微生物检验病原性球菌及检验.doc

第十八章病原性球菌及检验本章考点：（掌握，熟练掌握）（1）概念（2）生物学性状（3）微生物学检查方法与原理（4）临床意义（致病性、所致疾病）普及共性，单记个性生物学性状形态与结构：革兰染色性，菌体形态，大小，排列状态，特殊结构。培养特性：对气体需求，营养要求，最适pH值，最适温度，在培养基中的生长现象。生化反应：特殊生化。抗原：分类：致病性致病物质所致疾病微生物学检查：针对生物学性状和致病性一、葡萄球菌属（一）概念一群革兰阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状而得名。（二）生物学特性1.形态与结构：本属菌革兰染色阳性，呈圆球形，直径0.51.5m，不规则成堆排列，形似葡萄串状，在脓汁、肉浸液培养物中，可见单个，成对或短链排列。无鞭毛和芽胞，有些细菌能形成荚膜。2.培养特性：需氧或兼性厌氧，营养要求不高，通常在肉浸液及肉浸液琼脂或加入血液的培养基上生长良好。最适pH为7.4，最适温度为3537。在普通琼脂平板上经352448h培养，可形成圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明的菌落，直径为23mm。可产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素。在血琼脂平板上，几乎所有的葡萄球菌可产生、和溶血素。对人致病的主要是溶血素。在液体培养基（普通肉浸液）中生长迅速呈均匀混浊状。3.生化反应：触酶试验（+），对糖的发酵反应不规则，多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气。多数致病性葡萄球菌能分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶。4.抗原：葡萄球菌水解后，用沉淀法可获得两种抗原，即蛋白抗原和多糖抗原。（1）蛋白抗原：为完全抗原，有种属特异性，无型特异性。存在于葡萄球菌的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白（SPA）。（2）多糖抗原：是半抗原，具有型特异性，有三种：A型多糖抗原；B型多糖抗原；C型多糖抗原。5.分类6.抵抗力：对理化因素抵抗力强，耐热，耐干燥，耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞细菌。（三）致病性及临床意义 葡萄球菌感染的特点是感染部位组织的化脓、坏死和脓肿形成。金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌是引起临床感染最常见的葡萄球菌。1）金黄葡萄球菌2）表皮葡萄球菌是存在于皮肤的正常栖居菌，为医院感染的重要病原菌，它是导致血培养污染的常见细菌之一。3）腐生葡萄球菌是导致尿路感染的常见病原菌之一。（四）微生物学检验方法与原理1.标本采集：根据葡萄球菌感染所致的疾病不同，可采集脓汁、渗出液、伤口分泌物、血液、尿液、粪便、痰液以及脊髓液等。（不同疾病采集不同标本）2.检验方法及鉴定（1）直接镜检：无菌取脓汁、痰、渗出物和脑脊液（离心后取沉渣）涂片，经革兰染色后镜检，如为革兰阳性球菌呈葡萄状排列可初步报告为：“找到革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为葡萄球菌”。（2）分离培养：血液标本（静脉血约5ml）注入50ml葡萄糖肉汤或含硫酸镁肉汤增菌培养，迅速摇匀，以防凝固，置35，一般于24h后开始观察有无细菌生长，若均匀混浊，溶血及胶胨状生长，则接种于血琼脂，进一步鉴定，若无细菌生长，于4872h后自行观察（一般以7天为限），并接种血琼脂，以确定有无细菌生长。血液标本也可注入商品血培养瓶培养。脓汁、尿道分泌物、脑脊液离心沉淀物，通常可直接接种血琼脂。351824h培养，可见直径23mm，产生不同色素的菌落。金黄色葡萄球菌在菌落周围有透明的溶血环。尿液标本，必要时作细菌菌落计数。粪便、呕吐物应接种高盐卵黄或高盐甘露醇琼脂平板，经351824h培养，可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。（3）鉴定试验 金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌触酶+血浆凝固酶+-甘露醇发酵试验+-新生霉素敏感试验SSR报告：检出“XXX葡萄球菌”（4）耐药性检测：检测耐甲氧西林的金葡菌（MRSA），耐甲氧西林的表葡菌（MRSE），耐万古霉素的金黄色葡萄球菌（VRSA），耐万古霉素的表皮葡萄球菌（VRSE）。