微生物学实验复习提纲.doc

微生物学实验复习提纲1.研究微生物学的基本技术有哪些（显微镜技术、无菌技术、纯种分离技术和纯种培养技术）2.光学显微镜又称“复式显微镜”，由哪两部分组成？显微镜的什么最为关键？为什么？答：由机械装置和光学系统组成 物镜的性能最为关键，因为它直接影响着显微镜的分辨率3.油镜的放大倍数为多少？与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头间滴加什么？其什么作用？答：10*100 需要滴加镜油 增加照明亮度和增加显微镜的分辨率4.影响显微镜分辨率的因素有哪些？（光源的波长、物镜的镜口角和镜头间介质的折射率）5.油镜使用后应怎样处理？镜油擦拭的正确方法是怎样的？答：用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留的油迹，最后再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯6.制造接种环、接种针的金属常用铂或镍,原因是软硬适度，能经受火焰反复灼烧，又易冷却.7.培养皿的包装一般以多少套作一包比较合适？58套。8.灭菌吸管的包装的注意事项：（1）吸管必须干燥;(2)在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段约1.5cm长的棉花（不能用脱脂棉）。作用是避免外界及口中杂菌吸入管内，并防止菌液等吸入口中。9.空的玻璃器皿一般用 干热灭菌 ，若用湿热灭菌。则要多用几层报纸包扎，外面最好加一层牛皮纸或铝箔。10.接种环在用前必须烧灼灭菌，用后也应立即烧灼。11.简单染色的原理是什么？其主要操作步骤是什么？固定的作用是什么？染色过程中应注意哪些环节？答：原理及步骤健实验课本71页。固定作用：使细胞质凝固，使细胞固定在载玻片上12. 革兰氏染的原理及步骤是什么？革兰氏染色后的正确结果是什么颜色？答：原理见实验课本82页 步骤：初染、媒染、脱色、复染 结果颜色：阳性：菌体保持原有的蓝紫色阴性：洗脱后菌体变为无色，用复染剂染色后又变为复染剂颜色13.你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？答：（1）涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性； （2）脱色，此环节最关键。脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌；脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。 （3）菌龄也影响染色结果。如阳性菌培养时间过长或已死亡及部分菌自行溶解了，会出现阴性反应。14.酵母的死细胞和活细胞可通过哪些方式鉴别？答：1.、用美蓝液对酵母菌染色后，活细胞为无色，死细胞为蓝色 2、平板菌落计数法15.霉菌的直接制片观察法常用什么染色剂？此染液的优点是什么？答：乳酸石碳酸棉蓝染液 优点：石碳酸可以杀死菌体及孢子并可以防腐，乳酸可以保持菌体不变形，棉蓝使菌体着色。16.细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类微生物的菌落各有何特点？答：细菌：湿润、光滑、透明、粘稠、易挑起、质地均匀、菌落各部位的颜色一致等。 放线菌：质地致密、丝绒状或有皱折、干燥，不透明，上覆盖有不同颜色的干粉（孢子），菌落正反面的颜色常不一致，基内菌丝与培养基结合较紧，难以挑起。 酵母菌：菌落与细菌的相仿，比细菌菌落大而且厚，菌落表面湿润、粘稠、易被挑起，其颜色多为乳白色，少数为红色。同时会散发出悦人的酒香味。 霉菌：菌落形态较大，质地疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松的蛛网状、绒毛状或棉絮状；菌落与培养基的连接紧密，不易挑取，菌落正反面的颜色和边缘与中心的颜色常不一致等。17.为什么霉菌菌落的中央与边远、正面与反面在外形、颜色、构造等方面常有明显的差别？放线菌、细菌和酵母菌呢？（理解）18.测量微生物大小的工具是什么？包括哪两部分？功能各是什么？答：显微测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺，目镜测微尺测量细胞大小，镜台测微尺校正目镜测微尺每格的相对长度19.如何校正目镜测微尺刻度？计算公式？更换不同放大倍数的目镜活物镜时，是否需要重新校正？答：校正方法、公式见实验课本49页，需要重新校正20.培养基按化学成分、物理状态、用途划分可分为哪几种类型？答：化学成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基 物理状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基 用途：基础培养基、鉴别培养基、选择培养基21.实验常用的凝固剂是哪一种？固体培养基、半固体培养基及液体培养基加凝固剂琼脂的量为多少？琼脂在什么温度下溶化？什么温度下凝固？