常见抑菌食品的抑菌效果探究实验报告.doc

微生物自主实验常见抑菌食品的抑菌效果探究姓名： 学号： 组别： 同组人员： 实验日期： 摘要：本实验对日常生活中常见的抑菌食品大蒜、生姜、洋葱、和辣椒的抑菌效果进行了研究，利用平板涂布菌种（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌），再铺上沾有不同食物汁液的滤纸片，恒温培养后通过测定抑菌圈的大小探究四种物质对三种菌的抑菌效果。一、实验背景我们平常食用的一些食物具有一定的抑菌作用，本实验选用的抑菌食品有：大蒜、生姜、洋葱和辣椒。1、 大蒜：大蒜中的蒜素具有抑菌和杀菌作用，是目前所知的最好天然广谱抗菌食品。常吃大蒜可防治流感、细菌性痢疾、脑炎、大叶性肺炎、伤寒等传染病。大蒜制膏涂抹外伤局部，能防治感染且加速伤口愈合。2、 生姜：生姜中含有萜类化合物,如姜油醇、姜油酮、龙脑柠檬醛等,它们都具有较强的杀菌作用。3、 洋葱：洋葱中含有植物杀菌素如大蒜素等，因而有很强的杀菌能力。嚼生洋葱可以预防感冒。4、辣椒：辣椒中含有辣椒素，它是使辣椒呈现辣味的物质，有关研究表明辣椒素具有一定的抑菌作用。二、实验目的 通过所学的微生物实验技能，简单探讨和检测几种常见抑菌食品的抑菌、杀菌效果。 三、实验材料1.菌种：大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。2.培养基：1000ml牛肉膏蛋白胨固体培养基(牛肉膏 3.0g , 蛋白胨 10.0g, NaCl 5.0g, 琼脂20g, 水1000mL, pH7.4-7.6 ) 100mL牛肉膏蛋白胨液体培养基(牛肉膏0.3g, 蛋白胨1g, NaCl 0.5g ,水100mL, pH7.4-7.6)。3.抑菌食品：大蒜、生姜、洋葱、辣椒。4.仪器及用具：电子秤、烧杯、电磁炉、三角瓶、无菌水、涂布器、纱布、滤菌膜、注射器、无菌培养皿（12个）、酒精灯、移液枪、枪头、圆滤纸片、镊子、37、离心管（5mL）、恒温摇床，恒温培养箱等。四、实验步骤 (一)实验前期准备：1.培养基的制备：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（1000mL），牛肉膏蛋白胨液体培养基（100mL）分装在三角瓶中；2.灭菌：牛肉膏蛋白胨固体及液体培养基、12个培养皿、若干圆滤纸片（放在一个培养皿中）、若干5mL离心管，3支试管，黄色枪头若干，取以上用品进行高压蒸汽灭菌；3. 菌液的制备：将牛肉膏蛋白胨液体培养基装入3支已灭菌的试管中，将大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌斜面菌种分别接种到三支试管中（此两步操作在超净工作台中进行），倾斜置于恒温摇床中37300r/min摇动5小时。(二)抑菌效果的测定： 1.取大蒜、生姜、洋葱、辣椒四种食物，分别小刀切碎，过滤（先用两层纱布过滤压榨出汁，再用六层纱布过滤，最后用滤纸过滤），利用过滤器滤除细菌，直接滤至八支5mL离心管中（每种滤液分装两支离心管，最终每支离心管所装滤液约为2mL，此步操作在超净工作台中进行）。分别将四组离心管中的一支置于大烧杯中沸水浴3min，冷却后将若干滤纸片放入离心管中浸泡备用（此步操作在超净工作台中进行）。2.将牛肉膏蛋白胨固体培养基加热溶解后倒12个平板，并做好标记，每种物质设置不加热和加热两个对照，每个对照重复两次，在培养皿底部按图1所示标记。图1 接种平板标记示意图3.待凝固后分别将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种到平板中（用移液枪取0.2mL菌液置于相应平板中，进行涂布，此步操作在超净工作台中进行）。4. 