六种常见口腔微生物培养.doc

常见口腔微生物培养【摘要】变形链球菌、血链球菌、乳杆菌、粘性放线菌、中间普氏菌、白色念珠菌是常见的口腔致龋菌。本实验主要作为大实验的一部分，以标准株为培养对象，设置了各种细菌的普通培养法以及外加原卟啉的培养基培养法。【关键词】变形链球菌 血链球菌 乳杆菌 粘性放线菌 中间普氏菌 白色念珠菌 培养1材料与仪器1.1菌株选择变形链球菌ATCC 25175血链球菌ATCC 105561嗜酸乳杆菌ATCC 435613粘性放线菌ATCC 159872中间普氏菌ATCC 256112白色念珠菌ATCC 900381.2试剂与培养基1.2.1磷酸缓冲液PBS1.2.2无原卟啉培养液：BHI液体培养基：将3.65gBHI粉末溶于100ml纯水中，待溶解后调pH7.0，高压灭菌，4冰箱保存备用。3BHI 平板：3.65g BHI 粉末、2.0g 琼脂溶解于100ml纯水中，待溶解后调pH7.0，高压灭菌，4冰箱保存备用。MRS 液体培养基：3.8g MRS 粉末溶解于100ml纯水中，调 pH 6.6，高压灭菌，4保存备用。3MRS 平板：3.8g MRS 粉末溶解于100ml纯水中，加入2g琼脂，调 pH 6.6，高压灭菌，4保存备用。SDA培养基：蛋白胨 1g，葡萄糖 4g，琼脂 2g 加蒸馏水至 100mL，调节至 pH6.2 左右，121高压蒸汽灭菌 15min，冷却后加青霉素（50g/ml），倒板，置 4备用。4YPD液体培养基：蛋白胨 2g，葡萄糖 2g，酵母粉 1g 加蒸馏水至 100mL，调节至 pH6.5，121高压蒸汽灭菌 15min，冷却后加青霉素（50g/ml），置 4备用。41.2.3加原卟啉培养液：1.2.3.1取0.5g原卟啉IX（亦可以换成锌原卟啉或者原卟啉二钠盐等形式）56，加水定容到500ml，配制成1g/L的溶液1.2.3.2在以上各种液体培养基中再加入0.3ml，1g/L的原卟啉溶液配成约3g/L的培养基。【注：BHI配方表：每100ml水加入牛心浸出液25ml，牛脑浸出液20ml，胰蛋白胨1.0g，酵母提取物5.0g，葡萄糖0.2g，盐酸半胱氨酸溶液0.4ml，VPI盐液5.0ml，刃天青（0.1%）5.0ml。2MRS培养液配方：每100ml纯水加入胰蛋白胨1.0g，牛肉膏1.0g，酵母提取物0.5g，柠檬酸铵0.2g，葡萄糖0.2g，醋酸钠0.5g，磷酸氢二钾0.2g，硫酸镁0.058g，硫酸锰0.025g，加入吐温-80 ，0.1 ml.3本实验采用简易的混合粉直接配制。】1.3培养环境无菌、厌氧（85%N2，10%H2、5%CO2）,3711.4主要仪器厌氧培养箱（Bugboxdual，America）无菌操作台2培养2.1变形链球菌培养2.1.1用固体培养基分离纯化用接种环取变形链球菌ATCC 25175接种于BHI固体培养基，37培养24小时。2.1.2扩大培养挑取单菌种分别接种到无原卟啉的BHI液体培养基与含原卟啉的BHI液体培养基，37恒温培养24小时。 2.2血链球菌培养分离提纯并扩大培养血链球菌ATCC 10556，步骤同2.1。2.3粘性放线菌培养分离提纯并扩大培养粘性放线菌ATCC 15987，步骤同2.1。2.4中间普氏菌培养分离提纯并扩大培养中间普氏菌ATCC 25611，步骤同2.1。2.5乳杆菌培养2.5.1用固体培养基分离纯化用接种环取。2.5.2扩大培养挑取单菌种分别接种到无原卟啉的MRS液体培养基与含原卟啉的MRS液体培养基，37恒温培养24小时。2.6白色念珠菌培养2.6.1用固体培养基分离纯化用接种环取白色念珠菌ATCC 90038接种于SDA固体培养基，37培养24小时。2.6.2扩大培养挑取单菌种分别接种到无原卟啉的YPD液体培养基与含原卟啉的YPD液体培养基，37恒温培养24小时。【参考文献】1陶睿. Pleurocidin及其优化多肽抑制常见致龋菌的研究D.第四军医大学,2012.2杨暤. 茶多酚联用奥硝唑对牙周可疑致病菌的体外抑菌活性研究D.重庆医科大学,2012.3王勤花. 乳酸杆菌对变形链球菌体外作用研究D.重庆医科大学,2012.4郑璐. 白色念珠菌生物被膜体外模型的建立及分析D.重庆医科大学,2010.5王自明,张阳德,何剪太,林伶. 药物诱导大鼠大肠癌组织原卟啉积聚的