答：常用凝固剂是琼脂，分别为12%，0.5% 96C下融化，40C凝固22.配制培养基时应遵循哪些原则？配制培养基的一般方法和步骤是什么？配制培养基时不可用铜锅或铁锅，原因是什么？调pH一般用什么试剂调？配制pH低的琼脂培养基时，应怎样配制？答：原则：目的明确、营养协调、理化适宜、经济节约 方法：生态模拟、参阅文献、精心设计、试验比较 用磷酸缓冲液和碳酸钙做调节剂23.培养基分装时，液体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？固体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？半固体分装高度以试管的多少为宜？答：液体：试管高度的14,三角瓶的试管高度的12,固体：试管高度的15，三角瓶的12，半固体：试管高度的1324.培养基灭菌时外用牛皮纸包扎的目的是什么？答：防止灭菌时冷凝水润湿棉塞25.摆斜面的正确方法是什么？答：试管口搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。26.棉塞的作用是什么？正确的棉塞要求是什么？棉塞的长度多少在管口外，多少在管内为宜？作棉塞的棉花要求是什么？能否用脱脂棉？为什么？答：作用：阻止外界微生物进入培养基内造成污染和能通气27.培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如果来不及灭菌应如何处理？答：28.牛肉膏蛋白胨培养基、高氏号培养基、马丁氏培养基、马铃薯（PDA）培养基、麦芽汁培养基或豆芽汁培养基分别培养什么微生物？答：分别培养细菌、放线菌、真菌、29.什么是选择性培养基？试分析教材P98酵母菌富集培养基和Ashby无氮培养基的选择原理。答：在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长30.什么是鉴别性培养基？试以EMB培养基为例，分析其鉴别作用的原理。答：用于鉴别不同类型微生物的培养基，微生物产生某种代谢产物，与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征变化31.蛋白胨称取时应怎样？为什么？溶解可溶性淀粉的正确方法是什么？高氏号培养基中0.001%FeSO4 7H2O配制的正确方法是什么？答：称取时动作要迅速，因为其很容易吸湿。称取可溶性淀粉放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。 先在100ml水中加入1gFeSO4 7H2O，配成0.01gml，再在1000ml培养基中加1ml的0.01gml的贮备液即可。32.配制合成培养基加微量元素时最好用什么方法加入？天然培养基为什么不需要另加微量元素？答：33.马丁氏培养基中孟加拉红、链霉素的作用是什么？链霉素应如何加入？答：它们能够有效地抑制细菌和放线菌的生长。链霉素先用无菌水配成1%的溶液，然后在100ml培养基中加1%链霉素液0.3ml，使每毫升培养基中含链霉素30ug.34.采用什么方法能分离到能分解并利用苯作为碳源和能源物质的细菌纯培养？（以苯作为唯一碳源的选择培养基）答：从苯含量较高的环境中采集土样或水样；配制培养基，倒平板，一般仅以苯作为唯一碳源（A），另一种不含任何碳源作为对照（B）；将样品适当稀释（十倍稀释法），涂布A平板；将平板置于温度适当的条件下（37）培养，观察是否有菌落产生；将A平板上的菌落编号并分别转接至B平板，置于相同温度条件下培养（在B平板上生长的菌落可利用空气中的CO2的自养型微生物）；挑取在A平板上生长而不在B平板上生长的菌落，在一个新的A平板上划线、培养，获得单菌落，初步确定为可利用苯作为碳源和能源的微生物纯培养物；将初步确定的目标菌株转接至以苯作为唯一碳源的液体培养基中进行摇瓶发酵实验，利用相应的化学分析方法定量分析该菌株分解苯的情况。35.什么是灭菌？消毒？列表比较高温灭菌或消毒的各大方法的温度、时间、适用对象？答：灭菌：采用强烈的理化因素使物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。如高温。消毒：采用较温和的理化因素，杀死物体表面或内部的一部分对人体有害的病原菌，而对被处理物体基本无害的措施。如75%酒精。36.干热灭菌原理是什么？为什么干热灭菌比湿热灭菌所需要的温度高，时间长？答：原理见课本175页。由于空气传热穿透力差，菌体在脱水状态下不易杀死，所以温度高、时间长。 37.在干热灭菌过程中应注意哪些问题,为什么？答：1 干热过程中，严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。电热干燥箱具有可以观察的窗口，灭菌过程中玻璃温度较高，注意避免烫伤。 2 电热干燥箱内温度未降到70C以前，切勿自行打开箱门，以免骤然降温导致玻璃器皿炸裂。 3 物品不要摆的太挤，以免妨碍空气流通，灭菌物品不要接触电热干燥箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火。38.高压蒸汽灭菌的关键技术是什么？（压力上升之前需将锅内冷空气排尽）39.