缓冲溶液的配置.doc

二、缓冲液免疫细胞化学中应用的缓冲液种类较多，即使是同种缓冲液，其浓度、pH、离子强度等也常不同。在此介绍几种最常用缓冲液的配制。1、0.2mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer，PB）试剂： NaH2PO42H2O、Na2HPO412H2O。配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。（1）0.2mol/L的NaH2PO4；称取NaH2PO42H2O 31.2 g 或NaH2PO4H2O 27.6g加重蒸水至1000ml溶解。（2）0.2mol/L的Na2HPO4：称取Na2HPO412H2O 71.632g（或Na2HPO47H2O 53.6g或Na2HPO42H2O 35.6g）加重蒸水至1000ml溶解。（3）0.2mol/L pH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的Na2HPO412H2O，充分混合即为0.2mol/L的PB（pH约为7.47.5）。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。2、0.01mol/L磷酸盐缓冲生理盐水（Phosphate Buffered Saline, PBS）试剂：0.2 mol/L PB 50ml NaCl 8.59g（约0.15mol/L） 重蒸水 至1000ml配制方法：称取NaCl8.59g及0.2mol/L的PB50ml，加入1000ml的容量瓶中，最后加重蒸水至1000ml，充分摇匀即可。若拟配制0.02mol/L的PBS，则PB量加倍即可，依此类推。PB和PBS是免疫细胞化学实验中最为常用的缓冲液，0.01mol/L的PBS主要用于漂洗组织标本、稀释血清等，其pH应在7.257.35之间，否则需要调整。0.1mol/L的PB常用于配制固定液、蔗糖等。一般情况下，0.2mol/L PB的pH值稍高些，稀释成0.01mol/L的PBS时，常可达到要求的pH值，若需调整pH，通常也是调PB的pH。3、KarassonSchwlts磷酸盐缓冲液试剂： NaH2PO4H2O 3.31g Na2HPO47H2O 33.77g 重蒸水 至1000ml配制方法：同前。该缓冲液主要用于配制Zambonis固定液。4、0.5mol/L pH7.6的Tris- HCl缓冲液。试剂：Tris(三羟甲基氨基甲烷)60.57g 1 N HCl约420ml 重蒸水 至1000ml配制方法：先以少量重蒸水（300500ml）溶解Tris，加入HCl后，用1N的HCl或1N的NaOH将pH调至7.6，最后加重蒸水至1000ml。此液为储备液，于4冰箱中保存。免疫细胞化学中常用的Tris-HCl缓冲液浓度为0.05mol/L，用时取储备液稀释10倍即可。该液主要用于配制Tris缓冲生理盐水（TBS）、DAB显色液。5、Tris缓冲生理盐水（Tris Buffered Saline，TBS）试剂：0.5mol/L Tris-HCl缓冲液100ml NaCl3.59g（0.15mol/L） 重蒸水至1000ml配制：先以重蒸水少许溶解NaCl，再加Tris-HCl缓冲液，最后加重蒸水至1000ml，充分摇匀使Tris终浓度为0.05mol/L。TBS主要用于漂洗标本，常用于免疫酶技术中。6、Tris-TBS（TBS）试剂：Triton X-100 10ml（1%）或3ml（0.3%） 0.5mol/L Tris缓冲液（pH7.6）1000ml（50ml）或（0.2mol/L的PB） NaCl8.59g 重蒸水至1000ml配制方法：先以重蒸水少许溶解NaCl后，加入Triton X-100及Tris缓冲液或（PB），最后加重蒸水至1000ml，充分摇匀。该液常用浓度为1%及0.3%，前者主要用于漂洗标本，后者主要用于稀释血清。7、0.1mol/L（pH7.4）二甲胂酸缓冲液试剂：0.2mol/L二甲胂酸钠500ml 0.1N HCl28ml 蒸馏水至1000ml配制方法：先称取二甲胂酸钠（MW：214）42.8g，加蒸馏水至1000ml，使0.2mol/L的二甲胂酸钠溶液；再取HCl1.7ml加蒸馏水至1000ml，配成0.1N，最后取0.2mol/L二甲胂酸钠溶液500ml及0.1N HCl28ml混合，加蒸馏水至1000ml，即为0.1mol/L的二甲胂酸钠缓冲液。HEPES buffer缓冲溶液的配制方法 HEPES分子量为238.31，化学名：4-羟乙基哌嗪乙磺酸，分子式: C8H18N2O4S。HEPES常用于生物缓冲剂，pH值缓冲范围：6.8-8.2，用在生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L。关于HEPES 缓冲溶液的配制，不同的文献资料有不同的说法。根据用途，一种是单纯的HEPESNaOH，另一种是HEPES盐。各种配制方法总结如下：一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中，加0.51M 的NaOH水溶液调节至少所需pH（HEPES的有效pH 范围是6.88.2），然后用蒸馏水定容至500ml，于4摄氏度保存。二、加少量盐的HEPES Buffer配方（500ml）HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值，最后定容。 三、2HEPES缓冲盐溶液