苹果出库后生理指标比较测定.doc

苹果出库后生理指标比较测定果蔬采后生理设计性实验摘要： 此设计性实验测定了经乙烯利处理和低温贮藏的红富士苹果的呼吸强度、有机酸含量、细胞膜渗透率，以及多酚氧化酶（PPO）、过氧化氢酶(POD)活性的测定和丙二醛(MDA)含量的测定。关键词：苹果 出库 生理指标 比较测定前言：红富士是从普通富士的芽（枝）变中选育出的着色系富的统称。富士苹果是日本农林水产省果树试验场盛冈分场于1939年以国光为母本，元帅为父本进行杂交，历经20余年,选育出的苹果优良品种，具有晚熟、质优、味美、耐贮等优点,于1962年正式命名，是世界上最著名的晚熟苹果品种。富士果实虽有风味好、晚熟、耐贮等优点，但也存在着果实着色差的缺点。为此，日本各地又从富士当中选出了许多着色好的富士芽变，统称为红富士。红富士苹果在渭北平原， 陕北黄土高原一些地区以及秦岭以北麓地区均能正常生长，并能早实丰产稳产，色艳质优。红富士的经济栽培北界在白于山、横山以南，西起吴旗的油城子，经过志丹县的桑园沟，冬至清涧。在北纬37以北，榆林县以南地区，选用适宜的地形和小气候条件，也可少量栽培，但需注意防冻防霜。乙烯利也叫一催磷，乙烯磷。具有抑制新梢生长，促进成花结果，果实着色成熟等作用。苹果成熟前3 至 4周，用纯量的320至800毫克/千克浓度溶液喷布全树，可使果实提早10至15天成熟。苹果花前10天，全树喷100至200毫克/千克浓度溶液，可提高果实品质。此设计性实验测定了经乙烯利处理和低温贮藏的苹果的呼吸强度、有机酸含量、细胞膜渗透率，以及多酚氧化酶（PPO）、过氧化氢酶(POD)活性的测定和丙二醛(MDA)含量的测定。了解果蔬采后生理变化和生产上减少果蔬采后损失的操作技术。1.试验材料与方法1.1 试验材料与处理1.1.1 试验材料 红富士苹果：2010年5月26日购于新北园春水果批发市场，产地陕西。1.1.2材料处理：1、冰箱（4）贮藏；2、室温（20）贮藏（乙烯利0.2%处理3天）1.2 试剂与仪器1.2.1 试剂： 0.4mol/L的氢氧化钠溶液、0.1 mol/L的氢氧化钠溶液、Bacl2溶液、酚酞、0.1molL-1的草酸溶液、蒸馏水、0.2 molL-1 pH=6.2 Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液、0.1 molL-1 邻苯二酚、5.0%三氯乙酸、0.5%硫代巴比妥酸、H2O20.1molL-1愈创木酚1.2.2 仪器：电子天平、培养皿、干燥器、50ml或100ml碱式滴定管、酸式滴定管、试管、研钵、烧杯、锥形瓶、漏斗、电炉、移液管（1ml、5ml，10ml，20ml）、离心机、脱脂棉、电导仪、恒温水浴锅、分光光度计。、1.3 测定指标与方法1.3.1 指标：1.3.2 方法 第一次实验，先进行呼吸测定，之后进行膜透性、有机酸含量测定，共测定3个指标；样品切割后，每个处理立即取10g左右果肉，用保鲜膜密封，于-30储藏，留样进行第2次实验各指标测定。1.3.2.1 呼吸强度测定采用静止法。吸取0.4molL-1的氢氧化钠溶液25ml于培养皿中，立即放入干燥器中，把已称重的果实（约1kg）放到干燥器中的隔架上，密封并记时，20min后，吸取10mLNaOH转移到三角瓶中，再加入1.0ml的Bacl2溶液和两滴酚酞，用以标定好的0.1molL-1的草酸溶液滴定至终点，以不放样品的空白组为对照，每个样品重复三组，操作同上。呼吸强度的单位表示为mgCO2kg-1h-1。按下式计算：呼吸强度（mgCO2kg-1h-1）=0.1（V空白-V样品）4425/（w1/3）1.3.2.2 可滴定酸含量的测定采用滴定法。取果肉10.0g(W)，蒸馏水匀浆并定容至100ml,浸提10min。取40ml至锥形瓶中，滴入酚酞指示剂2滴，用0.1molL-1氢氧化钠标准溶液滴定，至出现微红色30s不退色为终点，记下所消耗氢氧化钠标准溶液的体积。重复测定3次。按下式计算：有机酸含量(%)=V0.0067100100/(40W)0.00671ml 0.1molL-1氢氧化钠相当于0.0067g苹果酸1.3.3细胞膜渗透率的测定随机打取果肉圆柱，切厚1.5mm小片40片，混匀，放入2个小烧杯中，每杯20片。用蒸馏水冲洗烧杯中的样品3次，加入20ml蒸馏水，室温静置30min后测定电导率(T1)，然后将烧杯放在电炉上煮沸5min，冷却后测量电导率(T2)。计算细胞膜相对透性。按下式计算：细胞膜相对透性(%)= T1100/ T21.2.5 多酚氧化酶(PPO)活性测定称取果肉3.0 g加8.0 ml 0.2 molL-1 pH=6.2 Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液研磨匀浆，于4000 rpm离心10 min，少量脱脂棉过滤。取上清液1.0 ml加4.5 ml缓冲液和0.5 ml 0.1 molL-1 邻苯二酚震荡摇匀，于37 oC水浴恒温反应10 min，取出立即加入5.0%三氯乙酸0.5ml，测其525 nm吸光度。以反应前加入5.0%三氯乙酸0.5ml管作空白对照。