复合污染土壤中的应用研究摘要近年来，负有“鱼米之乡”的洞庭湖由于湖区居民排放的生活垃圾、工业生产排弃的固体废弃物以及水产养殖业中不规范投饵所造成的污染物大肆囤积于湖区土壤，造成当地土壤呈复合污染趋势，给当地居民的生产生活带来极大地不便。其中危害最强、治理难度最大的就属复合污染中的中金属污染，对于重金属污染的治理方法主要包括化学、物理及生物方法，而具有修复能力强、费用低、无二次污染的生物治理法也逐渐受到研究者的关注，很多植物修复技术也日渐成熟，但植物修复技术自身也存在很多缺陷，如植株个体矮小、生长缓慢、根系扩张能力有限、对金属有特异性、转移率低等。研究表明植物修复效率的提高很大程度依赖于重金属种类、突然根际微生物和植物本身之间的相互作用。Glick认为植物根部跟土壤中大量微生物之间的相互作用是觉得修复程度的主要决定因素。本研究基于以上理论基础，以治理研究较少的锑污染为目的，在锑污染严重的矿区分离耐锑菌株，并将分离纯化后的菌株接种到污染土壤中，评价耐锑菌株对洞庭湖复合污染土壤的修复及耐锑菌株与蒌蒿共同作用对土壤修复的的效果。对分离纯化得到的菌株进行形态学的观察，结果表明该菌株为青霉菌；研究结果表明该菌株对锑的吸附力随锑初始质量浓度的增大而减少，在锑质量浓度大于600gL时其生长受到抑制，对锑的最高吸附率为64%；不同浓度的锑均不会影响土壤理化性质；另外该菌株可增强蒌蒿对土壤锑的吸附能力。关键词: 耐锑菌株 修复 洞庭湖 土壤污染Research on the application of antimony- resistant bacterial strain to repairing soil pollution of Dongting Lake in ChinaAbstractIn recent years, the Dongting Lake, which is famous for the land of fish and rice, is polluted by round residents emissioning garbage, the abandoned solid waste in industrial production and aquaculture with no regulated feeding , hoarding in the district soil, resulting in great inconvenience to the life of the local residents. The strongest harm to the soil is the metal pollution in the complex pollutants. Now the way to manage the heavy metal pollution methods includes chemical, physical and biological methods, which gradually was taken attention by researchs for the ability to repair, low cost, no secondary pollution bioremediation. A lot of phytoremediation technology have become more mature, but the method of phytoremediations have many defects, such as individual plants short stature, slow growth, root expansion capacity is limited, metal specificity, low transfer rate . Studies have shown that the phytoremediation efficiency is strongly dependent on the type of heavy metal, suddenly the root of the interaction between the occasion of microorganisms and plants. Glick plant roots with a large number of micro-organisms in the soil interaction