异位妊娠妇女血清沙眼衣原体及热休克蛋白60抗体的测定.doc

异位妊娠妇女血清沙眼衣原体及热休克蛋白60抗体的测定中华妇产科杂志 1999年第9期第34卷 论著摘要作者：韦红吴仕孝沈犁张友逊单位：韦红，吴仕孝重庆医科大学儿童医院400014；沈犁，张友逊美国波士顿大学生殖道沙眼衣原体(CT)感染是与妇女盆腔炎(PID)、异位妊娠(EP)有关的性病。CT感染导致输卵管损害的机理，目前还不完全清楚。近年来研究认为，衣原体相对分子质量为60000的热休克蛋白(chlamydial heat shock protein 60, C-HSP60)参与了沙眼衣原体慢性感染的免疫病理过程，与EP及输卵管性不孕症(TFI)的发病机理有密切的关系1,2。我们采用基因工程的方法产生C-HSP60抗原，对47例EP患者和46例宫内妊娠妇女血清中C-HSP60抗体进行测定，了解C-HSP60在EP发病中的作用。一、资料与方法 （一）研究对象选择1996年2月至1997年8月在重庆医科大学附属第一医院产科住院的47例EP患者（EP组），行B超、血或尿hCG测定，经保守治疗有效及经手术和病理检查证实。同时选择46例产科围产保健的孕妇做为对照组。两组的平均年龄、孕次及人工流产次数差异无显著性，两组的平均产次与平均宫腔操作史差异有显著性（P0.05）。EP组中有4例有EP史，有3例有PID史，2例有不孕史。而对照组中无一例有以上疾病史。采集EP组患者治疗前及对照组妇女肘静脉血，收集血清-20保存待测。（二）方法1重组C-HSP60克隆、纯化及应用： C-HSP60具有高度保守性，在各血清型之间无差异。以沙眼衣原体F型的基因组DNA为模板，经聚合酶链反应（PCR）扩增C-HSP60基因后将PCR产物克隆到T7启动子驱动的表达载体PGEMYX5中。将重组质粒转化入大肠杆菌DH5中，进行测定证实序列无误后，重组质粒转化到大肠杆菌中表达重组蛋白。重组C-HSP60在天然状态下，通过金属鏊合的层析柱纯化。将纯化的C-HSP60融合蛋白作为抗原，包被于酶标板上，用间接法测定血清抗体。2CT特异性IgG、IgM抗体测定：取出待测血清，实验步骤和操作技术按CT(IgG,IgM) 酶联免疫试剂盒(购自深圳晶美公司)操作步骤进行。3统计学分析：计量资料采用t检验，计数资料采用2检验。二、结果1CT特异性IgG、IgM检测： EP组血清CT IgG阳性率明显高于对照组，差异有显著性（P0.05）。EP组CT IgG阳性患者中，仅2例有PID史。EP组血清CT IgM阳性率与对照组的阳性率比较，差异无显著性(P0.05)。见表1。表1两组患者CT IgG、IgM及C-HSP60 IgG、IgM抗体检测结果组别总例数CT IgGCT IgMC-HSP60 IgGC-HSP60 IgM例数百分比（%）例数百分比（%）例数百分比（%）例数百分比（%）EP组473268.1*510.61225.5*612.8对照组461634.848.724.312.2* 与对照组比较，P0.052C-HSP60特异性IgG、IgM检测： EP组血清C-HSP60 IgG阳性率明显高于对照组(P0.05)。EP组CT IgG阳性患者中C-HSP60 IgG阳性率为34.4,而对照组无一例阳性，两组差异有显著性（P0.05），EP组与对照组血清C-HSP60IgM阳性率差异无显著性(P?0.05)。见表1。三、讨论1生殖道CT感染与异位妊娠：本研究将CT IgG抗体作为既往CT感染的证据之一，测定EP患者CT IgG抗体阳性率为68.1，显著高于对照组。说明，生殖道CT既往感染是我国发生EP的重要原因。临床上仅2例EP患者有明确的PID史。在未发现有急性PID史而又发生EP的患者中，93.8的血清有CT IgG抗体存在，提示CT亚临床型输卵管炎是既往CT感染的主要形式。CT感染次数增加，EP发生的危险也随之增加。本研究中，EP患者皆未作过有关CT方面的实验室检查和相应治疗，因此，临床上必须高度重视CT感染。本研究发现，EP发生的危险因素有产次、宫腔操作史，这些因素改变了生殖道的生理条件，削弱了局部防御功能，增加了CT感染的机会，易引起输卵管损害，导致一系列后遗症的发生。2C-HSP60与异位妊娠：CT慢性感染导致EP等后遗症的机理尚不完全清楚。近年来研究发现，C-HSP60与人热休克蛋白60有48同源性3，在CT感染中C-HSP60可能介导了自身免疫性疾病的发生。我们检测了EP患者血清中C-HSP60抗体，结果显示25.5%EP患者C-HSP60 IgG抗体阳性，显著高于宫内妊娠者的4.3。在32例CT IgG阳性的EP患者中, C-HSP60 IgG的阳性率为34.4，而对照组为零。提示，针对C-HSP60的抗体反应，在CT慢性感染所致的EP发病机理中的确起一定作用。当CT感染女性上生殖道时，C-HSP60可能作为一种外源性抗原，激发抗感染免疫；同时，又因与人热休克蛋白60同源性的存在，可模拟机体自身热休克蛋白60产生抗自身热休克蛋白60抗体。这些抗体可识别带有热休克蛋白60的靶细胞和组织，引起炎症损害。输卵管的损害则造成输卵管管腔梗阻、闭塞，从而导致EP。参考文献1Brunham RC, Peeling RW, Maclean L, et al. Chlamydia trachomatis-associated ectopic preg- nancy：serologic and histologic correlates. J Infect Dis, 1992,165: 1 076-1079.2Claman P, Honey L, essamine P, et al. The pregnancy of serum antibody to the chlamydial heat shock protein (CHsp60) as a diagnostic test for tubal factor inferiliey. Fertil Steril,1997,67:501-504.3Cerrone MC, Ma JJ, Stephens RS. Cloning and sequence of the gene for heat shock prot