NCCLSCLSI推荐用头孢西丁纸片法检测对苯唑西林耐药的葡萄球菌。二、链球菌属（一）概念链球菌属为触酶阴性，兼性厌氧，呈圆形或卵圆形的革兰阳性球菌，在液体培养基中生长时易形成长链而表现为沉淀生长（但肺炎链球菌为混浊生长）。（二）生物学特性1.形态与染色：革兰染色阳性。菌体呈圆形，直径为0.81.0m，呈链状排列，在液体培养基中易成长链。在脓汁标本中为短链，成双或单个散在。无鞭毛、无芽胞、某些菌株在血清肉汤中可有荚膜。2.培养特性：本属细菌大多为需氧或兼性厌氧菌，少数微需氧及专性厌氧。营养要求较高，在含有腹水的培养基上生长良好。最适温度为3537，最适pH为7.47.6，在5%C02环境下生长更好。在血琼脂平板上，经35 1824h培养后可形成灰白色、圆形、凸起、直径为0.10.75mm细小菌落，菌落周围出现不同溶血环。3.生化反应：本属细菌触酶试验阴性（与葡萄球菌属鉴别）4.分类（1）根据溶血能力分类：利用链球菌在血平板上溶血情况分为三类，1）甲型（）溶血性链球菌：又称草绿色链球菌。本菌为条件致病菌。2）乙型（）溶血性链球菌：通称溶血性链球菌，透明溶血环。该型细菌致病性最强，常引起人和动物多种疾病。3）丙型（）链球菌：无溶血环。一般无致病性。（2）根据链球菌细胞壁抗原（即C抗原）分类：即常用Lancefield血清分型法，将链球菌分为A、B、C、DT等18个群（其中和J缺），对人类有致病性的90%属A群，B、C、D、G群链球菌感染较少见。5.对理化因素的抵抗力：不强。（三）致病性A群链球菌：草绿色链球菌：属条件致病菌，常与亚急性心内膜炎相关。B群链球菌：是新生儿肺炎、脑膜炎和败血症的病原体。D群链球菌：引起呼吸道和泌尿道感染。治疗原则：A群链球菌感染，青霉素G被列为首选。B群链球菌常采用青霉素G和一种氨基糖苷类合用。（四）微生物学检验方法与原理1.标本采集：不同疾病采集不同标本。2.检验方法及鉴定（1）直接镜检：革兰染色，镜检。如符合链球菌的形态特征可初报。（2）直接检测抗原。（3）分离培养：血液标本，以无菌操作取两份血液各810ml，分别注入肉汤培养基，分别置需氧和厌氧环境中增菌，有细菌生长，然后分别接种于两个血平板，置需氧和厌氧环境中培养。脓汁和咽拭标本接种血平板并涂片染色镜检，若形态酷似链球菌，并革兰阳性，可初报。上述的培养物经351824h培养后，观察菌落特征和溶血情况。链球菌的菌落通常较小，透明或半透明，似针尖大小、凸起，菌落周围可出现-溶血或-溶血，也可不出现溶血。然后取可疑菌落经涂片、染色镜检证实。甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌可产生-溶血，它们的菌落形态非常相似，应予以区别。猪链球菌在羊血平板上为溶血，在兔血平板上呈溶血。（4）鉴定：见生化反应。三、肺炎链球菌（一）概念肺炎链球菌属链球菌科，链球菌属。（二）生物学特性1.形态与染色：革兰阳性，呈矛头状，成双排列，球菌。有荚膜（在人或动物体内易形成），无鞭毛，无芽胞。2.培养特性：需氧或兼性厌氧。最适的温度为3537，最适的pH7.68.0。营养要求较高。在血琼脂平板上可形成脐状菌落，周围有草绿色溶血圈。在液体培养基中培养时间过长，可因产生自溶，培养液可变澄清，管底沉淀。3.生化反应：菊糖、胆汁溶解试验阳性、0ptochin敏感试验阳性。（与草绿色链球菌的鉴别。）（三）致病性致病物质：荚膜。所致疾病主要有大叶性肺炎、支气管炎。（四）微生物学检验方法与原理1.标本采集2.试验方法及鉴定（1）直接涂片检查：经革兰染色，镜检见革兰阳性矛尖状双球菌。（2）分离培养：血液、脑脊液需增菌培养，经葡萄糖硫酸镁肉汤增菌后，肺炎链球菌可呈均匀混浊，而且有绿色荧光。无须增菌培养的脓汁或脑脊液沉渣接种于血琼脂，置5%10%C02环境中，经35 1824h培养后观察茵落，并取可疑菌落作进一步鉴定。（3）鉴定试验1）胆汁溶解试验：阳性。2）菊糖发酵试验：阳性。3）动物试验：小白鼠对肺炎链球菌极为敏感。4）荚膜肿胀试验：阳性。5）0ptochin敏感试验：阳性。6）快速乳胶凝集试验阳性。四、肠球菌属（一）概念肠球菌属是肠道的正常栖居菌。（二）生物学形状为革兰阳性，成双或短链状排列的卵圆形球菌，无芽胞，无荚膜，部分肠球菌有稀疏鞭毛。营养要求高，需氧及兼性厌氧，在胆汁七叶苷和含6.5%NaCl培养基中可以生长（此点可与链球菌鉴别）。在血平板上主要表现为-和-溶血。触酶阴性，多数肠球菌能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR）。与同科链球菌的显著区别在于肠球菌能在高盐（6.5%NaCl）、高碱（pH9.6）、40%胆汁培养基上和1045环境下生长，并对许多抗菌药物表现为固有耐药。