银屑病患者外周血白细胞磷酸二酯酶活性检测及临床意义.doc

涵草堂去黑头收缩毛孔官网：银屑病患者外周血白细胞磷酸二酯酶活性检测及临床意义 银屑病是一种常见的慢性复发性炎症性皮肤病,青壮年多发,对患者的身体健康和心理影响较大。环磷腺苷酸(cAMP)和环磷鸟苷酸(cGMP)是细胞内重要的第二信使,在各种细胞外信号如激素、自体活性物质和神经递质引起的生物学反应中起重要作用。磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDEs)是一个催化cAMP和(或)cGMP水解的超家族酶系,是细胞内降解环核苷酸的惟一途径,对调节细胞内cAMP和(或)cGMP水平起关键作用。目前发现PDEs家族中有PDEs111个不同的成员,它们在结构、牛物化学和药理学特性上互不相同。本研究利用高效液相色谱法(HPLC)测定银屑病患者及正常健康人外周血白细胞PDEs活性,探讨PDEs活性与银屑病的关系。1 对象和方法1.1 研究对象 银屑病患者共50例,均为解放军306医院门诊和住院患者,入选时间为10年10月2011年2月,符合文献诊断标准。50例患者中男26例,女妍例,平均年龄3810岁,平均病程118年(30d50年);稳定期16例,进展期2例,消退期12例。健康对照者60名,均为正常健康体检者,入选时间为2011年2月,男32例,女28例,平均年龄305岁,两组间性别、年龄无统计学差异。12 材料1.2.1 仪器与试剂 高效液相色谱仪,Olymus AU600全自动生化分析仪。试剂:甲醇(一级色谱纯,北京泽平科技公司);cAMP、cGMP、5AbIP、5CMP、腺苷、次黄嘌呤和腺嘌呤(北京泽平科技公司)。1,2.2 色谱条件 色谱柱为Nova PakC18柱(3,9mm150mm,4um),流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(1090,v/v);流速为11111/lllin,柱温为室温;检测波长为254nm。13 方法1.3,1 人外周血白细胞分离 抽取患者及对照者静脉血3m1,肝素抗凝,加入6%右旋糖酐,轻轻混匀后室温下静置30m血,小心吸取富含白细胞的上清液。取上清液可溶部为酶样品,置于”0保存。13.2 PDEs活性的测定 PDEs活性测定采用双管法。酶反应在含Mg2+、Ca2+的PBS溶液中进行,测定管中包括cAR/IP1mol,酶样品10,反应液总量0.2ml。反应开始加入底物或酶,反应液中加入灭活酶样品为对照管。置37震荡式水浴孵育10min,100C加热3min以终止反应,反应液在HPLC进样。血清中PDEs活性以底物水解百分率表示:(对照管底物浓度一测定管底物浓度)/对照管底物浓度100%。1,3.4 标准曲线的绘制 取cANlP标准品溶于DPBS中,配制成浓度为1、2、4、6、8、10lllllol/L,于相同条件下进行测定,以浓度C为横坐标,CAMP的峰高RH为纵坐标,cAMP的标准曲线方程为RH=00828C-00126 (=0.99974)。1.3.5 统计学方法 采用SAs进行分析。结果用均数标准差sl表示,两组间比较采用两样本均数r检验,用L吧istic回归分析确立独立危险因素。2 结果2,1 银屑病患者与健康对照者外周血白细胞PDR活性比较银屑病患者外周血白细胞PDEs活性均数明显高于健康对照组,两者比较差异有统计学意义(P0.05);进展期银屑病患者PDEs活性最高。2.2 外周血PDEs活性与银屑病的关系 Logistic回归分析表明,经排除年龄、性别等因素后,外周血中PDEs活性与总体银屑病的发生具有相关性(P0,05);其中与银屑病进展期相关性较强(P0.05)。3 讨论 银屑病是一种常见的慢性炎症性皮肤病,以表皮过度增生和真皮慢性炎症为特征,其发生与遗传、免疫等多种因素相关。多数学者认为,T淋巴细胞介导的细胞免疫在银屑病皮损的发生及发展中起重要作用凹。在较早的银屑病治疗中,PDEs抑制剂氨茶碱治疗银屑病取得明显疗效。以往的研究认为,PDE4在T淋巴细胞的活化增生中起重要作用,PD可以增强该效应。而目前更多研究表明PDE7在T淋巴细胞活化增生中发挥了重要作用,PDE4对调节T淋巴细胞中的cAMP水平只是起一个补充作用。研究人员用PDE7的反义核苷酸抑制PDE7的诱导作用,发现共刺激时T淋巴细胞的增生和-2的产生减少了80%,说明PDE7在诱导T淋巴细胞增生中起重要作用,提示选择性PDE7抑制剂是治疗T淋巴细胞反应异常性疾病的新靶点囵。 对50例银屑病患者和名健康人外周血白细胞进行检测,银屑病患者比健康对照者PDEs活性增强。银屑病进展期PDEs活性明显高于健康对照者及银屑病稳定期及消退期患者,提示PDEs活性升高与银屑病的病情进展有关,是银屑病发生、发展的一个重要影响因素,而与银屑病稳定期及消退期可能无相关性。探索银屑病的发生、发展与其白