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一、单选题1.在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（ B ）AI类限制酶 B. II类限制酶 C. III类限制酶 D.核酸内切酶 E. RNAase2.下列关于同裂酶的叙述错误的是( B )是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。 它们的识别序列完全相同。 它们的切割方式可以相同，也可以不同。 有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。 两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。3. 多数限制酶消化DNA的最佳温度是（ A ） A. 37 B.30 C.25 D.16 E.334. 下列关于限制酶的叙述错误的是( B )A. I类限制酶反应需要 Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。B. II类限制酶反应需要Mg2+、ATP。C. III类限制酶反应需要Mg2+、ATP，S-腺苷蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。D. I、III类限制酶对DNA有切割和甲基化活性，II类限制酶对DNA只有切割活性而无甲基化活性。E. II类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。5. 如果一个限制酶识别长度为6bp ,则其在DNA上识别6bp的切割概率为( D ) A. 1/44 B. 1/66 C. 1/64 D.1/46 E. 1/1066. 多数II类限制酶反应最适PH是 ( C ) A. PH:2-4 B. PH:4-6 C. PH:6-8 D. PH:8-10 E. PH:4-107. 下列关于限制酶反应的说法错误的是 ( D )A. 限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。B. 许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。C. 有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。D. 限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。E. BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的BSA。 8. II类限制酶反应中必须的阳离子是（ C ） A. Na + B. Ca2+ C. Mg2+ D. Zn2+ E. Mn2+9. RFLP形成的原因是 （ A ）A. 由于遗传变异造成同源染色体中碱基的随机变化。B. 使用不同的限制性内切酶进行切割。C. 杂交时使用不同的探针。D. 每种染色体存在两条。E. 提取不同的染色体DNA酶切。10. 下列关于限制酶命名的表示方法，正确的是（ E ） A. Sau.3A I B. B.amH I C. pst I D. Ecor I E. Hind III11. 需进行DNA部分酶切时，控制下列哪种条件最合适（ D ） A. 反应时间 B. 反应体积 C. PH D. 限制酶量 E.反应温度12. 下列酶在反应中不需要ATP的是( D ) A. EcoK B. T4DNA连接酶 C. BamH I D. EcoB E. DNA pol I13. 限制性内切酶可特异性识别 ( B ) A. 双链DNA的特定碱基对 B. 双链DNA的特定碱基序列 C. 