常用中药中齐墩果酸和熊果酸的含量测定.pdf

5213 2004 0520315202 制霉洗剂是由苦参 黄柏 土茯苓等9味中药制成的妇 科外用液体制剂 具有清热燥湿 杀虫止痒的作用 临床上 用于湿热带下 皮肤瘙痒症的治疗 其中苦参的有效成分苦 参碱具有明显的清热燥湿作用 本文采用双波长薄层扫描 法测定苦参碱的含量 现报道如下 1 仪器与试剂 CS 9000双波长薄层扫描仪 日本岛津公司 毛细点样 管 美国Drummond公司 点样仪 武汉分析仪器厂 苦参 碱对照品 中国药品生物检定所 其他试剂均为分析纯 制 霉洗剂 本院制剂室 批号010113 010123 010301 010313 010408 硅胶G板 硅胶 G 青岛海洋化工厂 2 方法与结果 2 1 溶液的配制 2 1 1 苦参碱对照品液的制备 精密称取苦参碱对照品 2 14 mg 加氯仿适量 转移至2 mL量瓶中并稀释至刻度即得 2 1 2 制霉洗剂样品液的制备 精密量取制霉洗剂10 mL 置于分液漏斗中 用氨水调pH 11 然后用氯仿50 mL分次萃 取 每次10 mL 合并萃取液 水浴挥去大部分氯仿后转移 至2 mL量瓶中 加氯仿至刻度即得 2 1 3 制霉洗剂阴性对照液的制备 除苦参外 其他组分 按原制备方法制备 按2 1 2项下方法制得阴性对照液备用 作者简介 相延英 女 硕士生 主管药师 电话 027 50166487 E2mail xiangyanying 2 2 薄层层析及扫描要求 2 2 1 吸附剂与展开剂 0 4 CMC2Na硅胶G板晾干后 于105 烘箱内活化30 min后置干燥器中备用 以苯2丙酮2 乙酸乙酯2浓氨水 2 3 4 0 2 为展开剂 充分饱和60 min 上行展开12 cm 碘化铋钾试液喷雾显色 再喷以少量 0 05 mol L 1亚硝酸钠乙醇液至斑点显色清晰 在薄层板上 覆盖同样大小的玻璃板 周围用胶布固定 放置2 h后扫描 2 2 2 薄层扫描条件及仪器参数 将显色后的薄层板在390 600 nm波长范围内双波长反射锯齿式扫描 ss 500 nm R 630 nm 散射参数Sx 3 狭缝1 0 mm 1 0 mm 2 3 标准曲线的绘制 用微量进样器分别量取对照品溶液 2 4 6 8 10 L 各两点 分别点于同一硅胶G板上 按2 2 项下条件层析并扫描测定 以斑点峰面积均值对点样量绘制 标准曲线 得回归方程为 Y 20119 408 6787 229X r 0 999 n 5 样品含量在2 14 10 70 g范围内呈良好线 性关系 直线不通过原点 因此用外标两点法计算含量 2 4 稳定性实验 取苦参碱对照品液5 L点于薄层板上 按上述薄层条件展开 显色放置2 h后 每隔30 min扫描1 次 结果在2 h内苦参碱斑点的峰面积值保持稳定 RSD为 2 22 n 5 2 5 精密度试验 测定同一薄层板上的5个相同量 5 L 的对照品的峰面积值 结果RSD为1 71 n 5 2 6 干扰因素的考察 在同一板上 依次点苦参碱对照品 液 样品液 阴性对照液各5 L 按薄层条件展开 显色后可 见样品与对照品相应位置上显橙红色斑点 而阴性对照液在 相应位置上无对应斑点 2 7 回收率的测定 精密量取一定量的样品液 分别定量 加入苦参碱对照品 以未加对照品的样品液为对照 按样品 测定的方法测定苦参碱的含量 结果平均回收率为 99 58 RSD为1 01 n 5 2 8 样品含量测定 取样品液5 L 对照品液4 5 L点于 同一板上 交叉点样 按2 2项下条件层析扫描测定 用外标 两点法计算 结果见表1 表1 样品中苦参碱含量测定结果 n 5 Tab 1 Determination of content of sample n 5 批号苦参碱含量 g L 1 RSD 0101131 18 0101231 21 0103011 172 24 0103131 19 0104081 15 3 讨论 曾用苯2丙酮2甲醇 8 2 5 0 5 1 展开 但分离不好 斑 点不集中 用苯2乙酸乙酯2丙酮2浓氨水 3 3 1 0 1 2 系统 展开 出现紧邻分离的斑点有一条弧形现象 采用苯2丙酮2 乙酸乙酯2浓氨水 2 3 4 0 2 展开系统 展开前充分饱和分 离好 斑点集中 经与稀碘化铋钾试液 改良碘化铋钾试液 碘化铋钾试液等显色剂比较 3 选择本文显色剂 可使斑点 显色充分 无空心 放置2 h后测定 