目前，肠球菌是革兰阳性菌中仅次于葡萄球菌属的重要医院感染病原菌，其所致感染中最常见的为尿路感染，其次为腹部和盆腔等部位的创伤和外科术后感染。临床上分离率最高的是粪肠球菌，其次是屎肠球菌。粪肠球菌的某些菌株在马血、兔血平板上出现溶血。（三）微生物学检查方法与原理合理采取相应标本，如尿液、脓汁、胆汁、分泌物或血液等，以直接涂片进行初步检查。分离培养后，挑取可疑菌落，进行涂片、染色、镜检、触酶试验、胆汁七叶苷试验和6.5%NaCl耐受试验，可鉴定到属。如鉴定到种还需进行必要的生化试验。对具有临床意义的肠球菌应进行体外药敏试验，一般要测试对-内酰胺类尤其是青霉素类（如青霉素、氨苄西林）、万古霉素和氨基糖甙类（如庆大霉素）的敏感性，耐万古霉素肠球菌（VRE）国外检出率较国内高。 （四）治疗原则治疗肠球菌感染一般采用-内酰胺类和氨基糖甙类联合治疗。五、奈瑟菌属奈瑟菌属为一大群革兰阴性双球菌，无鞭毛，无芽胞，有菌毛。专性需氧，氧化酶阳性。本属主要有9个种。其中对人致病的是脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。（一）脑膜炎奈瑟菌1.概念脑膜炎奈瑟菌简称脑膜炎球菌，是引起流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）的病原体。2.生物学特性（1）形态与染色：为革兰阴性双球菌，菌体呈肾形，成对排列，坦面相对，菌体直径0.61.5m，在患者的脑脊液中位于中性粒细胞内。（2）培养特性：营养要求高，属苛养菌，必须在含有血清或含有多种氨基酸，无机盐等物质的培养基上生长良好。（3）生化反应：绝大多数菌株能分解葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气（因淋病奈瑟菌不分解麦芽糖，借此与之鉴别），触酶试验阳性，氧化酶试验阳性。（4）抗原及分型：主要有四种抗原：荚膜多糖群特异性抗原、外膜蛋白型特异性抗原、脂多糖抗原及核蛋白抗原。根据群特异性荚膜多糖抗原不同，采用凝集反应和琼脂扩散试验可将本菌分为A、B、C、D、X、Y、Z、1916、29E和W135等。目前，对人致病的主要是A群，偶见B群、C群及1916群引起散发病例。3.临床意义致病物质：菌毛，荚膜，内毒素。所致疾病：脑膜炎奈瑟菌是流行性脑脊髓膜炎的病原菌。主要表现发热，皮肤瘀斑，脑膜刺激症状。存在于携带者或病人的鼻咽部，借飞沫经空气传播，冬末春初为流行高峰。4.微生物学检验 （1）标本采集：血液；瘀斑渗出液；脑脊液；鼻咽分泌物。因本菌能产生自溶酶，易自溶，故采集的标本不宜置冰箱，应立即送检。（2）检验方法及鉴定：1）直接涂片检查：取脑脊液离心后沉淀物涂片或刺破瘀斑血印片，干燥固定后革兰染色。若发现中性粒细胞内（或胞外）革兰阴性双球菌，呈肾形成对排列，可初报。2）分离培养：将标本葡萄糖肉汤增菌培养液直接接种于血琼脂平板、巧克力琼脂或EPV琼脂，置5%10%C02环境中，35培养1824h后可见圆形、灰褐色、湿润、光滑、边缘整齐、直径12mm的小菌落，经涂片证实为草兰阴性双球菌，并进一步根据相应的生化反应等试验予以鉴定。3）鉴定：细菌染色形态；氧化酶试验阳性；触酶试验阳性；分解葡萄糖、麦芽糖产酸不产气；荚膜多糖抗原直接凝集试验。5.治疗原则：青霉素G为首选，三代头孢对脑膜炎奈瑟菌也具有很强的抗菌活性。青霉素过敏的病人可考虑选用三代头孢或氯霉素。（二）淋病奈瑟菌1.概念：淋病奈瑟菌简称淋球菌，是淋病的病原体，人类是其唯一的天然宿主和传染源。2.生物学特性（1）形态与染色：本菌的形态与脑膜炎奈瑟菌很相似。在脓汁标本中，此菌通常位于中性粒细胞内，而在慢性淋病时常位于细胞外。从患者体内新分离的菌株可有荚膜和菌毛，经人工培养后，呈卵圆形或球形，排列不规则。无芽胞和鞭毛。（2）培养特性：营养要求较高，须在含有血液、血清或多种氨基酸和无机盐类物质的培养基上生长良好。国内常用血液琼脂、巧克力琼脂、EPV琼脂等培养基。初次分离时，须置5%10%C02条件下才能生长。（3）生化反应：可发酵葡萄糖、产酸，但不酵解麦芽糖（常借此与脑膜炎奈瑟菌相鉴别）。氧化酶和触酶试验均阳性。主要有三种抗原：菌毛蛋白抗原、脂多糖抗原和外膜蛋白抗原。对外界抵抗力极低。3.微生物学检验（1）标本采集：脓性分泌物，尿道拭子，宫颈口分泌物，结膜分泌物，血液。（2）检验方法及鉴定：1）直接涂片检查：收集标本后立即涂片、革兰染色。镜检时见中性粒细胞内数对革兰阴性双球菌，可初报。2）分离培养：细菌培养仍是目前世界卫生组织推荐的筛选淋病患者的唯一方法。所采集的标本应及时接种含有两种以上抗生素（万古霉素和多粘菌素等）的营养培养基（EPV）上。淋球菌对培养基的营养要求很高，且对冷、热、干燥和消毒剂抵抗力低，故采样后须立即接种于预温的选择性培养基和非选择性培养基中，如巧克力平板，置于含5%10%的二氧化碳环境中，35培养48h。