板蓝根对小鼠实验性肝损伤的保护作用及机制.doc

板蓝根对小鼠实验性肝损伤的保护作用及机制左艳君1 ，吕秀阳1 ，王孜博1 ，刘娇娇1（1. 河南科技大学医学技术与工程学院，河南，洛阳，471003）摘要: 目的 探讨四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤模型的建立以及板蓝根对肝脏保护作用和机制。方法 腹腔注射1ml/L的CCl4花生油溶液10 ml/kg建立急性CCl4小鼠肝损伤模型，测定血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST），肝组织中超氧化物岐化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的水平，并进行肝脏病理学检查。结果 板蓝根可明显降低肝损伤小鼠血清中ALT、AST，降低肝组织中MDA的含量水平(P0.01)，升高肝组织中SOD的活性(P0.01)，肝脏病理学检查表明板蓝根可减轻肝组织病理损伤程度。结论 板蓝根对CCl4诱导的急性肝损伤具有明显的保护作用。关键词：板蓝根；CCl4；肝损伤；小鼠板蓝根为十字花科菘蓝属, 具有抗菌抗病毒、清热解毒、凉血消肿、利咽之功效。辽宁常用中草药手册记载，板蓝根可用于治疗肝炎、肝硬化等症。本文针对板蓝根对急性肝损伤的保护作用进行实验研究，采用CCl4 中毒诱导小鼠急性肝损伤模型，观察肝组织病理学变化、血清ALT、AST及肝组织MDA、SOD含量以及相关的病理变化，探究板蓝根对实验性肝损伤的保护及影响，并探讨其可能的作用机制，为其临床治疗肝损伤提供实验依据。1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 实验动物健康昆明种小鼠40只，雌雄兼用，体重(20 2) g，由本校实验动物中心提供。1.1.2 药品及试剂板蓝根（成都三明药物研究所）；CCl4，分析纯(上海长江化工厂)；ALT、AST试剂盒由 Olympus 公司提供；MDA 测定试剂盒(硫代巴比妥酸比色法) 、SOD 测定试剂盒(黄嘌呤氧化法) (南京建成生物工程研究所提供)。1.1.3 主要仪器721 型分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，TGL-16C 型高速离心机，TDL-4 型低速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)，电热恒温水温箱(上海医疗器械七厂)等。1.2 试验方法健康昆明种小鼠40只随机分为4组：每组10只，I组为生理盐水组，II组为CCl4 模型组，III组为给药低剂量组，IV组为给药高剂量组，小鼠在实验室观察1d后进行实验。I、II两组小鼠每天均用腹腔注射生理盐水10ml/ kg，III组小鼠每天腹腔注射低剂量板蓝根液20ml/kg，IV组小鼠每天腹腔注射高剂量板蓝根液80ml/ kg。每天给药一次，共10d。末次给药后2h，各组小鼠(生理盐水组除外)，其余各组均腹腔注射1ml/L的CCl4花生油溶液10ml/kg一次。禁食不禁水16h后各组小鼠快速断头取血收集血清；并立即处死小鼠，剖腹，取小鼠的肝脏，称重，部分肝组织制备肝匀浆液及肝组织切片。1. 3 样品采集及检测方法1.3.1 血清ALT、AST活性的检测取小鼠血，以16 000r/ min 离心7min，分离血清，按试剂盒说明书操作，采用全自动生化分析仪及其配套试剂检测血清中ALT和AST的浓度。1.3.2 血清、肝组织SOD、MDA含量的检测各组小鼠血清收集方法同上。剖腹取各组小鼠肝组织称重，置玻璃匀浆器中磨碎，加冰冷的0. 86 %NaCl 溶液制成10%肝匀浆液，以4 000r/ min离心10min，取上清液检测。严格按照试剂盒说明书操作，然后用721型分光光度计比色检测小鼠肝匀浆中SOD和MDA的浓度。1.3.3 病理肝组织切片制备及组织学观察 各组小鼠处死立即剖腹取相同部位的肝脏用10%甲醛液固定，乙醇梯度脱水，采用常规石腊切片，切片厚5m，HE染色，镜下做病理组织学观察。肝损伤程度分级标准：在1个肝小叶中，( + ) 表示只有几个细胞发生相应的病理改变，分布散在；( + ) 表示一半左右细胞发生相应的病理改变，分布较广；( + ) 表示绝大多数细胞发生相应的病理改变，分布弥漫；( - ) 表示未发生相应的病理改变。1.4 统计学处理实验数据均以均数标准差( S ) 表示，采用双侧t 检验进行统计处理。2 结果2. 1 板蓝根对CCl4 肝损伤小鼠肝脏组织学的影响 见表1。