单链RNA的特定碱基序列 D. 单链DNA的特定碱基序列E 双链RNA的特定碱基对14. 下列与RFLP相关的一条是( D )A. 不同限制酶在单个染色体DNA上的限制性图谱。B. 两种物种个体间的限制性图谱。C. 同一个体等位基因的限制性图谱。D. 同一物种不同个体的限制性图谱。E. 非同源染色体用同种限制酶切形成的限制酶图谱。15 限制酶的星号活性是指在非正常条件下，限制酶（ A ）A. 识别和切割序列发生变化。B. 切割活性大大提高。C. 识别和切割序列与原来完全不同。D. 可以任意切割DNA。E. 只能部分切割DNA。二、多选题1. 下列因素中影响限制酶切割的有( A,B,C,D,E) A. EDTA浓度 B. 甘油浓度 C. DNA纯度 D. 酶的自身活性 E. 盐浓度2. 限制酶反应中出现星活性的可能原因是（A B D E） A酶浓度太高 B 低盐 C 盐浓度过高 D 高PH E 甘油浓度5%（V/V）3 限制酶切割后的DNA电泳得到的电泳条带有些扩散，可能原因是（B，C，D，E） A酶失活 B 有蛋白质与DNA结合 C 酶切条件不合适 D 有外切核酸酶污染 E 星号活性4 下列有关回文序列的描述正确的是（A，B，C） A 是II类限制酶的识别序列 B 是某些蛋白的识别序列 C 是基因的旁侧序列 D 是高度重复序列 E 是卫星序列5 下列有关回文序列的一般特征正确的是（B，C，D，E） A 可增强基因表达 B 有对称轴 C 是自我互补的序列 D 两条链从5 3方向的序列一致 E 是II类限制酶的识别序列6 关于II类限制酶说法正确的是（B，D） A 具内切核酸酶和甲基化酶活性 B 仅有内切核酸酶活性 C 只识别非甲基化的DNA序列 D II类限制酶反应条件只需要Mg2+ E II类限制酶反应需要Mg2+,ATP7通过限制性片段分析，可对等位基因进行精确比较是因为（B，C） A 限制酶只切割两个变异等位基因中的一个 B 限制酶位点可作为遗传标记 C 它不依赖变异的等位基因的产物的功能 D 不同组织等位基因的核苷酸序列存在差异 E 同一组织等位基因核苷酸序列不会完全相同8. 下列关于II类限制酶的叙述正确的是（B，C，D，E） A 它既有内切酶的活性，也有外切酶活性 B 在特异位点对DNA进行切割 C 同一限制酶切割双链DNA时产生相同的末端序列 D 有些限制酶切割双链DNA产生粘末端 E 有些限制酶切割双链DNA产生平末端9 限制酶反应结果若显示没有切割，可能原因是（A，B，C，D，E） A 限制酶无活性 B 存在抑制剂如SDS，EDTA C DNA不纯 D 缓冲液组成不合适 E DNA甲基化10下列关于限制酶的叙述正确的是（B，C，D） A 在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他限制酶就不能切割了。 B 限制酶在DNA中的识别/切割位点的二、三级结构影响酶切效率。 C 如果限制酶的识别位点位于DNA分子末端，那么接近末端的程度也影响切割。 D 已知某限制酶在一环状DNA上有3个切点，因此该酶切割这一环状DNA，可得到3个片段。 E 能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中没有该酶识别的序列。11酶在储存过程中迅速失活，可能原因是（A，B，C，E） A 储存温度不合适 B 稀释后储存 C 储存缓冲液不合适 D 分装后储存 E 储存缓冲液中蛋白浓度低12限制酶切反应结果显示为部分切割，可能原因是（A，B，C，D，E） A 限制酶失活 B 有抑制剂如SDS，EDTA等存在 C 反应条件不合适 D DNA不纯 E DNA结构（线形或超螺旋）的影响13如果用限制酶切割DNA后得到的片段比预期的多，可能原因是（B，C，E） A 限制酶失活 B 限制酶的星号活性 C 有其他限制酶污染 D 有抑制剂存在 E 