取小而透明似水滴状、无色素易乳化菌进一步鉴定。3）鉴定：取可疑菌落进行涂片，革兰染色镜检，若见革兰阴性双球形，生化反应：氧化酶阳性，仅分解葡萄糖产酸；免疫学方法：荧光抗体染色法、协同凝集试验；核酸探针杂交法。氧化酶试验阳性，可初判，并进行相关的生化反应，如仅发酵葡萄糖而不发酵麦芽糖与蔗糖，以及30%H2O2试验阳性可与脑膜炎奈瑟菌等相鉴别。4.临床意义：淋病奈瑟菌是常见的性传播疾病淋病的病原菌，主要通过性接触直接侵袭感染泌尿生殖道，口咽部及肛门直肠的黏膜。如单纯性淋病、盆腔炎、淋菌型结膜炎。5.治疗原则：一般为三代头孢菌素，氟喹诺酮类、壮观霉素可作为替代药物。本章练习题：淋病奈瑟菌与脑膜炎奈瑟菌用哪项实验鉴别 A.葡萄糖发酵试验B.麦芽糖发酵试验C.氧化酶试验D.触酶试验E.革兰染色答疑编号500735180101正确答案BSPA是 A.肠杆菌科的细菌的抗原B.葡萄球菌细胞壁的蛋白成分C.沙门菌的表面抗原D.核蛋白抗原E.链球菌属表面抗原答疑编号500735180102正确答案B 鉴别肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌可用A.外斐试验B.肥大试验C.乳糖发酵试验D.菊糖分解试验E.血浆凝固酶试验答疑编号500735180103正确答案D 耐甲氧西林的表皮葡萄球菌为 A.MRSAB.MRSEC.MRSOD.MRNSE.SPA答疑编号500735180104正确答案B B群链球菌不引起下列哪种疾病 A.败血症B.肺炎C.脑膜炎D.咽喉炎E.风湿热答疑编号500735180105正确答案E 淋病奈瑟菌的重要致病因素是A.菌毛B.杀白细胞素C.荚膜D.内毒素E.以上都是答疑编号500735180106正确答案A 引起剥脱性皮炎的细菌是 A.肺炎球菌B.链球菌C.金黄色葡萄球菌D.脑膜炎奈瑟菌E.肠球菌答疑编号500735180107正确答案C 一位老年患者因外伤住院治疗，插导尿管一周后出现尿路感染。取尿液检查，革兰染色见阳性球菌，有的呈短链排列，分离培养营养要求较高，血培养生长较好，有甲型溶血；触酶阴性，药敏试验对第三代头孢菌素耐药，在高盐（6.5% NaCl）、高碱（Ph 9.6）、高胆汁（40%）培养基上生长。此菌为 A.大肠埃希菌B.草绿色链球菌C.表皮葡萄球菌D.肠球菌E.肺炎链球菌答疑编号500735180108正确答案D 与脑膜炎奈瑟菌相关的性状有 A.革兰阴性肾形双球菌B.营养要求不高C.触酶试验阳性D.氧化酶试验阳性E.无芽胞，无鞭毛答疑编号500735180109正确答案ACDE 初步鉴定B群链球菌的试验为 A.马尿酸钠水解试验B.CAMP试验C.杆菌肽敏感试验D.胆汁七叶苷试验E.Optochin敏感试验答疑编号500735180110正确答案AB第十九章肠杆菌科及检验本章考点：1.概述（1）概念（2）命名与分类原则（3）共同特点（4）自然与人体内的分布（5）微生物学检查方法（6）临床意义2.埃希菌属、沙门菌属、志贺菌属、变形杆菌属、耶尔森菌属（1）生物学性状（2）微生物学检查法（3）临床意义一、概述和通性（一）概念肠杆菌科是由多个菌属组成，其生物学性状相似，均为革兰阴性杆菌。大多数肠道杆菌属于正常菌群，作为条件致病菌而引起疾病。其中包括常引起腹泻和肠道感染的细菌（埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属）和常导致院内感染的细菌（枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属和摩根菌属），以及一些在一定条件下偶可引起临床感染的细菌。（二）分类根据伯杰系统细菌学手册（1984年）将肠杆菌科的细菌分为20个属即埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、哈夫尼亚菌属、爱德华菌属、普罗威登斯菌属、变形杆菌属、摩根菌屑、耶尔森菌属等。（三）生物学特性1.形态与染色革兰阴性杆菌，其菌体大小为（1.06.0）m（0.31.0） m。多数有周鞭毛，除外志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC无鞭毛。均不形成芽胞，少数菌属细菌可形成荚膜。2.培养：需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普通琼脂培养基和麦康凯培养基上均能生长并形成中等大小的S型菌落，液体培养基中呈混浊生长。3.生化反应：发酵葡萄糖产酸、产气， 乳糖发酵试验: 肠道非致病菌（），肠道致病菌（）（除外变形杆菌）。肠杆菌科定科试验主要项目是革兰阴性杆菌、触酶阳性，氧化酶阴性，硝酸盐还原试验阳性。4.