细菌芽孢染色及酵母菌的观察.doc

实验五 细菌芽孢染色及酵母菌的观察姓名：贾晓霖学号：201000140032班级：生科10.1同组人：李江湲 程子修 洪钧烨一、 实验目的1、 学习芽孢染色法，了解芽孢的形态特征。2、 观察酵母菌形态及出芽方式，区分酵母死活细胞。3、 学习酵母子体孢子的观察方法。二、 原理1、芽孢染色法芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或处理，则菌体和芽孢易于区分。2、酵母菌的繁殖方式 酵母菌是一类单细胞的真核微生物的通俗名称。其繁殖方式包括无性繁殖和有性繁殖。无性繁殖方式包括芽殖和裂殖。芽殖是酵母菌最普遍的繁殖方式。其过程是：成熟的母细胞在其形成芽体的部位长出芽细胞，芽细胞脱离母体，成为新的个体细胞。如果不脱离母细胞，又长出新芽，子细胞就和母细胞连接在一起，形成藕节状或竹节状的细胞串，称为假菌丝或真菌丝。少数酵母以裂殖方式进行繁殖，当母细胞长到一定大小时，细胞核开始分裂，之后，在细胞中间产生一隔膜，将细胞一分为二。还有些酵母菌可形成一些无性孢子如节孢子、掷孢子、厚垣孢子等。有性繁殖则是通过形成子囊和子囊孢子。三、 实验器材1、 菌种芽孢：枯草芽孢杆菌 梭状芽胞杆菌酵母：酿酒酵母（产孢培养基 7天）2、 溶液和试剂5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液，95%乙醇。0.01%美蓝水溶液。、3、 仪器和其他用品酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，小试管，试管架，木夹，滴管和蒸馏水等。四、 实验内容1、 芽孢染色（说明一下我做的是梭状芽孢杆菌）1、 涂片 在洁净的载玻片中央滴两小滴蒸馏水，点燃酒精灯，在火焰旁边从枯草芽孢杆菌、梭状芽胞杆菌菌种斜面分别挑取少量菌体加到两滴蒸馏水中，与水滴充分混匀。2、 干燥 加热干燥，使菌固定。3、 染色 木夹夹住载玻片，滴加孔雀绿覆盖菌种，待染液冒出蒸气时，开始计时5min，过程中需不断补加染液，以免载玻片温度过高致使芽孢变形。4、 水洗 冷却后用缓水流从载玻片反面冲洗，直到水流无色。5、 复染 滴加番红染液，复染2min。6、 干燥、镜检 自然干燥后，放置于油镜下镜检。附：实验照片2、 酵母菌（1） 美蓝浸片准备两块玻片，分别在玻片中央滴加一滴美蓝染液，接种少量酵母菌，分别放置3min和30min镜检（1040）。附：实验照片左：3min 右：30min（2） 子体观察1、涂片 在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴蒸馏水，点燃酒精灯，在火焰旁边从酵母菌菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀。2、干燥 自然干燥，使其固定。3、染色 滴加孔雀绿染液，覆盖11.5min。4、水洗 用缓水流从载玻片反面冲洗，直到水流无色。5、脱色 用95%乙醇冲洗并覆盖菌体30s。6、水洗 用缓水流从载玻片反面冲洗。7、复染 滴加番红染液，覆盖30s1min。8、干燥、镜检 水洗过后，自然干燥，放置于油镜下镜检。附：实验照片五、 思考题1、 为什么芽孢染色需要进行加热？能否用简单染色法观察细菌芽胞？答：因为与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚，通透性低而不易着色，而加热时芽孢的通透性高，此时染液可以进入从而使芽孢着色，而简单染色法不能使芽孢染色，所以不能看到。2、 若在你的制片中仅看到游离芽孢，而很少看到芽孢囊和营养细胞，试分析原因。答：如果只看到芽孢，可能是：（1） 菌种培养的环境太恶劣了，营养体几乎都变成芽孢了。（2） 可能是给芽孢染色用水洗时没洗干净，细胞还是孔雀绿的色彩。（3） 复染出现问题了，可能