image J 软件分析双标及多标格免疫荧光共表达操作步骤1.pdf

image J 软件分析双标及多标格免疫荧光共表达操作步骤 1 从 image J 官方网站下载该软件 切记一些重要的相关的插件要一并下载 如 colocalization finder 插件等 存在 在安装目录下 否则 有些功能无法找到 2 将要分析的图片文件打开 出现如下画面时 将一些勾勾去掉 这样的话 一张含有多通道的免疫荧光源图片只 以一张图片出现 而不会出现每一种荧光分别就会有一张图片 这对后面选取目的区域是非常有利和方便的 注意 需要先将图片转换为 TIFF 格式 否则好像不能用于分析 3 打开图片后 将图片转换为 8 或者 16 bit 4 为了便于分析和观看 可以在 image 根据栏里选择 rotate 旋转图片 图中我把图片逆向旋转了 90 度 见下下图 6 将选定的区域复制到一个新的文档中 步骤 edit copy dile new internal clipboard 即得到一张某一激发波长下的 蛋白免疫荧光图 默认显示为 clipboard 7 将鼠标放在原图片上 并且轻轻转动滑轮 原图片画面即显示第二个激发波长下的图片 见左上角有 C 2 3 即 表示是 3 中荧光通道中的第二个荧光通道图片 同样将选定的区域复制到一个新的文档中 步骤 edit copy dile new internal clipboard 即得到第二张某一激发波长下的蛋白免疫荧光图 默认显示为 clipboard 1 8 同样将鼠标放在原图片上 并且轻轻转动滑轮 原图片画面即显示第三个激发波长下的图片 见左上角有 C 3 3 即表示是 3 中荧光通道中的第三个荧光通道图片 同样将选定的区域复制到一个新的文档中 步骤 edit copy dile new internal clipboard 即得到第三张某一激发波长下的蛋白免疫荧光图 默认显示为 clipboard 2 9 现在已经将不同通道下 目的蛋白的荧光图片都选择和建立好了 分别有三张图片 代表 2 种蛋白 三种激发波 长 而且这三个蛋白是在一模一样的区域里统计分析 现在知道步骤 2 中打开一张源图片的重要性的吧 不然不能 保证每次所选的目的区域是一模一样 也就得不到同一区域不同蛋白共存强度的统计分析效果了 下面分别进行 2 种蛋白共存的分析过程 点 plugin colocalization finder 出现后图画面 10 将要统计的 2 张选好区域的目的图片 如 clipboard 1 和 clipboard 2 显示在桌面上 并在分析对话框中分别选上 点 OK 11 结果出来了 分别是共存相关系数图表和共存的模拟效果图 同时还有一个相关性的散点分布图 scatterplot 12 新开一个 excel 文档 将结果拷贝并复制 13 将相关性的散点分布图 scatterplot 以 TIFF JPEG 形式保存 建议最好附在共存图片或者文档中 以让图片说话 比起你用文字说话有证据多了 14 重复步骤 10 以后的步骤 按同样的