氮测定法标准操作规程.doc

辽宁圣元药业有限公司文件编号SOP-QC-124文件名氮测定法标准操作规程版本号03生效日期 年 月 日页码 7 / 7氮测定法标准操作规程签名部门日期起草人质量控制部审核人质量保证部批准人质量负责人文件修订历史序号版本号起草/修订人修订内容概述修订日期1分发给：质量控制部、质量保证部下一次审核时间：目 录 页 码1. 目的.032. 适用范围.033. 责任.034. 内容 035. 参考文献.076. 涉及的文件.077. 附件071. 目的建立氮测定法标准操作规程，保证氮测定的正确操作。2. 适用范围氮测定法。3. 责任化验员执行本操作规程，化验室主任负责监督本规程正确执行。4. 内容4.1 简述4.1.1氮测定法（中国药典2010年版附录 D）适用于含氮有机物的含氮量测定。4.1.2本法系将供试品在硫酸及催化剂作用下，经强热分解使有机氮转化为硫酸铵，再经强碱碱化使氨馏出并吸收于硼酸液，最后用硫酸滴定液滴定，求出氮含量。简述为消化、蒸馏及滴定三步。4.1.3氮测定法分第一法（常量法)与第二法(半微量法），应按该品种项下的规定或具体试验选用。4.2.仪器与器具4.2.1常量定氮仪由500ml凯氏烧瓶、氮气球和冷凝管组成。4.2.1半微量定氮仪由1000ml圆底烧瓶、连有氮气球的蒸馏器和直形冷凝管等组成。4.2.1分析天平感量为0.lmg的天平，适用于精密称取0.lg以上者；感量为0.0lmg的天平，适用于精密称量0.lg以下者。4.2.1消化应用可调压电炉加热。蒸馏可用可调压电炉或电热套加热。4.2.1蒸馏连接用的乳胶管或橡胶管，应用氢氧化钠试液煮20min，洗去碱液后用水煮沸，洗净，晾干。4.3试药试剂均为化学纯。4.3.1硫酸滴定液照中国药典2010年版附录XV F 取硫酸3ml，缓缓注入适量水中，冷却至室温，加水稀释至1000ml，摇匀，制得硫酸滴定液(0.05mol/L)，再定量稀释制成硫酸滴定液（0.005mol/L）。4.3.2甲基红-溴甲酚绿指示液照中国药典附录XV E，取0.1%甲基红的乙醇溶液20ml ，加0.2%溴甲酚绿的乙醇溶液30ml ，摇匀，即得。4.3.3硫酸铜用作消化催化剂；硫酸钾（或无水硫酸钠）用以提高硫酸的沸点，也可将硫酸钾与硫酸铜按10:1比例混合研匀使用。4.4 操作方法4.4.1第一法(常量法）4.4.1.1称样取供试品适量（约相当于含氮量2530mg)，精密称定，置干燥的500ml凯氏烧瓶中。供试品如为固体或半固体，可用定量滤纸包裹加入，也可直接称入。4.4.1.2消化在凯氏烧瓶中依次加入硫酸钾(或无水硫酸钠)10g和硫酸铜0.5g，再沿瓶壁缓缓加入硫酸20ml；若瓶颈上有少量供试品黏附，可用硫酸冲下（保证样品在硫酸液面以下）。加玻璃珠或沸石23粒，在瓶口置一小漏斗并使烧瓶成45斜置，用可调压电炉缓缓加热，此时烧瓶内物质炭化变黑、溶解；继续使溶液的温度保持在沸点以下，等泡沸停止，消化液由黑色渐变棕色时，强热至沸，俟溶液成澄清的绿色后，除另有规定外，继续加热30min，放冷，沿瓶壁缓缓加水250ml，摇匀，放冷。4.4.1.3蒸馏沿瓶壁加40%氢氧化钠溶液75ml，使流至瓶底自成一液层，加锌粒数粒，用氮气球将凯氏烧瓶与冷凝管连接(氮气球可防止碱液溅入硼酸吸收液）。另取2%硼酸溶液50ml，置500ml锥形瓶中，加甲基红-溴甲酚绿指示液10滴，将冷凝管尖端浸入硼酸溶液的液面下；轻轻摇动凯氏烧瓶，摇匀（防止温度骤然变化引起硼酸接收液倒吸），加热蒸馏（蒸馏时不宜泡沸过高，以免溅满氮气球），蒸至接受液的总体积约为250ml时，将冷凝管尖端提出液面，使蒸汽冲洗约lmin，用水淋洗尖端，停止蒸馏。（蒸馏过程中不可突然降低温度，以免硼酸吸收液倒吸。）4.4.1.4滴定馏出液用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定结果用空白试验（空白馏出液的容积应与供试品所得镏出液的容积基本相等）校正。每lml的硫酸滴定液(0.05mol/L)相当于1.401mg的N。