使斑点颜色更均匀 清 晰 稳定性显著提高 参考文献 1 李向阳 屠万茜 洁身宝洗剂中苦参碱的薄层扫描测定 J 中 草药 1995 26 8 405 2 黄老金 黄小鸥 薄层扫描法测定妇阴净中苦参碱的含量 J 广西医学 1997 19 4 545 3 张培芳 张亚强 TLC法测定II号洗剂中苦参碱的含量 J 西 北药学杂志 1999 14 4 71 收稿日期 2003206204 常用中药中齐墩果酸和熊果酸的含量 测定 相延英1 2 杨光1 1 华中科技大学同济医学院药学院 湖北 武汉430030 2 中国人民解放军第161医院 湖北 武 汉430010 摘要 目的 测定多种中药中齐墩果酸和熊果酸含量 筛 选提取齐墩果酸和熊果酸的原料 方法 采用RP2HPLC法 同时测定中药中齐墩果酸和熊果酸的含量 选用ODS C18 色谱柱 流动相 甲醇2水2冰乙酸2三乙胺 90 10 0 03 0 06 检测波长 210 nm 流速 0 6 mL min 1 结果 齐墩 果酸和熊果酸分别在0 4000 2 000 g r 0 9997 和 0 4080 2 040 g r 0 9998 范围内呈线性 齐墩果酸和 熊果酸的平均回收率分别为102 7 和101 3 RSD分别 为2 12 和1 78 结论 该法准确 快速 灵敏 可用于药 材质量比较及控制 关键词 中药 齐墩果酸 熊果酸 含量测定 高效液相色 谱法 中图分类号 R284 1 文献标识码 A 文章编号 10012 5213 2004 0520316203 613 中国医院药学杂志2004年第24卷第5期Chin Hosp Pharm J 2004 May Vol 24 No 5 齐墩果酸和熊果酸是两种五环三萜类化合物 结构极为 相似 齐墩果酸具有消炎 增强免疫力 抑制血小板降集 降 糖等多方面的临床药理作用 是治疗急性黄疸型肝炎和慢性 病毒性肝炎较理想的药物 且毒性低 不良反应少 1 熊果 酸具有多种生物活性 尤其在抗肿瘤 抗氧化 抗炎保肝 降 血脂方面的作用显著 2 为筛选提取齐墩果酸和熊果酸的 植物资源 笔者对11种常用中药进行了齐墩果酸和熊果酸 的含量测定 文献报道的方法多为薄层扫描法 3 4 因两者 极性极为相似 很难分离 测得的量实为齐墩果酸和熊果酸 的总和 本文用反相高效液相色谱 RP 2HPLC 法分离并测 定多种中药中齐墩果酸和熊果酸的含量 1 仪器和材料 HPAgilent1100高效液相色谱仪 美国惠普 紫外可见 检测器 sepu3000色谱数据工作站 甲醇为色谱纯 水为注射 用水 其余试剂为分析纯 齐墩果酸和熊果酸对照品 中国药 品生物制品检定所 车前Herba Plantaginis 白花蛇舌草 Herba Oldenlandia Dif f usae 柿 蒂Calyx Kaki 女 贞 子 Fructus Ligustri L ucidi 枇杷叶Folium Eriobotryae 山楂 Fructus Crataegi 石榴皮Pericarpium granati 锁阳Herba Cynomorii 栀子Fructus Gardeniae 乌梅Fructus Mume 木 瓜Fructus Chaenomelis 购于武汉市药材公司 经华中科技 大学同济医学院药学院鉴定 2 方法与结果 2 1 对照品溶液的配制 精密称取齐墩果酸10 0 mg 熊果 酸10 2 mg分别置于10 mL量瓶中 甲醇定容 齐墩果酸 1 0 g L 1 熊果酸1 02 mg mL 1 2 2 色谱条件 色谱柱 ODS C18柱 250 mm 4 6 mm 5 m 流动相 甲醇2水2冰乙酸2三乙胺 90 10 0 03 0 06 临用 前 经 超 声 波 脱 气 处 理 检 测 波 长 210 nm 流 速 0 6 mL min 1 灵敏度 0 05 AUFS 柱温 室温 HPLC图 谱见图1 A 齐墩果酸和熊果酸色谱峰的保留时间分别为 17 8 min 19 0 min 分离度为1 8 2 3 线性考察 分别吸取齐墩果酸与熊果酸标准液0 2 0 4 0 6 0 8 1 0 mL至10 mL量瓶中 甲醇定容 进样 20 L测定 以峰面积对进样量进行线性回归 齐墩果酸和 熊果酸分别在0 40 2 00 g和0 41 2 04 g范围内呈线 性 其回归方程分别为 Y 709289X 26611 r 0 9997 Y 747418X 2641 3 r 