between think the main determinants of the level of repair.This study is based on the above theoretical basis, management of antimony less pollution for the purpose of antimony-resistant strains isolated, serious pollution antimony mine, and the separation and purification of the strains were inoculated into the contaminated soil, the evaluation of the compound of antimony-resistant strains of the Dongting remediation of polluted soil and antimony-resistant strains of Artemisia selengensis joint action on the effect of soil remediation.Strains obtained by separation and purification of the morphological observation, the results show that the strain is Penicillium; The results showed that this strain of antimony adsorption force increases with increasing concentration of antimony initial mass and decrease in concentration of antimony quality is greater than 600g / L their growth is inhibited rate of 64%, the highest adsorption of antimony; different concentrations of antimony will not affect the physical and chemical properties of soil; addition this strain can enhance of Artemisia selengensis the adsorption capacity of the soil antimony.Key words: antimony- resistant bacterial strain; Recovery; Dongting Lake; polluted soil创新点摘要1、采用生物修复法治理洞庭湖复合污染土壤，利用耐锑菌种的金属离子吸附性，治理复合污染中的重金属污染，具有简单、安全、费用低等特点，对治理洞庭湖复合污染土壤有极大帮助。2、微生物具有体积小、比表面积大、代谢速度快等特点，耐锑菌种能够快速有效地吸附污染土壤中的中金属离子，可加快对洞庭湖复合污染土壤的治理步伐。3、采用生物修复法可以避免物理修复和化学修复引起的二次污染问题，可彻底解决洞庭湖复合污染土壤问题目录摘要创新点前言第一章 耐锑菌株的筛选、富集和鉴定1.1 主要仪器与试剂1.2 主要培养基及其制备 1.3 实验步骤第二章 耐锑菌株对洞庭湖复合污染土壤修复研究2.1 主要仪器与试剂 2.2 实验步骤第三章 耐锑菌株与蒌蒿相互作用对污染土壤的修复研究3.1 主要仪器与试剂 3.2 实验步骤第四章 实验结果和讨论4.1 分离菌种鉴定4.2 耐锑菌株对土壤理化性质影响4.3 锑浓度对菌种生长及其吸附性的影响4.4 耐锑菌株与蒌蒿相互作用对复合污染土壤中锑的影响第五章 耐锑菌株在治理复合土壤污染中的效果评价参考文献致谢前言近年来随着经济的飞速发展，矿产资源受到过度开发，未经处理的工业和生活污水也被大量排放，大气中各种难降解污染物的出现，都使得农用土地受到了极为严重的污染，受到污染的土壤通过与人类的直接接触、与大气圈水汽的交换及粮食等农作物直接或间接地对人类的健康产生了极大的威胁，引起了各社会及各国研究者的广泛关注。