4.4.1.5空白试验照供试品消化、蒸馏、滴定的全过程，以相同条件下做空白试验，用硫酸滴定液(0.05mol/L)滴定至相同的终点，其读数用于校正供试品滴定的读数。4.4.2第二法(半微量法）4.4.2.1称样取供试品适量（约相当于含氮量1.02.0mg)，精密称定，置干燥的3050ml凯氏烧瓶中。供试品如为固体或半固体，可用定量滤纸包裹加入，也可直接称入。4.4.2.2消化在凯氏烧瓶中加硫酸钾（或无水硫酸钠）0.3g与30%硫酸铜溶液5滴，再沿瓶壁用吸管滴加硫酸2.0ml，并加玻璃珠12粒，在烧瓶口置一小漏斗，并使烧瓶成45斜置，用小火缓缓加热使消化液保持在沸点以下，并使小火保持在液面下，等泡沸停止，溶液由黑色变为棕黄色时，逐步加大火力强热至沸，俟溶液成澄明的绿色后，除另有规定外，继续加热l0min，放冷，加水2ml，放冷。4.4.2.3蒸馏按中国药典附录 B附图连接蒸馏装置，A瓶中加水适量与甲基红指示液数滴，加稀硫酸使成酸性，加玻璃珠或沸石数粒。将连有氮气球的蒸馏器和直形冷凝管用水加热蒸气淋洗，并使水自冷凝管尖端反冲洗涤23次，从加样品口淋洗1次，洗涤液排出蒸馏管。取2%硼酸溶液10ml，置100ml锥形瓶中，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液5滴，将冷凝管尖端浸入液面下；将凯氏烧瓶中已消化的内容物经漏斗移入连有氮气球的蒸馏器中，用水少量淋洗凯氏烧瓶及漏斗23次，每次约35ml，再加入40%氢氧化钠溶液10ml，用水少量洗涤漏斗1次，关闭漏斗（加少量水封闭出口），进行蒸馏（蒸馏时不宜泡沸过高，以免溅至氮气球），至硼酸液由酒红色变为蓝绿色起，继续蒸馏约l0min，将100ml锥形瓶下移至冷凝管尖端提出液面，使蒸气继续冲洗约lmin，用水淋洗尖端后停止蒸馏。4.4.2.4滴定馏出液用硫酸滴定液（0.005mol/L)滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定的结果用空白试验（空白馏出液的容积应与供试品所得馏出液的容积基本相等）校正。每lml的硫酸滴定液(0.005mol/L)相当于0.1401mg的N。4.4.2.5空白试验照供试品消化、蒸馏、滴定的全过程，以相同条件下做空白试验，用硫酸滴定液(0.005mol/L)滴定至相同的终点，其读数用于校正供试品滴定的读数。4.5注意事项4.5.1消化过程应在通风橱中进行。4.5.2蒸馏装置连接后应严密。4.5.3消化时，若发现瓶壁上有黑点，可适当转动烧瓶，使硫酸回流时将黑点洗下，以保证消化完全。4.5.4消化液应放冷后，再沿瓶壁缓缓加水，防止供试液局部过热爆沸，冲出瓶外。4.5.5蒸馏过程中若无黑色CuO析出，说明加入碱量不足，应补足碱量或重做实验。4.5.6配制40%氢氧化钠溶液时，宜边加振摇，避免未溶解部分沉积于容器底部而难于溶解。4.5.7约80%以上的氨在最初12min内蒸出，初蒸速度不宜太快，以免氨蒸出后未能及时被吸收而逸失。4.5.8锥形瓶加入硼酸溶液和指示剂后应显酒红色；如显绿色，说明锥形瓶有碱性物质污染。4.5.9蒸馏出的氨接收液应尽快滴定，避免放置时间过长，影响测定结果。4.6 记录与计算4.6.1记录应记录天平型号及室温和相对湿度，供试品与试药的名称、规格及取用量，滴定液的名称（可用盐酸滴定液），F值及消耗量（ml）。4.6.2计算含氮量X%= 100%式中 T为滴定度，mg；Vs与V0分别为供试品与空白滴定时硫酸滴定液消耗的体积，ml；F为滴定液的F值；W为供试品的重量，mg。供试品应测定2份，常量定氮的相对偏差一般不得过0.5%，半微量定氮的相对偏差一般不得过1.0%，空白2份，极差不得大于0.05ml。4.7 附注4.7.1取用的供试品如在0.lg以上时，应适当增加硫酸的用量，使消解作用完全，并相应地增加40%氢氧化钠溶液的用量。4.7.2酰胺碱性水解法不属于本测定法范围。4.7.3空白值常为0.020.3ml，空白值为