0 9998 2 4 样品的处理与测定 分别称取药材粉末1 0 g置具塞 三角烧瓶中 加入95 乙醇40 mL 超声波振荡30 min 提取 3次 残渣用乙醇多次洗涤后 合并提取液和洗涤液一并挥 干 残渣用甲醇溶解 转移至50 mL量瓶中 甲醇定容至刻 度 摇匀 取适量于12000 r min 1离心10 min 上清液用 0 45 m的微孔滤膜过滤 滤液作为供试品溶液 取20 L进 样 测定齐墩果酸和熊果酸的峰面积 按外标法计算其含量 HPLC图谱见图 1 B 齐墩果酸和熊果酸色谱峰的保留时 间为17 5 min 18 7 min 分离度为1 58 几种不同中药材 中齐墩果酸和熊果酸的含量测定结果见表1 2 5 精密度试验 精密称取枇杷叶粉末1 0 g 样品处理后 连续进样5次 测得齐墩果酸和熊果酸的平均峰面积分别为 1034076和5024189 RSD分别为0 85 和0 52 2 6 重现性试验 精密称取枇杷叶药材5份各1 0 g左右 样品处理后连续进样3次 测得齐墩果酸和熊果酸的平均 图1 对照品和样品的HPLC色谱图 A对照品 B枇杷叶 1 齐墩果酸 2 熊果酸 Fig 1 HPLC chromatograms of reference substances and sample A reference substances of oleanolic acid and ursolic acid B Folium Eri2 obotryae 1 oleanolic acid 2 ursolic acid 表1 几种不同中药材中齐墩果酸及熊果酸的含量测定结果 Tab 1 The results of contents of oleanolic acid and ursolic acid in some Chinese medicinal herbs 药材齐墩果酸 mg g 1熊果酸 mg g 1 车前1 2123 164 柿蒂1 1322 570 白花蛇舌草2 25110 065 锁阳0 0880 137 女贞子8 0283 401 栀子0 2520 682 枇杷叶2 5139 987 木瓜0 0380 713 山楂1 3645 341 乌梅0 4071 532 石榴皮0 2030 377 含量分别为2 513 mg和9 987 mg RSD分别为2 36 和 2 54 2 7 回收率测定 分别取已知含量的枇杷叶6份 每份 1 0 g 其中3份各加1 0 mg齐墩果酸及熊果酸对照品 样品 按2 4项下方法处理后测定 外标法计算含量 计算加样回收 率 齐墩果酸和熊果酸的平均回收率分别为102 7 和 101 3 RSD分别为2 12 和1 78 3 讨论 RP2HPLC法选210 nm为检测波长可同时测定两者含 量 在反相柱上甲醇的比例增减对两者的分离与保留影响较 大 选择的流动相体系既能使齐墩果酸与熊果酸得到良好分 离 又能与中药中众多杂质分离 加入少量冰醋酸可以创造 弱酸性环境 利于两种酸的分离 加入少量三乙胺有利于改 变峰形 提高分离度 由于齐墩果酸与熊果酸大多数是以游离的形式存在于 植物中 4 故只用醇提法提取了其游离的部分 本文用超声 振荡法提取30 min 可以与中国药典中索氏提取4 h得出的 含量相近 5 该法简便 省时 从分析结果看出 齐墩果酸与熊果酸多同时存在于植物 中 用不同色谱体系测出的结果差异无显著性 与文献结 果 6 相符 白花蛇舌草和枇杷叶中熊果酸含量较高 且资源 丰富 价格低廉 可用于提取熊果酸 而山楂中熊果酸的含 量也较高 可以综合开发利用 女贞子中齐墩果酸的含量较 高 可用于提取齐墩果酸 参考文献 1 王立新 韩广轩 刘文庸 等 齐墩果酸的化学及药理研究 J 药学实践杂志 2001 19 2 104 2 熊筱娟 陈武 李开泉 等 乌索酸药理作用研究进展 J 宜春 医专学报 2001 13 1 77 3 刘伟 李兴奇 山茱萸中熊果酸及齐墩果酸的成分分析 J 河 南中医药学刊 2000 15 5 15 713 中国医院药学杂志2004年第24卷第5期Chin Hosp Pharm J 2004 May Vol 24 No 5 4 冀春茹 袁珂 胡润淮 等 冬凌草中熊果酸 齐墩果酸的薄层 扫描测定 J 中医药学报 1997 7 6 43 5 尹小英 欧阳栋 高效液相色谱法测定山茱萸中熊果酸的含量 J 江西中医学院学报 2001 38 3 114 6 谢莹 