按污染物的种类来分，土壤污染物主要包括重金属、非重金属无机污染物、放射性物质、有机污染物等，但在绝大多数情况下这些污染物在土壤中以复合污染物的形式存在，多种污染物的交互作用，不但增强了污染效果，同时也使得污染的机理变得更加复杂，给土壤污染的治理带来了更大的挑战。研究发现复合污染中重金属污染是最主要的1，而污染物中的汞、镉、铅、铬、砷、锑又被合称为“六毒”2物理吸附法、化学反应法和生物修复法是目前治理重金属污染的主要方法，但由于物理方法成本太高、效果过低，化学方法存在二次污染且效果不稳定等因素使得生物修复法在治理土壤重金属污染中备受关注。生物修复法主要是通过种植一些能够吸附重金属离子的绿色植物而达到治理目的，具有较高的安全性、永久性和无污染性等。Sheng等从受重金属Cd污染的土壤中分离出一株可以分泌生物表面活性剂的Bacillus sp.J119菌种，把该菌种接种到50 mg/kg Cd处理的土壤中，结果发现生长在该地中的苏丹草、西红柿及玉米灯植物的地上组织部分中的镉含量增加了39%-70%3；Jiang 将自己分离的菌种Burkholderia sp.J62接种到重金属铅和镉污染的土壤中，结果发现该地种植的作物中铅和镉的含量分别增加了38%-192%和5%-191%4。近来研究表明植物修复过程主要是通过与根际微生物的相互作用而实现的，利用微生物细胞的活性亲和吸附或将重金属离子转化为毒地的其他离子形式的状态从而达到降低污染程度的目的5,6,7。本研究以此为角度在受锑污染的矿区土壤中筛选出一株耐锑菌种,利用该菌种的生物吸附活性修复洞庭湖复合污染土壤中，探讨其修复效果，从而为下一步污染土壤的治理打下坚实的理论基础。本研究工作主要分三部分：第一部分是耐锑菌株的分离和纯化，对分离的菌种进行形态学鉴定，包括每个菌落的大小、形状、颜色、含水状态、菌落透明度、边缘情况以及菌落形成速度，并通过革兰氏染色、荚膜有无、孢子有无等初步判断出分离菌种所在属。第二部分是研究耐锑菌株对洞庭湖复合污染土壤修复效果的研究，包括耐锑菌株对洞庭湖复合污染土壤理化性质的影响，耐锑菌株对污染土壤中锑含量的影响，并通过试验验证耐锑菌株的最佳吸附浓度。第三部分是验证耐锑菌株与蒌蒿相互作用时对污染土壤的修复效果，主要是通过测定接种耐锑菌株后种植蒌蒿对土壤及植物组织中锑含量的影响来验证改菌株的修复效果。本文的主要成果是获得了一株修复效果较优的耐锑菌株，并得出了该菌株对洞庭湖复合污染土壤修复效果的初步评价，但对于该菌株的菌种确定还需要进一步进行理化性质和基因层次的研究；同时摸索如何以最佳工艺扩大培养该菌株并将之应用到整个洞庭湖复合污染土壤的治理中还需要更深层的研究。一、 菌种分离、纯化与鉴定1.1 主要实验器材与试剂1.1.1 主要仪器超净工作台（DF-640 苏州净化；水浴恒温震荡器（SHZ-88A 荣华仪器）；电热鼓风干燥箱（101A-2ET 上海五相）；高速台式离心机（TCL-16G 科学仪器场）；全自动生化培养箱（LRH-150 广东省医疗器械厂）高压灭菌锅（QW-23 荣华仪器）1.1.2 主要培养基及其制备1.1.2.1 牛肉膏蛋白胨固体培养基（即基础培养基，培养一般细菌用）牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂20g，自来水1000ml, pH 7.2-7.4制备方法：称量 按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯；蛋白胨易吸潮，在称取时动作要迅速。溶化 将称好的琼脂放入已溶化的药品中加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达76。反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。过滤 趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利观察结果。分装 按实验要求，将配制的培养基分装入三角烧瓶内，分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。加塞 培养基分装完毕后，在三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。包扎 加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好，用记号笔注明培养基名称和日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称和日期。