高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内的冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么待压力降低“0”时才能打开排气阀，开盖取物？答：1 灭菌的主要因素是温度而不是压力，因此锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀 2 否则就会因为锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至烫伤操作者。 40.对含糖（如葡萄糖或乳糖等）培养基进行高压蒸汽灭菌时，应采用大多压力、多长时间灭菌为宜？答：0.1MPa,121C，1530min41.对血清、噬菌体浓缩液、氨基酸溶液、维生素溶液、抗生素溶液能否进行高压蒸汽灭菌？应采用何种方法除菌为宜？答：不能，采用微孔滤膜过滤除菌法为宜。42.紫外线灭菌的原理及适用对象是什么？答：原理：紫外线波长在200nm300nm具有杀菌作用，其中265266nm杀菌力最强。此波长的紫外线易被细胞中核酸吸收，造成细胞损伤而杀菌。适用对象：无菌室、接种箱、手术室内的空气及物体表面的灭菌。43.过滤除菌法的适用对象是什么？缺点是什么？答：只适用于实验室中小量溶液的过滤除菌，缺点是虑量有限。44.微生物的平板分离纯化技术是哪位科学家发明的？答：德国人科赫45.微生物分离纯化常用的方法有哪些？答：划线法、单细胞挑取法、稀释平板法、选择培养基法 46.如果要从自然界中筛选能产高温蛋白酶的菌株，你将如何完成？写出简明的实验方案。答：见老师上课第八章老师说的关于放线菌的分离方案。47.如果用牛肉膏蛋白胨培养基分离一种对青霉素具有抗性的细菌，你认为该如何做？答：在培养基中加入少量青霉素48.稀释分离时，为什么要将已融化的琼脂培养基冷却到4550左右才能倾入到装有菌液的皿内？答：如果高于50会将菌体烫死，低于45培养基会凝固，不能倒平板。49.在恒温箱中培养微生物时为何培养皿均需倒置？答：防止培养基水分蒸发防止冷凝水的流动造成平板表面的“交叉感染”，影响单个菌落的形成防止外物掉在培养基上。50.请设计分离筛选下列微生物菌种的试验方案（提示：包括采样、稀释液制备、培养基名称、培养温度、培养时间、分离纯化方法等）（1）土壤中链霉素产生菌的分离、纯化（2）啤酒泥或酒曲发酵窖泥中酵母菌的分离、纯化（3）甜酒药曲或酿酒种曲中霉菌的分离、纯化51.常用菌种保藏方法有哪些？有何优缺点？答：斜面保藏法：菌种管置4冰箱保藏，定时传代 石蜡油封藏法：橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。沙土管保藏法：将菌种置于土壤、细纱干燥材料上保藏。适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏，保藏时间几至几十年。真空冷冻干燥法：加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间长，是目前最好的保藏方法之一。液氮超低温保藏法：将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低温冰箱中（ -196）。适用于各种微生物的较理想的保藏方法之一。 52.ATCC采用菌种保藏的方法是什么？答：冷冻干燥保藏法和液氮保藏法53.常用于测定微生物数量的方法有哪些？答：1 个体计数法：直接法：血球计数板法、涂片染色法；间接法：平板菌落数法，薄膜过滤计数法，比浊法。2 重量法 3 生理指标法54.什么是显微直接计数法？工具是什么？此方法的优缺点？缺点怎样克服？答：指用计数板在光学显微镜下直接观察细胞并进行计数的方法。工具：血细胞计数板、显微镜 优点：直观、快速、操作简单 缺点：所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和，且难以对运动性强的活菌进行计数 克服方法：综合活菌染色、微室培养以及加细胞分裂抑制剂等只计数活菌体55.利用血球计数板计数时，如何计数？计算公式？答：以25个中方格的计数板为例，设5个中方格的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，则：1ml菌液中的总菌数=(A5)*25*56.简述测定化学消毒剂的杀（抑）菌作用的滤纸片法。答：见实验课本94页57.某公司推出一种新型饮料，并声称是100的纯天然产品，不含防腐剂，利用你所掌握的微生物学知识，试设计一个简单实验来初步判断此饮料是否含防腐剂。58.根据深层琼脂培养的特征来判断好氧菌、微好氧菌、兼性厌氧菌、专性厌氧菌、耐氧厌氧菌。P10359.什么是IMViC试验？硫化氢试验？作用是什么？各试验的原理是什么？结果是什么？答：见实验课本117页60.我国卫生部门规定的饮用水标准是什么？答：1mL自来水中的细菌总数不可超过100个（37，培养24h），而1000mL自来水中的大肠菌群数则不能超过3个（37，培养24h）。61.水中细菌总数和大肠菌群值各反映了什么？62.水中细菌总数的测定的方法是什么？自来水、湖