杭太俊 程赞 等 高效液相色谱法测定中药中齐墩果酸 和熊果酸含量 J 中国中药杂志 2001 26 9 615 收稿日期 2003201220 作者简介 王燕 女 学士 副主任药师 电话 0571 85239988 3702 E2mail wangyan9057 高效液相色谱法测定多维护肤乳膏中 维生素A E的含量 王燕 俞佳 王贵发 浙江省人民医院 浙江 杭州 310014 摘要 目的 建立测定多维护肤乳膏中维生素A E含量 的方法 方法 采用反相Hypersil ODS色谱柱 甲醇2水 98 2 为流动相 检测波长为325 nm 285 nm 结果 维生素A E的线性范围分别为0 9 4 5 mg L 1 r 0 9997 0 2 1 g mL 1 r 0 9999 回收率分别为98 55 RSD为 0 66 及98 56 RSD为0 61 n 9 日内RSD分别 为0 72 和0 46 n 5 日间RSD分别为0 85 和 0 60 n 5 结论 高效液相色谱法可用于本制剂的含 量测定和质量控制 方法简便 快速 结果准确 关键词 维生素A 维生素E 乳膏剂 高效液相色谱法 中图分类号 R927 文献标识码 A 文章编号 10012 5213 2004 0520318202 多维护肤乳膏是我院制剂室研制的新制剂 它由维生 素A 维生素E同基质组成的O W乳膏剂 用于治疗外源性 皮肤老化 皮肤裂化具有明显疗效 本文参照文献 1 2 采 用反相高效液相色谱法 同时测定上述两种成分含量 方法 简便 快速 结果准确 可作为该制剂的质量控制 1 仪器与试剂 HP1100高效液相色谱系统 HP 1100二极管阵列检测 器 维生素A对照品 中国生物制品检定所 维生素E对照 品 浙江新昌制药厂 批号 020516 含量100 1 甲醇为色 谱纯 无水乙醇为分析纯 2 方法与结果 2 1 色谱条件 色谱柱 Hypersil ODS 5 m 4 0 mm 250 mm 流动相 甲醇2水 98 2 检测波长 325 285 nm 流速 1 2 mL min 1 柱温 室温 进样量 50 L 在该色谱 条件下 保留时间维生素A 3 767 min 检测波长325 nm 维生素E 9 434 nm 检测波长285 nm 2 2 对照品溶液的配制 分别取维生素A E对照品适量 精密称定 加无水乙醇溶解并稀释成每1 mL含维生素A 9 g和维生素E 2 mg的溶液 作对照品储备液 2 3 空白辅料干扰实验 按多维护肤乳膏剂处方称取空白 辅料按含量测定项下方法配制 测定 空白辅料在维生素A E的保留时间处无吸收峰 结果表明 在上述色谱条件下 空白辅料对维生素A E的测定无干扰 2 4 标准曲线的绘制 精密量取对照品储备液1 2 3 4 5 mL置10 mL的量瓶中 用无水乙醇稀释至刻度 各取 50 L分别进样 按上述色谱条件测定峰面积 A 分别对浓 度 C 进行线性回归 得回归方程 维生素A C 0 0106A 0 19859 r 0 9997 线性范围0 9 4 5 mg L 1 维生 素E C 0 11176A 10 296 r 0 9999 线性范围0 2 1 0 g L 1 2 5 精密度实验 取维生素A E对照品各适量 精密称定 加无 水 乙 醇 稀 释 成 维 生 素A 2 7 mg L 1 维 生 素 E 0 4 g L 1的溶液 同上操作测定 一天内间隔2 h重复进样 5次 得维生素A的日内精密度RDS为0 72 维生素E的 日内精密度RDS为0 46 隔天进样1次 重复5次 得维 生素A的日间精密度RDS为0 85 维生素E的日间精密 度RDS为0 60 2 6 稳定性实验 依法制备供试品溶液 批号030316 1 取50 L进样 按色谱条件分别于0 2 4 6 8 10 h测定6次 RSD维生素A为0 96 n 6 维生素E为0 76 n 6 表明样品溶液至少在10 h内稳定 2 7 回收率实验 取维生素A E对照品适量 精密称定 精密称取本品辅料适量 照制剂规格按80 100 120 的比例配成模拟制剂各3份 精密称取上述模拟制剂6 g置 100 mL量瓶中 加无水乙醇适量溶解并稀释至刻度 摇匀 分别取上述溶液各50 L进样 记录峰面积 按外标法以峰面 积计算 结果维生素A的平均回收率为98 55 RSD为 0 66 n 9 维生素 E的平均回收率为98 56 RSD为 0 61 n 9 2