抗原构造：包括菌体（O）抗原，鞭毛（H）抗原和表面抗原（如Vi抗原、K抗原）3种。5.变异：包括菌落SR变异，鞭毛HO变异和耐药性或生化反应性质的改变。6。抵抗力：不强。加热60，30分钟即被杀死。不耐干燥，对一般化学消毒剂敏感。对低温有耐受力，能耐胆盐。（四）致病性肠杆菌科细菌种类多，可引起多种疾病：1.致病性肠道杆菌：以肠内感染为主，腹泻为共显症状，引起急慢性肠道感染、食物中毒、旅游者腹泻及肠热症等。2.条件致病菌：为医院感染主要病原菌，出现移位感染。（五）微生物学检验1.分离培养：将粪便或肛拭标本立即接种在肠道菌选择培养基上或先增菌后再分离；血、尿或脓汁等其他标本原则上不使用选择培养基。分离纯菌后，根据菌落特点，结合革兰染色及氧化酶反应结果作进一步鉴定。2.鉴定（1）初步鉴定：原则是：确定肠杆菌科的细菌，应采用葡萄糖氧化-发酵试验及氧化酶试验与弧菌科和非发酵菌加以鉴别；肠杆菌科细菌的分群，多采用苯丙氨酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验，将肠杆菌科的细菌分为苯丙氨酸脱氨酶阳性、葡萄糖酸盐利用试验阳性和两者均为阴性反应三个类群；选择生化反应进行属种鉴别。表5-19-1肠杆菌科的初步分类菌属名苯丙氨酸葡萄糖酸盐变形杆菌属 普罗威登斯菌属 摩根菌属 克雷伯菌属肠杆菌属* *沙雷菌属哈夫尼亚菌属埃希菌属志贺菌属沙门菌属枸橼酸杆菌属爱德华菌属耶尔森菌属*有例外将选择培养基或鉴别培养基上的可疑菌落分别接种克氏双糖铁琼脂（KIA）和尿素-靛基质-动力（MIU）复合培养基管中，并根据其六项反应结果，将细菌初步定属。（2）最后鉴定：肠杆菌科各属细菌的最后鉴定是根据生化反应的结果定属、种，或再用诊断血清做凝集反应才能作出最后判断。二、埃希菌属（一）概念埃希菌属包括5个种，即大肠埃希菌、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫尔曼埃希菌和伤口埃希菌。临床最常见的是大肠埃希菌。大肠埃希菌俗称大肠杆菌，大多数菌株是人类和动物肠道正常菌群。（二）生物学特性（性状）1.形态与染色：为革兰阴性短杆菌，（1.03.0）m（0.40.7）m。多数有周鞭毛，能运动。有菌毛、荚膜及微荚膜。2.培养特性：兼性厌氧菌，营养要求不高，在普通营养肉汤中呈浑浊生长。普通营养琼脂上呈灰白色的光滑型菌落。血琼脂平板上，少数菌株产生溶血环。在伊红美蓝琼脂上，由于发酵乳糖，菌落呈蓝紫色并有金属光泽。麦康凯和SS琼脂中的胆盐对其有抑制作用，耐受菌株能生长并形成粉红色菌落。3.生化反应：吲哚、甲基红、V-P、枸橼酸盐试验（IMViC试验）为+-（肠杆菌属多为-+）。克氏双糖铁琼脂（KIA）上斜面和底层均产酸产气，H2S阴性。动力、吲哚、尿素（MIU）培养基的生化反应为+-。4.抗原结构：大肠埃希菌的抗原由菌体抗原（O）、表面抗原（K）和鞭毛抗原（H）三种构成。现已知有171种O抗原，100种K抗原和56种H抗原。一个菌株的抗原类型由特殊的0、K和H抗原的代码表示，其血清型别的方式是按0：K：H排列，例如0111：K58（B4）：H2。（二）致病性主要是侵袭力、内毒素、肠毒素等致病因素引起各种炎症（如胆囊炎、泌尿系感染、肺炎、新生儿脑膜炎、伤口感染、菌血症及腹泻等）。内毒素还可引起发热、休克、DIC等。1.肠道外感染：主要由正常菌群条件致病，以泌尿系统感染常见，高位严重尿道感染与特殊血清型大肠埃希菌有关。如菌血症、胆囊炎、腹腔内脓肿。2.肠道感染：致病性大肠埃希菌有下列五个病原群。（1）肠产毒型大肠埃希菌（ETEC）：引起霍乱样肠毒素腹泻（水样泻）。（2）肠致病型大肠埃希菌（EPEC）：主要引起婴儿腹泻。（3）肠侵袭型大肠埃希菌（EIEC）：可侵入结肠黏膜上皮，引起志贺样腹泻（能产生粘液脓血便）。（4）肠出血型大肠埃希菌（EHEC）：又称产志贺样毒素（VT）大肠埃希菌（SLTEC或UTEC），其中O157：H7可引起出血性大肠炎和溶血性尿毒综合征（HUS）。临床特征为严重的腹痛、痉挛，反复出血性腹泻，伴发热、呕吐等。严重者可发展为急性肾衰竭。（5）肠粘附（集聚）型大肠埃希菌（EAggEC）：也是新近报道的一种能引起腹泻的大肠埃希菌。3.CDC将大肠埃希氏菌O157：H7列为常规检测项目EHEC的血清型50种，最具代表性的是O157：H7。在北美许多地区，O157：H7占肠道分离病原菌的第二或第三位，是从血便中分离到的最常见的病原菌，分离率占血便的40%，6、7、8三个月O157：H7感染的发生率最高。且0157是4岁以下儿童急性肾功衰的主要病原菌，所以CDC提出应将大肠埃希氏菌0157：H7列为常规检测项目。（三）微生物学检验1.标本采集：肠道感染可采集粪便；肠道外感染可根据临床感染情况采集中段尿液、血液、脓汁、胆汁、脑脊液、痰、分泌液等。2.