免疫比浊法ppt课件.ppt

实验免疫比浊法检测免疫球蛋白 1 1 2 材料和方法 3 实验结果 实验原理 2 实验原理 免疫球蛋白 Ig 是指一类具有抗体样结构或具有抗体活性的球蛋白 能与诱导其产生的抗原发生特异性结合 是体液免疫应答的主要效应分子 免疫球蛋白水平增高常见于各种慢性细菌感染 如慢性骨髓炎 慢性肺脓肿等 在多种自身免疫病 肝脏疾病患者中可有IgG IgA IgM升高 在系统性红斑狼疮患者中以IgG IgA或IgG IgM升高较多见 在类风湿关节炎中则以IgM升高为主 免疫球蛋白水平降低多见于先天性体液免疫缺乏病 肾病综合症 吸收不良综合症 淋巴瘤 放射损伤和免疫抑制剂治疗后等情况 3 实验原理 血浆蛋白分析技术经历了 试管沉淀反应 琼脂凝胶的扩散实验发展到现代免疫分析技术 其中很重要得一类就是免疫比浊法 4 实验原理 抗体 Ab 与可溶性抗原 Ag 反应 形成一定结构的免疫复合物 在PEG作用下 成为悬浮于反应溶液中的微粒 使样品浊度发生变化 在沉淀反应中形成的复合物微粒具有特殊的光学性质 当一定波长光线通过浊度发生变化的反应混合物时 由于被不溶性免疫复合物吸收而减弱 故在一定范围内吸光度与免疫复合物量呈正相关 当抗体浓度固定时 样品的浊度与其中所含抗原量成正比 5 实验原理 聚乙二醇即PEG是中性 无毒且具有独特理化性质和良好的生物相溶性的高分子聚合物 聚乙二醇具有高度的亲水性 在水溶液中有较大的水动力学体积 并且没有免疫原性 在免疫反应中 为增强抗原抗体反应常使用增聚剂 如3 4 的聚乙二醇等 利用其破坏抗原抗体的水化层 促进其靠近反应 但如浓度不适合 高了会影响其它溶质或产生非特异性聚集影响结果 6 优点 稳定性好 敏感性高 达ng L 精确度高 干扰因素少 结果判断更加客观 准确 快速 简便 结果回报时间短 便于及时将各种信息向临床反馈 又可节约大量人力物力 利于大批量样品的处理 能更好地避免标本之间的污染及标本对人的污染 可利用多道计数器 测光仪 同一份样品同时测定几十种和临床有关的分析项目 血清用量少 具有明显的应用优势 免疫比浊法的特点 实验原理 7 缺点 当抗体或抗原大量过剩时 出现可溶性的复合物 造成误差 应维持反应管中的抗体蛋白量始终过剩 此值要预先测定 受血脂浓度影响 脂蛋白的小颗粒可形成浊度 造成假性升高 少量小抗原抗体复合物极难形成浊度 除非放置较长时间 如要形成较大的的复合物 抗原抗体量应较大 实验原理 免疫比浊法的特点 8 实验材料 1 免疫球蛋白A M G IgA IgM IgG 测定试剂2 免疫球蛋白A M G IgA IgM IgG 校准品 蒸馏水 血清样本3 微量加样枪 试管4 分光光度仪 水浴箱 9 实验方法 空白管 校准管 样本管 蒸馏水 10mL 校准品 10mL 样品血清 10mL OD340 IgX试剂 1mL 37 5min 37 10min 混匀 10 Ig浓度 g L Ig校准浓度 g L 样本管吸光度 校准管吸光度 结果计算方法 实验结果 IgA 1 72