灭菌 将上述培养基在高温灭菌锅中灭菌，121灭菌20分钟。无菌检查 将灭菌的培养基放入37的温室中培养2448小时，以检查灭菌是否彻底.保藏及使用 将上述已灭菌的固体培养基放至4保藏，使用时取出适量培养基加热融化至液体，然后进行固体或斜面培养基的的制备。注：液体培养基制备方法相同，但成分上没有琼脂。1.1.2.2 LB培养基（培养细菌用）胰蛋白胨10g，NaCl 5g，酵母膏10g，琼脂20g，自来水1000ml, pH 7.2制备方法同牛肉膏蛋白胨培养基1.1.2.3 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（简称PDA，培养真菌用）马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15g，自来水1000ml, pH 7.2-7.4制备方法：马铃薯取去皮后，切成小块，加水煮烂（煮沸20-30min,能被玻璃棒戳破即可），用4层纱布过滤，再加糖和琼脂，加热融化后再补足水分至1000ml。1.1.2主要实验试剂土壤采自锑矿区1.2 实验步骤1.2.1 选择富含锑的矿区，使用采样铲随机采集当地土样，并立即放至密封容器内运回实验室。将获得的土样经研磨后过80目筛，取5g置于100mL、pH7.0的基础培养基中，在培养箱中于25、120rmin条件下培养2d。1.2.2 培养结束后将上述培养液取出静置，取5ml培养液中的上清液均匀涂布在锑质量浓度为100mgL的LB固体培养基上（每升LB固体培养基母液添加200mg锑）， 30下培养48；待菌落形成后选择分离程度较好的单菌落进行平板划线分离培养。1.2.3 将培养后获得的菌落在斜面培养基上进行保种，以备后期菌种检测及扩大培养。1.2.4 按100mgL、150mgL、200mgL、250mgL、300mgL、350mgL梯度逐步提高金属离子浓度进行联系多次富集培养，挑取单菌落，多次纯化，获得纯菌株，观察该菌株形态结构。二、耐锑菌株对洞庭湖复合污染土壤修复研究2.1 主要实验器材氢化发生原子荧光仪（BL215 北京地质仪器厂）；PH计（GW35 上海科技仪器厂）；全自动生化培养箱（LRH-150 广东省医疗器械厂）；高速台式离心机（TGL-16 上海五相）2.2 主要试剂 所需土壤采自洞庭湖复合污染区，土深15cm2.3 实验步骤在洞庭湖复合污染区随机设定三个采样点，在每个采样点表层采集土样0.5Kg，装入采样袋中密封并立即送入实验室进行理化性质分析。对分离纯化的耐锑菌株进行扩大培养，培养使用的培养基为PDA培养基，参数如下：温度30;时间72h;PH为7.2。扩增结束后，利用生理盐水冲洗培养基，使青霉菌的菌丝完全散布在生理盐水中，使用血球计数板对获得菌悬液进行数量上的鉴定，最后使用稀释的方法使菌悬液浓度达到107，然后进行下一步的接种。将上述获得的菌悬液按1%、3%、5%的浓度接种到所采集污染土壤中，室温下（25）培养3天，培养结束后再次对土壤的理化性质进行测定，结果如Table 2将扩增后的菌悬液以3%的接种量接种到不同锑质量浓度（100、200、300、400、500、600、700、800、900，单位为ug/ml）的复合污染土壤中，控制7.0、温度30C、摇床转速120r/min，培养一周后，在高速离心机5000r/min离心5min，取清液测定其剩余锑的质量浓度。三、耐锑菌株与蒌蒿相互作用对污染土壤中锑的修复研究3.1 主要实验器材氢化发生原子荧光仪（BL215 北京地质仪器厂）；PH计（GW35 上海科技仪器厂）；全自动生化培养箱（LRH-150 广东省医疗器械厂）；高速台式离心机（TGL-16 上海五相）；植物恒温培养箱（BW-21 北京科学仪器厂）3.2 主要试剂所需土壤采自洞庭湖复合污染区，土深15cm；蒌蒿种苗购自XX市场；普通花瓶购自上述相同市场3.3 实验步骤在洞庭湖土壤污染区随机设定三个采样点，在每个采样点使用采样铲采集足量土样（约5Kg），装入试验花瓶中密封并立即送入实验室进行栽培实验。对分离纯化的耐锑菌株进行扩大培养，培养方法同上2.3 。实验共分为4组，每组挑取情况均一的蒌蒿种苗，每组3个重复。其中一组为对照组A，不栽培蒌蒿，只接种1%菌液；另外两组均栽种蒌蒿，同时分别接种1%、3%的耐锑菌液，设为C组、D组；B组只栽种蒌蒿，不接种菌液。栽培时间为8周，栽培时每周浇水两次，自然光照，其他条件均接近自然生长条件。