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临床真菌学检验基本技术 河北医科大学第二医院皮肤科 郭兵申 郭兵申 临床真菌基础总论 一 真菌的基本介绍二 真菌分类及存在形式三 真菌的一般检查 一般镜检 常规染色 培养及鉴定方式四 真菌的致病性五 真菌的防治原则 真菌 fungus 属真核细胞型微生物 有真正的核 单细胞或多细胞异养微生物 不含叶绿素 大都能形成硬的多糖细胞壁 细胞壁结构较细菌简单 细胞壁含几丁质和纤维素 估计有100 150万种 分布广泛 从30000米高空 地表 海洋都有真菌的生长 大多数真菌对人类是有益的 只有少数对人类有害 一 真菌的基本介绍 二 真菌分类及存在形式 A 真菌分类从米奇里 P A Micheli 1729 开始 至今已有近280年的历史 这期间经过世界上无数真菌科学工作者的努力 使真菌分类的工作有了极大地发展 B 但是由于真菌分类存在着无数困难 现有的真菌分类系统还有待进一步发展与完善 尚未有一个大家供认的系统 1 真菌的分类 与医学有关的真菌有四个亚门接合亚门 毛霉 根霉等子囊霉亚门 酵母菌属 小孢子霉属等担子霉亚门 新生隐球菌 灵芝 食用菌等半知霉亚门 假丝酵母菌属 球孢子菌属等最新的真菌分类接合菌门子囊菌门担子菌门壶菌门 根据菌落形态分类 酵母菌酵母样菌霉菌双相真菌 二 真菌分类及存在形式 2 真菌的存在形式 菌丝和孢子 A 真菌的菌丝先端为生长点 通过顶端延长而生长 菌丝生长生出分枝 使其与营养基质接触面积增大 提高吸收力 菌丝内原生质从衰老部分流向幼嫩部分 使菌丝不断伸长 这就是生长 B 在一定条件下由生长转入发育阶段即产生繁殖体 生长与发育受环境控制 多数真菌在贫养和低温条件下转入有性阶段 少数菌在高温下转入有性阶段 还有些真菌在其不同的发育阶段 必须在不同的寄主植物上渡过 即转主寄主 现象 C 只要是专门生殖的细胞 正常情况下不需要两两结合就可以单个细胞发育成一个个体 这就是孢子 菌丝的形态 螺旋状 球拍状 结节状 鹿角状 梳状等 菌丝形态有助于鉴别真菌 孢子的形态 有性孢子 同一个菌体或不同菌体上两个细胞融合成经减数分裂形成 无性孢子 细胞分化或出芽形成 形态有分生孢子 叶状孢子和孢子囊孢子 菌丝和孢子 A 氢氧化钾法 将标本置于在玻片上 加一滴10 KOH浮载液 盖上盖玻片放置5 10分钟后或直接在火焰上快速通过2 3次微加热 轻压盖玻片驱逐气泡并将标本压薄后置于显微镜下检查 先在低倍镜下观察有无菌丝和孢子 然后用高倍镜观察孢子和菌丝的形态特征 大小和排列等 对于角质标本 必要时可在10 KOH溶液中 加入终浓度为40 二甲亚砜 促进其溶解 此法适用于皮屑 甲屑 毛发 痂皮 痰 组织 耵聍 粪便等标本的直接涂片检查 B 胶带粘贴法 用透明胶带直接贴于取材部位 数分钟后揭下 充分展平后 直接置贴于加有一滴浮液的载玻片上此液可以是10 20 的KOH 也可以采用乳酸酚棉蓝染液 易于观察 该法常用于花斑癣患处的直接检查 乳酸酚棉蓝染色传统染色法 酵母菌细胞 菌丝体和产孢结构等皆可被染成亮蓝色 背景为暗淡的蓝色 过碘酸 雪夫染色 P A S 在寻找真菌孢子 鉴别真菌 观看真菌结构 等方面有意义其他染色法六胺银法 爱先蓝 alcianblue 法 革兰氏染色法 以及特殊染色法 乳酸酚棉蓝染色 革兰染色法在鉴别细菌 选择抗菌药物 研究细菌致病性等方面有意义 真菌的简单染色也可以 所有的真菌 放线菌均为革兰染色阳性 呈紫黑色 适用于酵母菌 孢子丝菌 组织胞浆菌 诺卡菌及放线菌等培养物的形态检查 石膏样小孢子菌 A 培养特性 B 抵抗力 D 培养基种类 E 菌落形态 F 鉴定方式 A 真菌的侵犯部位不同 其致病性也不相同 浅部真菌侵犯表皮角质层 毛发和甲板深部真菌侵犯真皮及以下组织 粘膜和内脏 B 真菌的致病性表现 1 浅部真菌感染 外源性真菌 手足癣 体癣 股癣 甲癣2 条件致病性真菌感染 内源性真菌 机会致病性真菌 如 白假丝酵母菌 白色念珠菌 引起的鹅口疮3 深部真菌感染 新生 型 隐球菌 侵犯中枢神经系统引起慢性脑膜炎4 真菌毒素的致病作用 急性中毒 毒蕈中毒 慢性真菌中毒 黄曲霉素 青霉素 霉变食物 5 真菌超敏反应性疾病 敏感患者吸入真菌孢子 引起 型超敏反应医学 教育网搜集整理 如 寻痲疹 哮喘 变应性鼻炎等 四 真菌的致病性 五 真菌的防治原则 卫生 干燥 消毒 福尔马