检验方法及鉴定（1）涂片与镜检：脓汁及增菌培养物发现单一革兰阴性杆菌，可初步报告染色、形态、性状供临床用药参考。（2）分离培养：粪便标本可用弱选择鉴别培养基进行分离，脓汁等可用血平板分离，取可疑菌落进行形态观察及生化反应。（3）鉴定1）初步鉴定：根据菌落特征，涂片染色的菌形及染色反应，取纯培养物作生化反应。凡符合KIA：AA或KA、产气或不产气、H2S-；MIU：动力+或-、吲哚+、脲酶-；氧化酶-，IMViC:+-，可鉴定为大肠埃希菌。2）致病性大肠埃希菌:EPEC的鉴定：EIEC的鉴定：应与志贺菌相鉴别，两者的主要鉴别试验可用醋酸钠和葡萄糖铵利用试验及粘质酸盐产酸三种试验。大肠埃希菌均为阳性，而志贺菌均为阴性。ETEC毒素的检测：采用改良Elek法测定LT并采用乳鼠胃内灌注法检测ST。EHEC的血清学鉴定：EAEC的鉴定：检测细菌对HEP-2细胞或Hela细胞的粘附性。肠道外感染，经涂片染色，分离培养后，生化鉴定到种；由于大肠埃希菌是超广谱-内酰胺酶（ESBLs）的主要产酶株，该酶由质粒介导。对ESBLs产酶株所致感染需要采用碳青酶烯类或内酰胺类抗生素酶抑制剂或头霉菌素类进行治疗。肠道内感染还需做血清分型、毒素测定或毒力试验。食物、饮料、水等卫生细菌学检查，主要进行大肠菌群指数检测。三、志贺菌属志贺菌属是人类细菌性痢疾最常见的病原菌，通称痢疾杆菌。根据生化反应与血清学试验该属细菌分为痢疾、福氏、鲍氏和宋内志贺菌四群。CDC分类系统（1989）将生化性状相近的A、B、C群归为一群，统称为A、B、C血清群，将鸟氨酸脱羧酶和-半乳糖苷酶均阳性的宋内志贺菌单列出来。我国以福氏和宋内志贺菌引起的菌痢-最为常见。（一）生物学特性1.形态与染色：革兰阴性短小杆菌，（23）m（0.50.7）m，无荚膜，无芽胞，无鞭毛，有菌毛。2.培养特性：需氧或兼性厌氧，液体培养基中呈浑浊生长，在普通琼脂平板和SS培养基上形成中等大小、半透明的光滑型菌落，宋内志贺菌可形成扁平、粗糙的菌落。3.生化反应：志贺菌属的细菌KIA：KA、产气-+、H2S-，MIU：动力-、吲哚+-、尿酶-，氧化酶-，不产生赖氨酸脱羧酶，氧化酶试验阴性。4.抗原结构：志贺菌属只有O抗原而无鞭毛抗原，个别菌型及新分离菌株有K抗原。（二）致病性致病物质：侵袭力：菌毛粘附于肠粘膜上皮细胞，诱导细胞内吞。内毒素：破坏肠粘膜；肠壁通透性；肠壁植物神经腹痛，腹泻，里急后重，粘液脓血便。外毒素（志贺毒素，ST）：肠毒素活性；细胞毒活性；神经毒活性所致疾病：细菌性痢疾，简称菌痢。1.急性菌痢。2.中毒性菌痢。3.慢性菌痢。传染源为病人和带菌者，经粪口传播。（三）微生物学检验1.标本采集尽可能在发病早期及治疗前采集新鲜粪便，选择脓血便或粘液便，必要时可用肛拭子采集。2.检验方法及鉴定（1）分离培养：取粪便（粘液或脓血部分）或肛拭标本接种GN肉汤增菌及再进行分离培养。一般同时接种强弱选择性不同的两个平板。强选择鉴别培养基可用沙门、志贺菌选择培养基（SS）；弱选择培养基可用麦康凯或中国蓝培养基。培养1824h后选取可疑菌落进行下列鉴定。（2）鉴定1）初步鉴定：挑选可疑菌落34个先用志贺菌属多价诊断血清作试探性玻片凝集试验。将试探性凝集试验阳性的菌落至少接种23支KIA和MIU，经35 培养1824h，凡符合KIA：KA、产气-+、H2S-，MIU：动力-、吲哚+-、尿酶-，并结合试探性玻片凝集试验阳性结果可鉴定为志贺菌属。2）最后鉴定3.与类志贺邻单胞菌和伤寒沙门菌的鉴别：可用动力和氧化酶试验加以鉴别，志贺菌均为阴性，而类志贺邻单胞菌为阳性。伤寒沙门菌硫化氢和动力阳性，能与沙门菌属因子血清（0多价A-F群或Vi）凝集而不与志贺菌属因子血清凝集。（四）防治原则人工主动免疫用于预防目前尚不理想，治疗细菌性痢疾一般首选氟喹诺酮类抗生素。四、沙门菌属（一）生物学特性1.形态与染色：本属菌为（0.71.5）m（2.05.0）m，无芽胞，无荚膜的革兰阴性直杆菌。除鸡沙门菌外都有周身鞭毛，能运动，多数有菌毛。2.培养特性：营养要求不高，在普通琼脂培养上即能生长，在液体培养基中呈均匀混浊。在SS琼脂和麦康凯琼脂培养基上3537 24h可形成直径约24mm的透明或半透明菌落，对胆盐耐受。产H2S者在SS琼脂上形成黑色中心。3.生化反应：除亚利桑那菌外均不能发酵乳糖，大多数IMViC试验为-+-+，KIA：KA、产气+-、H2S+-，MIU：动力+、吲哚-、脲酶+。4.抗原结构：主要由0抗原和H抗原组成，部分菌株有类似大肠杆菌K抗原的表面抗原，与细菌的毒力有关，故称Vi抗原。（1）0抗原：即菌体抗原。沙门菌属的菌体抗原有58种，以阿拉伯数字依次标记：根据沙门菌有共同的O抗原这一特点，分类学者将有共同抗原的细菌归为一组，这就使沙门菌分成42个群（或组）。即A、B、CZ和O16O67群。