由表1可知，与生理盐水组相比，CCl4模型组出现肝细胞弥漫性变性、坏死，炎性细胞浸润为特点的急性肝损伤表现；与模型组相比，给药低剂量组和高剂量组病理改变明显减轻，提示板蓝根对CCl4中毒导致的小鼠肝细胞损伤有明显保护作用。各组小鼠肝组织病理学结构见图-1、2、3、4。表1 板蓝根对CCl4 肝损伤小鼠肝脏组织学的影响组别小数数量（只）剂量（10mg/kg）不同等级肝细胞病理改变的小鼠数量（只）空泡变性肝细胞坏死炎性细胞浸润-+-+-+生理盐水1010120001200012000CCl4模型组1010024401360433低剂量组1010333143213421高剂量组1040531163015311 图1 生理盐水组 图2 CCl4模型组图3 小剂量组 图4 大剂量组2. 2 板蓝根对CCl4中毒小鼠血清、肝组织MDA、SOD 水平的影响，见表2。由表2可见，与生理盐水组比较，模型组小鼠血清、肝组织MDA 的含量显著增高( P 0. 001) ，SOD 水平显著降低( P 0. 01) ；给药低剂量组和高剂量组小鼠血清、肝组织MDA 含量均明显低于模型组( P 0. 01) , SOD 水平明显高于模型组( P 0. 01) 。提示板蓝根对CCl4中毒性小鼠血清、肝组织MDA 含量具有显著的抑制作用，对SOD 活性则具有显著的提高作用。表2各组小鼠肝指数和肝匀浆中SOD、MDA含量比较组别小数数量（只）剂量（10mg/kg）SOD (U/mg)MDA(nmol/mg)生理盐水101042.154.224.082.03CCl4模型组101021.106.769.863.66低剂量组102025.996.35*8.852.65高剂量组108036.114.16*6.732.34*2. 3 各组小鼠血清中ALT、AST水平的比较各组间小鼠血清中ALT、AST水平具有显著性差异（P0.01），模型组小鼠血清中ALT、AST的水平较对照组显著升高(P0.01)；而板蓝根低剂量组高剂量组血清中ALT、AST的水平都有不同程度的降低，与模型组相比差异有显著性差异(P0.05)。表3各组小鼠血清中ALT、AST水平比较组别小数数量（只）剂量（10mg/kg）ALT(U/L)AST(U/L)生理盐水101040.0618.6545.2418.07CCl4模型组1010135.3841.03140.3832.82低剂量组1020110.1530.20*115.1531.25*高剂量组108076.6527.45*82.6523.10*3 讨论CCl4是一种强烈的能够引起肝细胞损伤的化合物，其可在动物体内部分重现人类肝病模式，且重复性好，故一直被研究者作为诱发各种肝损伤模型的造模剂，用于研究肝损伤的发生机制3。本研究采用腹腔注射1ml/L的CCl4花生油溶液建立小鼠急性肝损伤模型，研究板蓝根的保肝作用及其机制研究表明，CCl4导致肝损伤的机制与其代谢产物引起的脂质过氧化反应有关，CCl4经肝微粒体细胞色素P450激活后产生三氯自由基(CCl3)，引发脂质过氧化反应，使肝细胞膜通透性增加，细胞内酶如ALT和AST等大量释放入血液4。SOD是氧自由基的清除剂，能够消除超氧阴离子，抑制脂质过氧化反应，当肝细胞受到自由基攻击时，SOD可因其过度消耗而减少。MDA为脂质过氧化作用过程中形成的过氧化产物，可以使膜的通透性增加，导致机体损伤。通过测定MDA和SOD含量可以反映肝组织损伤的程度，也可反映药物对组织细胞内氧化应激水平的影响5。本研究结果显示，CCl4诱导的肝损伤，由于其脂质过氧化作用导致小鼠血清中ALT、AST的浓度明显升高，肝匀浆中过氧化产物MDA明显增加，抗氧化剂SOD的活性显著降低。而板蓝根可显著降低肝损伤小鼠血清中ALT、AST和肝匀浆中MDA的浓度，升高肝匀浆中SOD的活性，说明板蓝根具有保护肝损伤的作用，其保护肝损伤的机制可能与抗过氧化作用有关。实验结果表明板蓝根对化学性肝损伤均有多种环节的保护作用，其机理可能是降低肝内脂质过氧化反应、保护肝细胞膜、维持膜的正常通透性等。其保肝作用的有效成分有待进一步研究。参考文献1钟哲峰,邓立普,陈坤.蝮蛇毒介导的小鼠急性肝损伤及血清p-选择素水平的表达J.中华急诊医学杂志,2012.21(5).2厉有名.药物性肝损害的临床类型及诊断策略J.中华肝脏病志，2004，12(7). 3周至品,王勤,叶晓雪,等.野生变家种三叶香茶菜对小鼠CCl4急性肝损伤的保护与作用机制 J.贵州农业科学, 2012, 40(6).4 章圣朋,邓子煜,黄成,等.夏枯草总三萜对四氯化碳致急性肝损伤大鼠的保护作用J.安徽医科大学学报