实验前对污染土壤中锑含量进行测定，实验中每隔1个月再次测定土壤中锑含量，实验结果后观察每组蒌蒿的生长情况。四、实验结果与讨论.1 分离菌种鉴定对经分离纯化的菌株进行形态学的鉴定，鉴定内容主要包括菌株颜色、是否有菌丝体、是否光滑、是否粘稠、是否隆起、是否易挑取、菌落边缘是否完整、菌落性状菌落直径等，鉴定结果如Table1。Table 1 菌落形态观察记录表形态特征平板一平板二平板三平板四平板五菌落颜色青绿色暗绿色青绿色暗绿色暗绿色表面是否光滑+表面是否粘稠+是否隆起+粘合度弱弱弱弱弱菌落边缘完整完整完整完整完整菌落性状椭圆形椭圆形椭圆形椭圆形近圆形菌落直径1.5mm1.8mm2.0mm1.2mm1.7mm是否有菌丝+注：+代表阳性，是；代表阴性，否 通过对五株所分离纯化菌株的形态学观察，基本判断该菌株形态为：颜色呈暗绿色；表明光滑、粘稠；有隆起、粘合度弱，易挑取；菌落边缘完整、菌落形态呈椭圆形；菌落直径在1-2mm之间；有菌丝体。查阅伯朗名手册将该菌株定为青霉菌。但要具体确定该菌种仍需进一步深入研究，需要对菌种进行生理生化指标和基因层次的鉴定，其中生理生化指标包括革兰氏染色、芽孢染色、荚膜染色；基因的鉴定可通过16s rRNA的测序完成，主要步骤包括总DNA的提取、通用引物的设计、扩增、连接转化、公司测序、上序列比对。4.2 耐锑菌株对土壤理化性质影响通过在复合污染土壤中接种、培养一定浓度的耐锑菌液，测定接种前后土壤理化性质的变化情况，主要包括土质、PH值、有机质浓度、阳离子交换能力（CEC）等，结果如Table 2Table 2 耐锑菌株对土壤理化性质影响（n=3）测定项目接种前1%接种量3%接种量5%接种量质地粘壤土粘壤土粘壤土粘壤土PH7.050.02a7.040.01a7.020.03a6.980.02a有机质（%）4.210.26a4.560.35a4.340.36a4.280.17aCEC（mmol/100g）5.210.26a5.430.26a5.310.26a5.230.26a注：所测数据使用SPSS 18.0分析，显著性水平为P0.05由Table 2可知耐锑菌株的接种不会对污染土壤的理化性质造成变化，结果显示差异不显著，同时接种浓度的变化也不会影响菌株对土壤理化性质的作用。4.3 锑浓度对菌种生长及其吸附性的影响通过测定接种前后复合污染土壤中锑含量的变化，计算出耐锑菌株对不同浓度锑下的吸附率，同时观察菌种的生长的情况，结果如Table 3Table 3不同锑浓度对菌株生长及其吸附性的影响锑浓度（ug/ml）吸附率（%）生长情况10064+20054+30046+40035+50027+6000-7000-8000-9000-+代表生长 代表不生长测定结果显示，随着锑浓度升高，耐锑菌株对锑的吸附能力下降，同时耐锑菌株的生长能力也呈下降趋势，当锑浓度达到600 ug/ml时该菌种的生长完全被抑制，这说明金属锑对微生物的生长（包括耐锑菌株）是有毒害作用的，不同菌种的毒害能力不同。4.4 耐锑菌株与蒌蒿相互作用对复合污染土壤中锑的影响测定种植蒌蒿并接种耐锑菌株前后复合污染土壤中锑含量的变化，计算出耐锑菌株与蒌蒿共同作用对土壤中锑的吸附率，同时观察蒌蒿的生长的情况，判断土壤中锑对蒌蒿的生长的影响，结果如Table 4 和 Figure 1Table 4 不同浓度耐锑菌液与蒌蒿共同作用对土壤锑吸附率的影响试验组A组B组C组D组吸附率（%）21.11.2a56.32.6b73.52.5c72.41.3c注：所测数据使用SPSS 18.0分析，显著性水平为P0.05A组只接种1%菌液；B组只种植蒌蒿；C组1%菌液+ 蒌蒿；D组3%菌液+ 蒌蒿由Table 4和Figure1可知菌株在自然条件下对土壤中锑的吸附能力很低，这可能与土壤中营养物质有限有关；不同浓度耐锑菌液与蒌蒿相互作用对吸附锑的能力影响不大，这说明菌液浓度不会影响菌株与蒌蒿相互作用的能力；接种菌液后蒌蒿对土壤锑的吸附能力增强，说明耐锑菌株通过与蒌蒿相互作用的相互作用可增强蒌蒿对土壤锑的吸附能力。五、耐锑菌株在治理复合土壤污染中的效果评价我国是世界上生产和出口锑产品最多得国家，锑含量也占世界总量的50%以上8，但产量大的同时锑作为一种重金属离子也会给矿区当地土壤带来严重的金属离子污染及复合污染,研究表明锑对生物和人体均具有慢性毒性15，美国及欧洲环保局早已把锑及其化合物列为优先污染物，日本也密切关注锑污染并积极做好防迁移准备14。目前治理复合污染比较理想且研究较多的是生物修复，所谓生物修复，就是指借助某些特殊植物的吸附性和固有微生物调节功能调控并修复污染土壤的过程，这个过程将涉及到一系列的作用机制，包括吸收、氧化还原反应、甲基化等作用。