每群都有群特异性抗原，如A群O2、B群04、D群O9等。（2）H抗原：即鞭毛抗原。H抗原是定型的依据。沙门菌H抗原有两相，第一相为特异性抗原，用a、b、c表示；第二相为共同抗原，用1、2、3表示。（3）表面抗原：已证实沙门菌属有Vi、M和5抗原三种。Vi抗原加热6030min或经石炭酸处理被破坏，其存在时可阻止0抗原与相应抗体发生凝集。 5.变异性（1）SR变异，菌落光滑型经人工培养传代后逐渐变成粗糙型。此时菌体表面的特异多糖抗原丧失，在生理盐水中可出现自凝。（2）HO变异，指有鞭毛的沙门菌失去鞭毛的变异。（3）相位变异，具有双相H抗原（第相为特异相，第相为非特异相）的沙门菌变成只有其中某一相H抗原的单相菌，称相位变异。（4）VW变异，失去全部Vi抗原的变异。（二）致病性致病因素有侵袭力、内毒素和肠毒素3种。临床上可引起胃肠炎、肠热症、菌血症或败血症等。其中肠热症属法定传染病。1.肠热症：即伤寒与副伤寒病。由伤寒与副伤寒沙门菌所引起的慢性发热症状。为法定传染病之一。2.食物中毒：引起食物中毒的沙门菌以鼠伤寒、肠炎、汤卜逊、猪霍乱、乙型及丙型副伤寒沙门菌为常见。3.慢性肠炎：沙门菌可引起老人和儿童的慢性肠炎。4.败血症：多由猪霍乱沙门菌引起。5.沙门菌的局部感染如颈部、腰部等。有鼠伤寒沙门菌引起儿童的医院感染报道。（三）微生物学检查1.标本采集：根据不同疾病采取不同的标本进行分离与培养。肠热症的第一、二周采血液，第二、三周采粪便与尿液。整个病程中骨髓分离细菌阳性率较高。食物中毒采集食物与粪便。2.检查方法及鉴定（1）分离培养1）粪便：一般将粪便或肛拭直接接种于SS和麦康凯平板上，用两种培养基的目的是为提高标本的阳性检出率。2）血液和骨髓：抽取患者血液5ml或骨髓0.5ml，立即接种于含0.5%胆盐肉汤或葡萄糖肉汤5ml试管中进行增菌，48h将培养物移种到血平板和肠道鉴别培养基上，若有细菌生长取菌涂片革兰染色并报告结果。对增菌培养物连续培养7天，仍无细菌生长时，则报告阴性。3）尿液：取尿液23ml经硫磺酸盐肉汤增菌后，再接种于肠道菌选择培养基或血平板上进行分离培养，亦可将尿液离心沉淀物分离培养。4）局部感染的脓液。（2）鉴定：沙门菌属的鉴定与志贺菌属相同，须根据生化反应和血清学鉴定两方面进行。1）初步鉴定：如为革兰阴性杆菌时作氧化酶试验，阴性时，挑取可疑菌落分别移种于KIA和MIU上。并作生化反应。以沙门菌多价诊断血清作玻片凝集试验。凡符合KIA：KA、产气+-、H2S+-、MIU：动力+、吲哚-、脲酶+，氧化酶-，触酶+，硝酸盐还原+，以沙门菌多价血清作玻片凝集试验阳性，鉴定为沙门菌属。2）最后鉴定：沙门菌血清学鉴定主要借助于沙门菌O抗原多价血清与O、H、Vi抗原的单价因子血清。甲型副伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌和伤寒沙门菌分别属于A、B、D血清群。（3）血清学诊断：肥达试验：用已知的伤寒沙门菌0、H抗原，甲乙丙副伤寒沙门菌H抗原稀释后与被检血清作定量凝集试验，以检测患者血清中抗体的含量，来判断机体是否受沙门菌感染而导致肠热症并判别沙门菌的种类。（四）防治原则加强饮食卫生，防止污染食品及水源经口感染，携带者的积极治疗，皮下注射死菌苗或口服减毒活菌苗是预防沙门菌属细菌传染的几个主要措施。临床治疗是根据体外药敏试验结果选用合适抗生素，保持水及电解质的平衡，对并发症积极处理，如肠出血、肠穿孔、胆囊炎、心肌炎等。对于伤寒沙门菌感染，可选择的抗生素有氯霉素、氟喹诺酮类、氨苄西林、复方新诺明、三代头孢等。五、变形杆菌属、普罗威登斯菌属及摩根菌属变形杆菌属包括四个种，即普通变形杆菌、奇异变形杆菌、产粘变形杆菌和潘氏变性杆菌。普罗威登斯菌属有四个种：即产碱普罗威登斯菌、斯氏普罗威登斯菌、雷极普罗威登斯菌和P.rustigianii。摩根菌属只有一个种，即摩根摩根菌。这三个属的细菌为肠道寄居的正常菌群，在一定条件下能引起各种感染，也是医源性感染的重要条件致病菌。（一）生物学特性1.形态与染色：为革兰阴性杆菌。两端钝圆，有明显的多形性，呈球状或丝状，有周身鞭毛，运动活泼；摩根菌属的部分菌株在30以上培养条件下不形成鞭毛，无芽孢，无荚膜。2.培养：需氧或兼性厌氧，对营养无特殊要求，生长温度1043。在营养琼脂和血琼脂平板上普通变形杆菌和奇异变形杆菌的大多数菌株呈迁徙扩散生长现象，即迅速形成波纹状薄膜而布满整个平板培养基表面。普罗威登斯菌和摩根菌无迁徙生长现象。在含有胆盐的培养基表面菌落呈扁平、圆形、半透明。在含有铁或铅离子的培养基中产硫化氢菌株的菌落中心呈黑色。SS培养基上有与沙门菌、志贺菌相似的菌落特征。在液体培养基中迅速生长，早期培养物呈混浊，可有部分沉淀。3.生化反应：三属菌共同特点是氧化酶阴性，苯丙氨酸脱氨酶阳性的革兰阴性杆菌。三属菌的区别：见下表。 