测试DNA中有其他DNA污染14限制酶切割后的产物连接反应效果差，可能原因是（A，B，C，E） A限制酶去除不完全 B 平端连接 C 核酸外切酶污染 D连接反应温度低于16 E从限制酶消化中带来太高浓度的磷酸盐或其他盐类15下列限制酶属同裂酶的是（A，B，D，E） ABamHI GGATCC Sau3AI GATC CCTAGG CTAGB Sal I GTCGAC Xho I CTCGAG CAGCTG GAGCTCC BamH I GGATCC EcoR I GAATTC CCTAGG CTTAAGD. Hpa II GCGC Msp I CCGG CGCG GGCCE. Xba I TCTAGA Nhe I GCTAGC AGATCT CGATCG7一长为4.2kb的DNA片段，分别用EcoRI、PstI及EcoRI+PstI消化，电泳结果如下图所示，请根据结果绘出该片段限制性图谱 0.7kb0.7kb 0.8kb1.5kb 1.4kb 2.0kb2.0kb 2.8kb EcoRI Pst I EcoRI + Pst I答： EcoRI PstI EcoRI 0.7kb 0.7kb 0.8kb 2.0kb回收与连接一单选题1用DEAE膜片法回收电泳分离的DNA片段时，在紧靠目的DNA片段前方的凝胶切一裂缝，以插入DEAE纤维素膜，该裂缝长度与DNA条带相比应（C）A 略短 B. 等长 C. 略长 D. A或B都可 E . A、B、C都可2用透析膜插片凝胶电泳法回收DNA片段时，再区带前挖一小槽，将透析膜置于槽中，这时应注意（B）A透析膜要接触DNA区带一侧的胶缘 。B透析膜不能接触DNA区带一侧的胶缘 。C透析膜要接触DNA区带相对一侧的胶缘 。D透析膜不能接触DNA区带相对一侧的胶缘 。E随意插入槽中即可。3在回收DNA片段时，观察电泳结果为尽量减少对DNA的照射损伤应使用（A）A长波长紫外 B. 短波长紫外 C . 长波长红外 D. 短波长红外 E. ABCD都不可4DNA回收时，如要除去EB（溴化乙锭）可用下列那种试剂（ A ）A正丁醇 B. 苯酚 C. 氯仿 D. 异戊醇 E. 乙醇5在DNA分子克隆时，常用到部分填补法，填补时应注意（ E ）A控制反应温度 B. 控制酶的反应时间 C. 控制DNA聚合酶的用量D. 控制反应PH E. 限制dNTP的种类6下列关于平末端连接的说法正确的是（ B）A 同等条件下连接效率高于粘末端连接的连接效率。B 加入凝聚剂PEG8000可促进平末端连接。C 平末端连接时反应温度要比粘末端连接温度高。D 平末端连接方法的使用仅限于酶切后产生的两个平末端之间的连接。E 平末端连接比粘末端连接更易产生自身环化。7用同一种酶切割载体和目的基因后进行连接，连接产物会含大量自身环化载体，采用下列哪种酶处理，可防止自身环化（ E ）A核酸内切酶 B. 核苷酸激酶 C. 核酸外切酶 D. 末端转移酶 E. 碱性磷酸酶8分子克隆中用T载体主要是与下列哪种产物连接（ D ）A单酶切产物 B. 双酶切产物 C. 同裂酶产物 D. PCR产物 E. 酶切后形成的平末端产物9采用BamH I单切载体和目的基因后，进行重组连接前要（ D ）A 65处理10分钟使BamH I灭活。B 用碱性磷酸酶处理载体防止其自身环化。C 电泳检测酶切结果。D A、B、C都正确。E 只有A、C 正确。10粘末端连接的优点是操作简便且（ C ）A可产生新的酶切位点 B. 载体易自身环化 C. 易于回收片段D具有方向性 E. 选时更简便二多选题1重组连接时，反应体系必须的组分有（ A、C）AMg2+ B. BSA C. ATP D. PO43- E . EDTA2DNA片段重组连接可用下列哪些方法（A、B、C、D、E）A平末端连接 B. 粘末端连接 C. 加接头连接 D. 同聚尾连接E . T载体连接3酚抽提法回收DNA片段后残余的哪些物质可能会影响连接反应（A、C）A酚 B.微量的EB C.