银杏叶提取物对小鼠脑缺血能量代谢的影响.doc

银杏叶提取物对小鼠脑缺血能量代谢的影响第-ACad军l艺硬C大学.570.MilMed学报_，了。;一，1996L随C布16(6)t570571、沪吕1.甲银杏叶提取物对小鼠脑缺血能量代谢的影响孙建新顾洪王挥摘要通过测定断头小鼠脑，卜腺背三磷酸(ATP)、磷酸肌酸(PC)及乳酸(1.A)含敏，观察银杏叶提取物对脑缺血能量代谢的影响。结果表明，小鼠断头305后，脑ATP、PC含从明显降，LA含缺显著增加;口服银杏叶提取物能减轻小鼠脑缺血时ATP、PC的减少及LA的增加。提示银杏叶提取物;叮减少脑缺血时脑组织耗能。关健词银杏叶;提取物;腺背三磷酸;磷酸肌酸;乳酸;小鼠中国图书资料分类法分类号R2855EffectofginkgobilobaLextractonenergymetabolismofisehemicbraininmiceSunJianxin，GuHong，Wanghui(DepartmentofSeieneeandReseareh，SeeondMilitaryMediealUniversity，Shanghai，200433)AbstractTheeffeetsofGinkgobilobaL(GK)extraetonenergymetabolismofisehemiebrainwerestud-iedbymeasuringtheeontentsofadenosinetriPhosphate(ATP)，phosPhoereatine(PC)andlaetieaeid(LA)inthemouseisehemiebrainindueedbydeeapitation.TheresultsshowedthattheeontentsofATPandPCinmousebrainredueedwhilethatofLAinereasedafter305isehemiaindueedbydecaPitat沁n.GKextraet(19)beforedeeapitationeouldalleviatethereduetionofATPandPCandtheaeeumulationofLAinmousebrainTheseresultssuggestGKextraet15effeetiveinamelioratingtheenergyexhaustioninthe15-ehemiebrain.KeywordsginkgobilobaL;extraet;adenosinetriphosphate;phosphoereatine;laetieaeid;而ee银杏叶提取物具有扩张脑血管、增加脑血流量、抑制血小板聚集、抗自由基等功能，是治疗脑缺血的重要药物lj。本研究旨在观察银杏叶提取物对小鼠脑缺血时腺昔三磷酸(ATP)、磷酸肌酸(Phosph。-ereatine，PC)和乳酸(Laeti。aeid，LA)的影响，为临床用药提供一定的理论依据。材料和方法1.1药物银杏叶提取物(黄酮贰含量25.6%，内脂含量6.1%，上海天工植物制品厂);ATP、腺昔二磷酸(ADP)及磷酸肌酸激酶均为Sigma公司产品，虫荧光酶和虫荧光素粗产物为本校生物化学教研室陈克明教授惠赠;其余均为国产分析纯试剂。1.2动物昆明种小鼠，体重20士19，山本校实验动物中心提供。1.3分组正常对照组:小鼠不断头整体投入液氮中;脑缺血组:小鼠耳后断头，头颅在室温(26)停305后投入液氮;缺血组又分为给药组(动物缺血前连续7d口服银杏叶提取物60mg/kg及120mg/kg，末次给药后30min断头)和缺血对照组(予等量生理盐水)。1.4脑组织的提取从液氮中取出脑后，立即用小刀挖取单侧大脑半球，称重100mg左右，将脑组织置乳钵(冰浴)中粉碎，用过氯酸提取。1.5ATP、PC含址测定按文献2、3方法进行。ATP标准曲线浓度范困为5X10一s5拌molL一，取用20mmolL一Tris一HCI(pH7.8)稀释100倍的组织提取液200川，置比色杯中，放入SHG型生物发光测定仪中，记录本底。然后注入0.8ml虫荧光酶一虫荧光素粗提取物0.69L一，。1min记录发光值，计数时间为65，从标准曲线计算每克湿作者单位第二军医大学科学研究处，上海，2。