变形杆菌属普罗威登斯菌属摩根菌属迁徙生长+-硫化氢产生+-液化明胶+-酯酶+-鸟氨酸脱羧酶-+枸橼酸盐利用-+- 变形杆菌属的种鉴别：普通变形杆菌靛基质和麦芽糖均阳性，鸟氨酸脱羧酶阴性；奇异变形杆菌靛基质和麦芽糖均阴性，鸟氨酸脱羧酶阳性；产粘变形杆菌靛基质和鸟氨酸脱羧酶均阴性，麦芽糖阳性。普罗威登斯菌属的种鉴别：产碱普罗威登斯菌尿素和蕈糖均阴性，侧金盏花醇阳性；斯氏普罗威登斯菌尿素可阴性可阳性，蕈糖阳性，侧金盏花醇阴性；雷氏普罗威登斯菌尿素和侧金盏花醇均阳性，蕈糖阴性。（二）致病性1.变形杆菌属：普通变形杆菌和奇异变形杆菌引起尿道、创伤、烧伤的感染，引起的尿路感染仅次于大肠埃希菌。普通变形杆菌还可引起多种感染及食物中毒；奇异变形杆菌还可引起婴幼儿肠炎。本菌属细菌具O抗原及H抗原，普通变形杆菌OX19、OX2、OXk的菌体抗原与某些立克次体有共同抗原，这就是外-斐（Well-Felix）反应，是用以诊断某些立克次体病的依据。2.普罗威登斯菌属：本属菌可引起烧伤、创伤与尿道感染。3.摩根菌属：本属细菌为医源性感染的重要病原菌之一。可致泌尿道感染和伤口感染。（三）微生物学检验1.标本采集：根据病情采集尿液、脓汁、伤口分泌物及婴儿粪便等。2.检验方法及鉴定（1）直接涂片：尿液、脑脊液、胸腹水等离心沉淀后，取沉淀物涂片；脓液和分泌液可直接涂片，行革兰染色后，观察形态及染色性。（2）分离培养：将各类标本分别接种于血琼脂平板和麦康凯或伊红美蓝（EMB）琼脂平板；或SS琼脂和麦康凯或EMB琼脂平板上，孵育35371824h后挑选菌落。为了抑制变形杆菌属菌的迁徙生长，可于血琼脂中加入石碳酸或苯乙醇，使其最终浓度为1gL和0.25%，这并不影响其他细菌的分离。变形杆菌属在血琼脂上呈迁徙生长，在肠道菌选择培养基上形成不发酵乳糖菌落，在SS琼脂上常为有黑色中心的菌落。（3）鉴定：接种前述生化培养基，并作氧化酶试验，进行此三个属和属、种鉴定。六、耶尔森菌属耶尔森菌属包括11个种，其中鼠疫耶尔森菌、假结核耶尔森菌和小肠结肠炎耶尔森菌肯定与人类致病有关。（一）鼠疫耶尔森菌鼠疫耶尔森菌俗称鼠疫杆菌，是烈性传染病鼠疫的病原菌。鼠疫是自然疫源性传染病，通过直接接触染疫动物或节肢动物叮咬而感染。临床常见腺鼠疫、败血型鼠疫和肺鼠疫。1.生物学特征（1）形态与染色：鼠疫耶尔森菌为革兰阴性杆菌，形态短而粗，两端钝圆，两极浓染，大小为（1.02.0）m（0.50.7）m。有荚膜，无鞭毛，无芽孢。陈旧培养物或3%氯化钠琼脂培养基上呈明显多形性。（2）培养：需氧和兼性厌氧，在普通培养基上即可生长。最适生长温度是2830。培养基最适pH为6.97.1。培养1618h，用显微镜观察可见一层形状不一，浅灰色小菌落，这是鼠疫耶尔森菌培养初期的菌落特征，这对本菌的鉴定有一定意义。在培养2448h后可形成直径0.10.2mm，圆形。中心突出，透明的浅灰色小菌落。72h后菌落直径可达4mm。在液体培养基中生长良好，开始浑浊生长，24h后为沉淀生长，48h后形成菌膜，稍加震动菌膜呈钟乳石状下垂。（3）生化反应：不活跃，在双糖铁培养基上可分解葡萄糖，少数菌株可分解乳糖，不产生硫化氢，MIU培养基无动力，不产生靛基质，尿素酶试验阴性。2.微生物学检验（1）标本采集：主要采集血液、痰和淋巴结穿刺液。（2）检验方法及鉴定：鼠疫耶尔森菌为甲类病原菌，传染性极强，故应严格遵守检验操作规程，要求实验室有隔离设施，防鼠、防蚤和严密的个人防护措施；用过的实验器材及物品随时消毒处理。1）直接涂片检查：一般制片两张，分别用于革兰染色和美蓝染色，可见革兰阴性球杆菌，形似芝麻，两端浓染。2）分离培养：鼠疫耶尔森菌学检验中分离培养步骤十分重要，分离培养时未污染标本可直接接种血平板，污染标本则需接种选择性培养基，如龙胆紫亚硫酸钠琼脂。经2830培养2448h后，挑选菌落作鉴定。3）鉴定：根据菌落特征，细菌形态和肉汤中呈“钟乳石”状发育，KIA结果利用葡萄糖，不利用乳糖，不产H2S，MIU均为阴性反应。为作最后鉴定应补充以下实验方法：噬菌体裂解试验；动物试验；免疫学方法。（二）小肠结肠炎耶尔森菌1.生物学特性（1）形态与染色：菌体大小为（1.02.0）m（0.51.0）m，25培养时形成周鞭毛，呈翻滚旋转状运动，37培养无动力，无芽胞，无荚膜的革兰阴性球杆菌。（2）培养：需氧或兼性厌氧，440均能生长，最适生长温度为2028。普通营养琼脂上生长良好，在血琼脂平板上，形成直径为12mm，圆形光滑，凸起的菌落。能在选择培养基如麦康凯培养基上生长，形成不发酵乳糖的无色、透明或半透明、扁平、较小的菌落。在SS琼脂板上生长不良。液体培养基中呈浑浊生长，液体表面可形成白色菌膜或有沉淀生成。（3）生化反应：分解葡萄糖和蔗糖产酸不产气，绝大多数菌株不发酵乳糖，硫化氢阴性，脲酶阳性，靛基质不定。VP试验25阳性，37阴性，鸟氨