汉防己中生物碱的提取、分离和鉴定.ppt

实验四汉防己中生物碱的提取 分离和鉴定 实验目的 1 掌握一般叔胺生物总碱的提取和纯化方法 2 熟悉柱色谱法分离生物碱的操作技术 3 掌握生物碱的鉴定方法 实验原理 根据大多数生物碱或生物碱盐均能溶于乙醇的通性 利用乙醇提取总生物碱 利用季铵型生物碱易溶于水 不溶于亲脂性有机溶剂的性质 用溶剂萃取法分离脂溶性生物碱和水溶性生物碱 根据汉防己甲素和乙素和酸结合成盐而易溶于水 难溶于亲脂性试剂 在碱性条件下易溶于亲脂性试剂不溶于水的性质反复处理后 在利用两者在冷苯中溶解度的不同 使它们相互分离 汉防己甲素R CH3汉防己乙素R H 实验器材 试药 汉防己 85 乙醇 1 盐酸 氯仿 氨水 1 氢氧化钠 无水硫酸钠 氧化铝 丙酮 环己烷 甲醇 改良碘化铋钾试剂 碘 碘化钾试剂 碘化汞钾试剂 硅钨酸试剂等仪器 回流装置 圆底烧瓶 分液漏斗 层析柱 漏斗 薄层板 乳钵 量筒 烧杯 试管等 实验内容与方法 一 总生物碱的提取取汉防己粉末100g 置于500ml圆底烧瓶中 加85 乙醇300ml 水浴加热回流1小时 滤出乙醇提取液 药渣重新加入85 乙醇200ml同法提取1次 合并两次提取液 过滤 浓缩至无醇味 成糖浆状 得到总生物碱 二 精制将上述糖浆状提取液转入烧杯中 加1 盐酸调PH为2 边加边搅拌 静置 过滤 得澄明滤液 滤液加等体积氯仿 再加氨水调PH为10以上 于分液漏斗中振摇萃取 静置分层后放出氯仿层 碱液再用氯仿萃取两次 合并氯仿液 氯仿液置于分液漏斗中 先以1 氢氧化钠溶液洗2次 再用水洗2 3次后加入约5g无水硫酸钠脱水 放置过夜 过滤 回收氯仿至少量 得汉防己总碱 三 汉防己甲素和汉防己乙素的分离1 装柱取层析柱垂直固定在铁架台上 在管的下端垫入少量棉花 称取中性氧化铝100目20g 缓缓加入层析柱中 边加边轻轻振动色谱柱 使氧化铝在柱中填实均匀 2 上样取100mg汉防己总碱置于小蒸发皿中 用少量丙酮溶解 另加0 5g色谱用氧化铝 作吸附剂 搅拌均匀 并于水浴上缓缓蒸去溶剂 然后将含有样品的氧化铝装入色谱柱的上端 并盖一圆形滤纸 3 洗脱将色谱柱活塞打开 以环己烷 丙酮 4 1 洗脱 流速控制在5ml min 收集各流分 10ml 15ml 份 4 检查将各流分回收溶剂 依次点于硅胶G CMC Na薄层板上 用氯仿 丙酮 甲醇 6 1 1 为展开剂 展开 喷以改良碘化铋钾试剂 比较各流分的Rf值 合并相同Rf值的流分 5 结晶将合并流分的溶液浓缩至适当体积 放置 析晶 滴加少量丙酮洗涤结晶 可得汉防己甲素 汉防己乙素结晶 四 检识1 化学检识将提取的氯仿液 用1 的盐酸萃取 得盐酸溶液10毫升 分为四个小试管储存 分别在四个小试管中加入改良碘化铋钾 碘 碘化钾 碘化汞钾 硅钨酸试剂 观察各试管中的变化 记录在如下表格中 2 色谱检识色谱材料 硅胶G CMC Na硬板点样 汉防己总碱 汉防己甲素和汉防己乙素的0 1 醇溶液展开剂 氯仿 丙酮 甲醇 6 1 1 氯仿 乙醇 10 1 甲苯 丙酮 乙醇 4 5 1 显色剂 改良碘化铋钾试剂观察记录 记录图谱及斑点颜色 实验注意事项 1 提取装置的安装要小心 不能打碎仪器 2 提取总生物碱时 回收乙醇至稀浸膏状即可 过干时 当加入盐酸后会结成胶状团块 影响提取效果 3 用1 氢氧化钠溶液洗氯