以每分钟内吸光度变化0.01为1个PPO活力单位（U）。计算方法： A：样品管在525 nm的吸光度； VT：提取酶液总体积，11ml； W：样品鲜重，3.0g； VS：测定用酶液体积，1ml； T：反应时间，10min。1.2.6 丙二醛(MDA)含量测定称取果肉0.5 g加8.0 ml 5.0%三氯乙酸冰浴研磨匀浆，过滤，取清液1.0 ml加入试管中，再加4ml0.5%硫代巴比妥酸混匀，于沸水浴恒温反应15 min，冷却后在450 nm、532 nm、600 nm处比色。以1ml 5.0%三氯乙酸代替酶液管作空白对照。计算方法： A532 、A600、 A450：对应波长下反应液的吸光度；VT：提取液总体积，8.5ml；W：样品鲜重，0.5g；V1：测定用提取液液体积，1ml。1.2.7 过氧化物酶(POD)活性测定提取液同ppo。取上清夜1.0 ml混合1.0 ml 2.0% H2O2与1.0 ml 0.1 molL-1愈创木酚及2.0 ml缓冲液于试管中震荡摇匀，于37 oC水浴恒温反应5 mins，取出试管立即加入5.0%三氯乙酸0.5ml，测定混合液470 nm的吸光度。以反应前加入5.0%三氯乙酸0.5ml管作空白对照。计算方法： A-A0：样品管与对照管在470 nm吸光度的差值； VT：提取酶液总体积，11ml； W ：样品鲜重，3.0g； VS：测定用酶液体积，1ml； T：反应时间，5min。0.034:一个mol H2O2的毫克数。2. 结果与讨论2.1呼吸强度比较W=1.2kgV空白V样品经乙烯利处理17.517低温贮藏15.515.4呼吸强度（mgCO2kg-1h-1）=0.1（V空白 - V样品）4425/（w1/3）经乙烯利处理后低温贮藏呼吸强度测定137.527.5讨论：由于本次试验中有不同浓度的氢氧化钠，使用试剂时应当认真仔细，以免出现滴定错误。2.2 有机酸含量经乙烯利处理低温贮藏消耗氢氧化钠体积1.2ml0.37有机酸含量(%)=V0.0067100100/(40W) W=10g经乙烯利处理低温贮藏有机酸含量（%）0.201 0.062讨论：多次滴定以减小实验误差。2.3 细胞膜相对透性电导率 （T1）冷却后电导率（T2）经乙烯利处理1.251020.33103低温贮藏1.041020.316103细胞膜相对透性(%)= T1100/ T2经乙烯利处理低温贮藏细胞膜相对透性(%)37.8832.91讨论：电导仪的使用应熟练，单位应调到可调范围内的最大值。2.4 多酚氧化酶（ppo）活性空白对照平行实验1平行实验2经乙烯利处理00.0240.020低温贮藏00.0200.028经乙烯利处理低温贮藏PPO活性0.8070.88讨论：三氯乙酸是酶的抑制剂，少量的三氯乙酸就可使酶失去活性。因此在对照实验中，应当先加入三氯乙酸，以使得酶失活。2.5 丙二醛（MDA）含量空白对照平行实验1平行实验2乙烯利处理低温贮藏乙烯利处理低温贮藏乙烯利处理低温贮藏450nm001.8261.7251.8521.732532nm000.1510.1290.1650.138600nm000.0250.0200.0330.031 经乙烯利处理低温贮藏MDA含量4.585.5讨论：加入三氯乙酸以及沸水浴的目的在于使得酶失去活性，以测得MDA含量。2.6 过氧化物酶（POD）活性空白对照平行实验1平行实验2经乙烯利处理00.9920.805低温贮藏00.2300.163经乙烯利处理低温贮藏POD含量2.240.48讨论：控制水浴温度，防止酶失活，37是酶活性的最适温度，以测得POD的活性。3.结论3.1 呼吸强度：乙烯可以促进苹果呼吸高峰提早到来，并引发相应的成熟变化，但是在作用域值之上，乙烯浓度的大小对呼吸高峰的峰值没有显著影响。适值的低温，可以显著降低苹果的呼吸强度，并推迟跃变高峰的出现。3.2 有机酸含量：果实离得有机酸如苹果酸、柠檬酸、草酸等，在果实风味上起着很重要的作用。不同处理的果实，它们所含酸的浓度不同。因此实验中乙烯利处理的有机酸含量大于低温贮藏的。3.3细胞膜相对透性：低温处理的细胞膜相对透性小于乙烯处理后的细胞膜相对透性，由于乙烯利具有加速果实衰老，因此可见，随着果实的衰老，导致细胞渗透率的增大，细胞膜的通透性增大。3.4多酚氧化酶(PPO)活性：试验中，经测定结果低温处理的PPO含量小于乙烯利处理的含量，由于乙烯利具有加速果实成熟衰老作用，PPO活性增大，可见PPO是植物酶促褐变的催化剂。随着果实的衰老，果实褐变的程度也越高。3.5丙二醛(MDA)含量：乙烯利加速苹果的衰老，导致细胞膜氧化程度变大，MDA是脂代谢的最终产物，测定MDA的含量，就是测定细胞膜被氧化的程度。说明，随着果实的衰老，组织中MDA的含量增加，因此，细胞膜的氧化程度增大。3.6过氧化物酶(POD)活性：实验测得结果为低温处理的POD含量小于乙烯利处理的含量。乙烯加速苹果的衰老，导致POD酶含量增高。4.实验心得在本次实验中，从呼吸强度的测定、有机酸含量、细胞膜的相对透性、多酚氧化酶、过氧化物酶的活性以及丙二醛的含量这六个方面，研究探讨了经过乙烯利处理的苹果和低温贮藏的苹果的生理