植物根际圈微生物群落组成决定于主生植物的种类，好动型细菌可以快速生长与繁殖，并在生长过程中释放大量分泌物，为植物释放有机基质，如固氮菌与豆科植物是最典型的例子。固氮菌侵入植物组织形成根瘤，固定大气中的N2，固氮根瘤导致植物与微生物种群实现趋化性交流。另外真菌是土壤中另外一组重要的微生物，很多植物通过与这些真菌的联系获得大量营养物质，包括增强对矿物质和H2O的吸收、对病原菌的抗性以及对各不利环境条件的忍耐力等。这主要跟真菌能够分泌分解植物质酶有关，比如木质素酶和纤维素酶等，很多研究学者认为真菌分解的这些酶可以分解有毒物质酚、多环芳烃、氰化物以及重金属离子等9。真菌可以通过多种作用途径影响环境中重金属的活性：1、静电吸附可以将重金属离子吸附到自身细胞表面，降低其生物有效性；2、真菌的氧化还原作用可以改变金属离子的价态，降低其潜在的毒性；3、凝胶吸附作用可以沉淀一部分重金属离子；4、改变金属离子的形态，促进修复植物对金属离子的吸附作用。准确合理使用这些有益真菌，可以有效治理土壤的重金属污染问题。Robinson等从牧草地黑麦中分离出一种Pseudemonas fluorescens, 并进行Cd吸附试验，认为微生物生长条件可影响其对金属离子的吸附作用10-12。张璐9研究认为在砂培条件下，在重金属铅污染环境下丛枝菌根真菌共生能够促进植株对营养元素氮和磷的吸收，促进植株生长，增加菌根侵染率和结瘤率，增强紫花苜蓿抗金属离子铅毒害的能力；蒋培等对镉污染灌溉下萎蒿生长及镉富集特性进行研究，结果表明萎蒿对Cd具有很强的抗性，是一种很好的治理土壤金属污染的生物材料13; 佘玮16等在湖南冷水江锑矿区野外调查采样，分析了土壤中的重金属含量，并通过种植苎麻分析其对锑、镉、鉮和铅 4种重金属的吸收与富集能力，结果证明该植物对复合金属具有一定的耐性，可以作为一种新型修复复合污染的种质资源; 贾莹17等通过向种植油菜的土壤中接种微生物研究了四种细菌对油菜吸收镉能力的影响，结果发现四种菌株中有三株菌株可以使油菜地上部分对Cd的富集量提高，比例分别为26.8%、48.8.%、65.9%，再次证明微生物的添加可以促进植物对复合污染土壤的修复能力，本研究中分离的耐锑菌株添加到生长在污染土壤的萎蒿也得到了同样的效果，所以作为一种新分离的耐锑菌株，它必将在治理洞庭湖复合污染土壤中起着重要作用。参考文献：1 Glick B R (2003) Phytoremediation:synergistic use of plants and bacteria to clean up the environmentJ. Biotechnol Adv, 2003,21:383-393. 2 王海鸥, 徐海洋, 钟广蓉, 等. 根际微生物对植物修复重金属污染土壤作用的研究进展J. 安徽农业科学, 2009, 37(30): 14832-14834.3 Sheng X F, HE L Y, Wang Q Y, et al. Effects of inoculation of biosutrfactant produing Bacillus sp.J119 on plant growth and cadmium uptake in a cadmium-amen-ded soil J. J Hazard Mater, 2008,155:17-224 JIANG C Y, SHENG X F, QIAN M, et al. Isolation and characterieation of a heavy metal-resistant Burkholderia sp. From heavy metal-contaminated paddy field soil and its potential in promoting plant growth and heavy metal accumulation in metal- polluted soil J Chemosphere,2008,72:157-164 5 孙瑞波, 盛下放, 李娅, 等. 南京栖霞重金属污染区植物富集重金属效应及其根际微生物特性分析J. 土壤学报, 2011, 9(5): 1013-1020.6 宋俊波, 程永艳, 李佳. 铅镉胁迫下接种根际细菌和真菌对圆叶无心菜生长和铅镉累积的影响J. 北方环境, 2011, 5(5): 64-66.7 施晓东, 常学秀, 彭丽