琼脂糖 D. 少量的乙酸钠 E .少量的乙醇4产生平末端的方法主要有（A、B、E）A用产生平末端的限制酶切 。B用klenow片段补齐5粘末端。C用末端转移酶补齐粘末端。D用Taq聚合酶补齐粘末端。E用S1核酸酶降解粘末端。5在DNA重组连接时，常采用连接头连接（linker ligation），其作用是（A、B、C、E）A引入某些限制酶切位点。 B. 人工构建载体。C增加调控元件。 D. 调整阅读框。E通过接头引入与目的基因相同的限制酶位点，并对目的基因相应酶切点进行甲基化修饰保护，可保护目的基因不受限制酶破坏。6构建载体时，使用双酶切相对于单酶切的优点在于（A、B、C、D）A避免载体自身环化 B. 提高连接效率 C. 控制外源基因的插入方向D. 便于转化后的筛选 E . 便于修改阅读框7下列关于同聚物加尾法的说法正确的是（A、B、C、D、E）A其核心是利用末端转移酶的功能，将载体和外源DNA的3端再加上一端寡核苷酸。B不易自身环化。 C. 连接效率高 D. 适用于CDNA克隆E可能会产生某种限制酶切位点。8下列与DNA重组连接相关的说法正确的是 （A、D、E）A不匹配的粘末端可通过部分填补后连接。B 同聚尾法连接不仅连接效率高，也易回收插入的片段。C限制酶切割DNA后加入EDTA-SDS终止液抑制限制酶活性，将有利于重组连接。DMg2+-ATP是T4DNA连接酶反应时的必须因素。E平末端连接时，在反应体系中加入适量凝聚剂可提高连接效率。9下列哪些因素对保证较高连接效率是有利的（A、C、D）A高纯度DNA。B载体与目的基因摩尔数之比为1：1。C载体与目的基因摩尔数之比为1：35。D连接反应体系中DNA浓度较高。E连接反应体系中DNA浓度较低。10如果DNA分子重组时，需要用平端连接，下列哪些方法可形成平末端（B、C、D、E）。A3突出的粘末端用DNA聚合酶加dNTPs填平。B3突出的粘末端用核酸酶切平。C5突出的粘末端用DNA聚合酶 加dNTPs填平。D5突出的粘末端用核酸酶切平。E利用切口为平末端的限制酶。一单选题1下列哪种DNA结构在转化时能获得最高转化效率（ ）A线形双链DNA B. 单链线形DNA C. 完整的环状双链DNAD开口环状双链DNA E. A和C2下列表型中，哪种是基因工程上的理想的受体菌表型（ B ）A. r+m+rec+ B. r-m-rec- C. r- m+rec+ D. r+m+rec-E. r-m-rec+3大肠杆菌出现感受态的生理期是 （ B ）A潜伏期 B. 对数期 C. 对数后期 D. 平衡期 E. 衰亡期4CaCl2法制备E.coli感受态细胞时，摄入温度是（E ）A0 B. 16 C. 37 D. 25 E. 425关于感受态细胞的下列说法不正确的是（ C ）A有人工感受态细胞和自然感受态细胞。B具有可诱导性。C有可转移性。D不同种细菌出现感受态的生理时期不同。E不同种细菌出现感受态的比例不同。选择题1.关于PCR扩增停滞的原因有很多种，但下列各项中（B）项不是主要原因。A.底物（模板）过剩 B.dNTP的大量消耗 C.产物的聚集 D.非特异性产物的竞争性抑制2.Clark作了一个有趣的实验，发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板，在双链DNA的末端加一个碱基，主要是加（B）A. dGTP B.dATP C.dCTP D.dTTP3.有简并引物的3端尽量使用具有简并密码的氨基酸，这是因为（A）A. TaqDNA聚合酶具有一定的不精确性 B.便于排除错误碱基的掺入 C.易于退火 D.易于重组连接4.PCR实验的特异性主要取决于（C）A.DNA聚合酶的种类B.反应体系中模板DNA的量C.引物序列的结构和长度 D.四种dNTP的浓度E.循环周期的次数5.有关PCR的描述下列哪项不正确：（D）A.是一种酶促反应B.引物决定了扩增的特异性C.