实验02 细胞膜的通透性观察.doc

实验二 细胞膜的通透性观察一、 实验目的 1. 了解溶血现象及其发生机制，了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞膜的速度； 2. 了解并掌握细胞渗透实验的原理； 3. 熟悉其操作方法。 二、实验原理将红细胞分别与各种等渗溶液混合，由于红细胞膜对不同溶质的通透性不同，使得不同溶质透入细胞的速度相差甚大，有些溶质甚至不能透入细胞。当溶质分子进入红细胞后使其分子浓度增加，即引起胞内渗透压升高，水分子则从渗透压低的胞外侧向渗透压高的胞内侧透入，使细胞膨胀，当膨胀达到一定程度时，红细胞膜破裂，血红蛋白逸出，发生细胞溶血现象。此时，光线较易通过溶液，原来不透明的红细胞悬液突然变成红色透明的血红蛋白溶液。由于不同溶质进入细胞的速度不同，故它们诱过红细胞发生溶血的时间也不相同，因此，可通过测量溶血时间来估计细胞膜对各种物质通透性的大小。三、实验用品1.试剂: 1) 0.9%生理盐水； 2) 2种低渗溶液：0.017mol/L 氯化钠和 0.032mol/L 葡萄糖；10 种等渗溶液：0.17mol/L氯化钠、0.32mol/L 葡萄糖、0.17mol/L 氯化铵、0.17mol/L 醋酸铵、0.17mol/L 硝酸钠、 0.12mol/L 草酸铵、 0.12mol/L 硫酸钠、 0.32mol/L 甘油、 0.32mol/L 乙醇、 0.32mol/L丙酮。 2.材料: 鸡血 3.仪器设备：50ml 烧杯、10ml 移液管、小试管、橡皮吸耳球、试管架等。四、方法与步骤1.鸡红细胞悬液的制备： 取50ml 小烧杯一只，加1 份鸡血和10 份0.17mol/L 氯化钠溶液，形成一种不透明的红色液体，此即稀释鸡血； 2.溶血现象的观察： 取试管 1支，加入10ml 蒸馏水，再加入1ml 制备好的鸡红细胞悬液，注意观察溶液颜色的变化，由不透明的红色悬液变成透明的血红蛋白溶液（红细胞发生破裂，造成 100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液）； 3.红细胞的渗透性 取试管一支，加入0.17mol/L 氯化钠溶液10ml，再加入1ml 制备好的鸡红细胞悬液，轻轻摇动，混匀后静置于温室中，观察试管中发生溶血的时间及其变化。注意是否有颜色变化，是否有溶血现象。4.0.17mol/L 氯化钠、0.17mol/L 氯化铵、0.17mol/L 醋酸铵、0.17mol/L 硝酸钠、 0.12mol/L草酸铵、0.12mol/L硫酸钠、0.32mol/L葡萄糖、 0.32mol/L 甘油、0.32mol/L乙醇、 0.32mol/L丙酮10 种溶液进行同样实验，步骤同上； 5.观察并记录实验现象以完成下面的表格： 表1 细胞渗透性实验结果记录试管编号是否溶血时间结果分析1.10ml氯化钠1ml稀释血2.10ml氯化铵1ml稀释血3.10ml醋酸铵1ml稀释血4.10ml硝酸钠1ml稀释血5.10ml草酸铵1ml稀释血6.10ml硫酸钠1ml稀释血7.10ml葡萄糖1ml稀释血8.10ml甘油1ml稀释血9.10ml乙醇1ml稀释血10.10ml丙酮1ml稀释血五、注意事项 试管中有红细胞和测试溶液时，不应强力摇晃，以免造成人为的红细胞破裂。 六、预期成果 1. 溶血现象观察步骤中预期结果溶血，溶液变透明。 2. 用不同的低渗溶液，都会因细胞内外渗透压不同而导致细胞破裂，因其性质不同，是否溶血和破裂的时间不同。 七、实验分析 1. 观察溶液颜色的变化，由不透明的红色悬液变成透明的血红蛋白溶液，这是因为红细胞发生破裂，造成 100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。 2. 使用不同的低渗溶液其溶血时间不同，这是因为其浓度和性质不同。八、思考题（一）细胞膜对物质转运的各种方式的机制、异同点如何？（二）如何理解细胞膜是选择性半透膜？附 试剂的配制10.17mol/L氯化钠：4.967g氯化钠溶于500ml蒸馏水中。20.12mol/L硫酸钠：19.333g硫酸钠（Na2SO410H2O）溶于500ml蒸馏水中。30.17mol/L硝酸钠：7.224g硝酸钠溶于500ml蒸馏水中。40.17mol/L氯化铵：4.574g氯化铵溶于500ml蒸馏水中。50.12mol/L草酸铵：8.527g草酸铵（NH4)2C2O4H2O）溶于500ml蒸馏水中。60.17mol/L醋酸铵：6.552g醋酸铵溶于500ml蒸馏水中。70.32mol/L葡萄糖：28.83g葡萄糖溶于500ml蒸馏水中。80.32mol/L乙醇：9.33ml无水乙醇加500ml蒸馏水混匀。