433;解放军第414次院神经内科，南京，210015第二军医大学学报1995块e;16(6)一571组织中ATP的微摩尔数。PC标准曲线浓度为sx10一一5拌molL一，比色杯中内含组织样品稀释液200拌l，044mxnol.L一ADPS拌l，置发光仪中记录本底。再加入2.7IU磷酸肌酸激酶，408后再加入0.8ml虫荧光酶一虫荧光素粗提物0.69L一，1min记录发光值，记数时间为65，从标准曲线上计算PC值，再减去提取液ATP值，即为样品PC的含量。1.6LA含量的测定采用分光光度法，参照文献4方法进行。2结果2.1小鼠脑缺血后脑组织ATP、PC和LA含量的改变小鼠脑缺血305后，脑组织中ATP和PC含量均较正常对照组显著下降(尸0.01)，而LA含量则较正常对照组明显升高(p0.01)(附表)。附衰银杏叶提取物对小民脑缺血后脑组织ATP、PC和LA含t的影响T皿bEff侧比ofGKP(:.ndLAinextract011CotltentSofATP，口.Ou吕e肠e卜emlebrai.(王士，。=一o.c/mgkg一)GrouPATP死可能是继发于这种能量代谢衰竭。实验表明，沙土鼠脑缺血smin后，检测脑组织ATP已全部耗竭sj.因此ATP在脑组织代谢中的重要地位，越来越被吸视。ATP是一游离的核昔酸，是维持神经细胞膜和脑组织功能的不可缺少的高能物质。本实验观察r见明小鼠断头305后脑匀浆ATP、PC和LA的含量变化。发现缺血对照组与正常对照组相比其ATP、PC含量明显下降，LA明显!:升(尸0.01)。银杏叶提取物组与缺血对照组相比，ATP、PC均有明显增加，LA则有明显卜降(尸o01)。我们的实验结果与Coldberg报道相似。但LA的改变出现得更早和更明显，说明脑组织在缺血时氧化代谢受到障碍，脑内可利川氧耗尽，一三按酸循环停止，ATP生成减少，ATP储存迅速耗竭，故只能通过加速细胞无氧代谢产生能量来补偿脑组织，此时无氧代谢终产物LA在体内堆积，造成乳酸酸中毒，LA堆积是缺血时脑细胞拟伤的病理机制之一。银杏叶提取物能够增加脑缺血时脑组织ATP和PC的含量，降低LA的含量，说明银杏叶提取物对脑缺血有明显的保护作用。参考文献NornaleontmlIsehemieeontrolGK60mgkg一iGK120mg.kg一l3.1士0。80.5士0.21.2士0.2二1.4士0.3二2.4士1.13.2士0.51.2士0.46.8士0.9“.1.8士0.2二5.2士1.02.0士0.3二4。6士0。8GK:Gink即bilohaL;公赞P0.01t，snormaleontrol;P0.01t，sisehemiecontrol2.2银杏叶提取物对脑缺血组织ATP、PC和LA含量的影响预先口服银杏叶提取物60mgkg一或120mgkg一的小鼠，脑缺血308后测得脑组织中ATP和PC含量均较缺血对照组明显增高(P0.01)，而LA含量则明显降低(尸0.01)(附表)。提示口服银杏叶提取物可减轻小鼠脑缺血时ATP、PC的减少及LA的增加程度。3讨论1周君富.天保宁的抗氧自由丛的损伤作用.中成药，1994.16(4)，322Jab:CM.PerrellWJ.RobbHJ.MierodeterminationofplasxnaATPandereatinephosPhateeoneentrationwithalumineseencebiomrer.CI三nChem，1977;23(12):225431_undinA，RiekardssonA，ThoreA.ContinuousmonitoringofATP一eonvertinyreaetionsbypurifiedfireflyeueiferase.AnalBiochem，1976075(2):6114董丽萍，王天佑，张莉等.美西津和苯妥英对小鼠缺氧和脑缺血的保护作用.中华神经外科杂志，1990.6(增刊)，265MunektaK.HossrnannKA.Effeetofs一而nuteisehe而aonre-gionalPHandene堪ystateofthegerhilbrainrelationtoselectivevulnerabilityofHip侧)camPus.Stroke，1