将接种好的平板静置5min，按照上述标记，将事先准备好的浸泡在提取液中的滤纸片放置于平板中相应的区域内（此步操作在超净工作台中进行），放置5min后，置于37恒温培养箱中培养24小时。五、实验结果分析1.用直尺测量培养皿上滤纸片周围的抑菌圈直径（含滤纸片）结果见表1.表1 不同食物的抑菌圈大小菌种食品种类抑菌圈大小（cm）圈1圈2平均值大肠杆菌大蒜1.70 1.66 1.68 大蒜（加热）1.20 0.72 0.96 生姜0.00 0.00 0.00 生姜（加热）0.00 0.00 0.00 辣椒0.00 0.00 0.00 辣椒（加热）0.00 0.00 0.00 洋葱0.00 0.00 0.00 洋葱（加热）0.00 0.00 0.00 金黄色葡萄球菌大蒜2.00 1.60 1.80 大蒜（加热）1.40 1.80 1.60 生姜0.00 0.00 0.00 生姜（加热）0.00 0.00 0.00 辣椒0.00 0.00 0.00 辣椒（加热）0.00 0.00 0.00 洋葱0.00 0.00 0.00 洋葱（加热）0.00 0.00 0.00 枯草芽孢杆菌大蒜1.14 1.30 1.22 大蒜（加热）1.40 1.30 1.35 生姜0.70 0.75 0.73 生姜（加热）0.70 0.75 0.73 辣椒0.70 0.65 0.68 辣椒（加热）0.75 1.00 0.88 洋葱0.65 0.70 0.68 洋葱（加热）0.65 0.85 0.75 2.绘制每种食物在不加热和加热处理后对不同菌种的抑菌圈平均直径条形图。 大蒜对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌均有抑菌效果，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌不加热效果强于加热，对枯草芽孢杆菌加热效果强于不加热。图2 大蒜的抑菌效果 生姜对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌无抑菌效果，对枯草芽孢杆菌加热与不加热的抑菌效果相同。图3 生姜的抑菌效果 辣椒对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌无抑菌效果，对枯草芽孢杆菌加热的效果强于不加热。图4 辣椒的抑菌效果洋葱对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌无抑菌效果，对枯草芽孢杆菌加热的效果强于不加热。图5 洋葱的抑菌效果3.因只有枯草芽孢杆菌是这四种食物都能够抑制的，所以选用枯草芽孢杆菌来比较四种食物对同一菌种的抑菌效果，可见大蒜对枯草芽孢杆菌的抑菌效果明显高于另外三种食物（图6）。图6 四种食物对枯草芽孢杆菌的抑制效果六、讨论由实验结果可知，在我们选取的四种抑菌食物中，大蒜的抑菌效果最好，对大肠杆菌、金黄葡萄球菌、枯草芽孢杆菌均有抑制作用，且抑菌圈较大，直径大多在1cm以上，甚至接近2cm。生姜、辣椒、洋葱对大肠杆菌和金黄葡萄球菌没有抑制作用，只对枯草芽孢杆菌有抑制作用，且抑菌圈较小，绝大多数直径在1cm以下。在生活中我们通常把味道辛辣的食材都视为有抑菌作用，但本实验结果表明，对于选取的三个菌种，除大蒜能抑制多种菌的生长外，生姜、辣椒、洋葱只能抑制枯草芽孢杆菌的生长。可能原因为枯草芽孢杆菌本身就对某些物质比较敏感，因而能受到多种食物的抑制，而这些食物对其他细菌并没有普遍的抑制作用。过去我们猜测抑菌食物中起抑菌作用的生物活性物质经高温处理后会失去活性，抑菌效果降低，但是本实验结果表明对于枯草芽孢杆菌，大蒜、生姜、辣椒、洋葱加热好的效果均强于或等于不加热的效果，但是枯草芽孢杆菌是单一菌种，并不具有很强的代表性。大蒜对于大肠杆菌和金黄葡萄球菌加热后的效果均不及未加热。不同食物对于不同菌种起抑制作用的物质