扩增的产量按Y=m(1+X)nD.扩增的对象是氨基酸序列E.扩增的对象是DNA序列6.有关PCR的描述下列哪项正确：(ABC)A.polymerase chain reaction的字首缩写B.1993年获诺贝尔化学奖C.已广泛的应用于医学各学科D.能够准确对扩增模板定量E.以上都对7.PCR反应产物的特异性取决于(E)A镁离子浓度 B退火温度 C引物碱基组成和长度D循环次数 E.A+B+C3.何谓简并引物？简并引物设计的一般原则是什麽？答：简并引物是指根据肽链的氨基酸序列（或部分序列），并充分考虑密码子的简并性而设计的，用于PCR扩增的混合引物之间具有不同的碱基组成，但碱基数量是相同的。由于充分考虑了密码的简并性，在这种混合引物中必定有一种引物可以和该基因的DNA序列精确互补。 简并引物设计的一般原则是：（1） 选择保守区设计简并引物；（2） 选择简并性低的氨基酸密码区设计引物；（3） 注意密码的偏爱性；（4） 使用尽可能短的引物，以降低简并性，最短可用1520个碱基。（5） 由于TaqDNA聚合酶在PCR扩增时容易掺入错误碱基，所以设计的引物，其3端尽量使用具有简并密码的氨基酸。4.在古生物学中，尚不知道恐龙是否是温血爬行动物，而不像今天的变温爬行动物。假如你得到一些恐龙的DNA，你如何通过PCR和基因克隆来检测恐龙是否是温血爬行动物？答：用PCR扩增恐龙的高度保守的酶的基因，然后将扩增的DNA克隆到大肠杆菌表达载体，每可能被合成。然后测定酶的最适温度和热的稳定性并与相应的温血动物（如鸟类）进行比较。来自于冷血动物的酶与来自于温血动物的酶相比，温血动物最适的温度范围较宽。选择题1.基因组是：（D）A一个生物体内所有基因的分子总量 B一个二倍体细胞中的染色体数C遗传单位D生物体的一个特定细胞内所有基因的分子总量2.下列关于酵母和哺乳动物的陈述哪些是正确的？（ABD）A大多数酵母基因没有内含子，而大多数哺乳动物基因有许多内含子B酵母基因组的大部分基因比哺乳动物基因组的大部分基因小C大多数酵母蛋白比哺乳动物相应的蛋白小D尽管酵母基因比哺乳动物基因小，但大多数酵母蛋白与哺乳动物相应的蛋白大致相同3.下列哪些基因组特性随生物的复杂程度增加而上升？（ABD）A基因组大小B基因数量C基因组中基因的密度D单个基因的平均大小4.细胞器DNA能够编码下列哪几种基因产物？（ABCDE）AmRNAB大亚基rRNAC小亚基rRNADtRNAE4.5SrRNA5.从细胞或组织中分离DNA时，常用蔗糖溶液，目的是：（B）A.抑制核酸酶的活性 B.保护DNA，防止断裂 C.加速蛋白质变性 D.有利于细胞破碎6.用SDS-酚来抽提DNA时，SDS的浓度是十分重要的，当SDS的浓度为0.1%时：（B）A.只能将DNA抽提到水相 B. 只能将RNA抽提到水相 C. 可将DNA、RNA一起抽提到水相 D.DNA和RNA都不能进入水相7.变色的酚中含有氧化物，这种酚不能用于DNA分离，原因主要是：（A）A. 氧化物可使DNA的磷酸二酯键断裂 B. 氧化物同DNA形成复合物 C. 氧化物会改变pH值 D. 氧化物在DNA分离后不易除去8.在分离DNA时，异戊醇的作用是：（D）A使蛋白质脱水B使DNA脱水C帮助DNA进入水相；D减少气泡，促进分相随机引物PCR 英文：arbitrarily primed PCR，AP-PCR 是指在对模板顺序一无所知的情况下，通过随意设计或选择一个非特异性引物，在PCR反应体系中，首先在不严格条件下使引物与模板DNA中许多序列通过错配而复性。在理论上，并不一定要求整个引物都与模板复性，而只要引物的一部分特别是3端有3-4个以上碱基与模板互补复性，既可使引物延伸，一旦在两条单链上相距一定距离有反向复性引物存在，则可在Taq DNA聚合酶的作用下进行DNA片段的扩增，经1至数轮不严格条件下的PCR循环后，再于严格条件下进行扩增。经DNA测序凝胶电泳分离后，即可得到DNA指纹图，通过对不同来源基因指